一种当归药材的检测方法
【专利摘要】本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种当归药材的检测方法。该检测方法包括当归药材中藁本内酯和阿魏酸的含量测定以及农药残留量的测定。本发明的检测方法不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且可同时完成多个检测指标，准确率及实用效果均较好，更有利于对当归药材质量的控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
【专利说明】一种当归药材的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种当归药材的质量检测方法。
【背景技术】
[0002] 当归为伞形科植物当归的干燥根，当归味甘、辛、性温，具有补血活血、调经止痛、 促进血液循环、抗炎镇痛、保肝利胆、润肠通便等功效。当归药用历史悠久，历代本草均有记 载，是中医常用中草药之一，素有"十方九归"之称。在卫生部公布的《关于进一步规范保健 食品原料管理的通知》中，当归为可用于保健食品的原料。当归为甘肃道地药材，甘肃岷县 当归（俗称"岷归")，已有1700多年的栽培历史，是中国当归原产地和主产地，2002年获得 中国当归原产地地理标记【中华人民共和国质检总局（2002)年第133号】，种植面积产量占 全国90%。
[0003] 当归的成分大体上分为两部分：一部分为脂溶性物质（当归油），另一部分为水溶 性物质（当归多糖类物质）。当归油具有补血活血、促进血液循环、缓解血管平滑肌痉挛、抗 炎镇痛、平喘、保肝利胆等作用，可治疗月经不调、痛经、子宫肌瘤及哮喘治疗等病症，也被 用于治疗心脑血管疾病，是目前市场上较为畅销的医药中间体和保健食品原料，同时当归 油也还广泛应用于化妆品及香料工业。
[0004] 中药材的质量直接影响中药产品的品质及药效，衡量中药材质量标准除中药自身 的有效成分外，还包括化学农药及重金属的污染情况。近年来，中药领域的大力发展以及中 药材需求量的加大，导致大量伪劣药材的上市，其中不少伪品的农药残留量严重超标，给当 归药材的质量、用药的安全性及有效性造成了很大的冲击。药材农药残留问题日益引起世 界各国的重视，国际上从1970年起开始研究药材农药残留量问题，1980年世界卫生组织将 农药残留测定单独列为检测项目，近年来成为世界性的研究热点。
[0005] 但是，现存的当归药材的检测方法或者只进行有效成分的含量测定，或者只测定 其农药残留量，检测指标比较单一，而且对农药的检测也大多借鉴于其他产品的检测方法， 并没有针对当归药材常见农药的一次性检出方法，导致对于当归药材常见农药的检测需要 多次检测才能完全，不利于当归药材的质量控制以及当归使用的安全性和稳定性。因此，建 立一种快速、全面、针对性强的当归药材的质量检测方法具有重要的意义。
【发明内容】
[0006] 为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中当归药材检测指标单一，不利 于当归药材的质量控制，进而提供一种快速、全面、针对性强的当归药材的检测方法。
[0007] 本发明的当归药材的检测方法，该方法包括如下有效成分的含量测定步骤以及农 药残留量的测定步骤，其中，
[0008] A、藁本内酯的含量测定包括如下步骤：
[0009] (1)精密称取藁本内酯对照品10. 14mg，加乙腈定容至10mL，得到每lmL含 1.014mg的储备溶液；精密吸取5mL上述储备溶液，加乙腈定容至50mL，得到每lmL含 101. 4yg的对照品溶液；
[0010] (2)精密称定待测当归药材粉末0. 2g，精密加入70%甲醇20mL，称定重量，超声40 分钟；用70%甲醇补足减失的重量，摇匀静置，取上清液经0. 45 μ m滤膜滤过，取续滤液，即 得供试品溶液；
[0011] (3)照高效液相色谱法试验，以Diamonsil ODS C18柱为色谱柱；以乙腈为流动相 A、以1 %的乙酸水溶液为流动相B，控制流速为1. OmL/min进行梯度洗脱，上述洗脱梯度程 序具体为：〇_15min，A :B 为 38%:62%;15-20min，A :B 为 38%:62%- 70%:30%;20-40min， A :B为70% :30% ;在328nm检测波长，柱温为室温条件下测定；分别精密吸取对照品、供试 品溶液各10 μ L注入液相色谱仪，测定；理论板数按藁本内酯峰计算应不低于5000 ;
[0012] Β、阿魏酸的含量测定包括如下步骤：
[0013] (1)精密称取阿魏酸对照品10mg，置棕色量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至50mL ; 精密量取3mL溶液，加70%甲醇定容至50mL，摇匀得每lmL含12 μ g阿魏酸的对照品溶液；
[0014] (2)精密称取待测当归药材粉末0· 2g，加入70%甲醇20mL，称定重量，加热回流30 分钟，放冷后再称定重量，并用70%甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过， 取续滤液，得供试品溶液；
[0015] (3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17 : 83的乙腈-0. 085%磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm ;柱温35°C ;分别精密吸取 对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定；
[0016] C、农药残留量的测定包括如下步骤：
[0017] (1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每lmL含100 μ g三苯基磷酸酯的溶 液，作为内标贮备液；
[0018] 分别精密量取各农药对照品贮备溶液lmL及上述内标贮备液lmL，加丙酮定容至 100mL，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不 同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；
[0019] 另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每lmL含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山 梨醇适量，加水溶解制成每lmL含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨 醇溶液各lmL混勻，加乙腈定容至10mL，作为分析保护剂；
[0020] (2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠 lg混匀，精密加入丙酮100mL，冰 浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有lg无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30 分钟；随后精密量取上述溶液60mL减压浓缩至近干，并加入体积比为1 :1的环已烷-乙酸 乙酯溶液溶解样品并定容至10mL，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1 : 1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；
[0021] 向上述样品中加入体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并转移至 石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗 脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入上述内标贮备液5 μ L，加乙腈定容至lmL，作为供试 品溶液；
[0022] (3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400 μ L，并分别加入上 述分析保护剂1〇〇 μ L混匀，随后分别精密吸取1 μ L，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其 中，
[0023] 上述气相色谱分析条件为：取规格为30mX0. 25mmX0. 25um的弹性石英毛细管柱 DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1. 3mL/分钟，进样量1 μ L，采用高压不分流进样，设置 进样口温度为230°C，升温程序具体为：初始温度60°C，以30°C /分钟升至120°C、以10°C / 分钟升至200°C、以2°C /分钟升至230°C、以30°C /分钟升至300°C，并保持7分钟；
[0024] 上述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230°C，接口温度 250。。。
[0025] 本发明的当归药材的检测方法，上述农药残留量的测定中，上述GPC凝胶渗透色 谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3200-400目，净化柱为2. 5_X40cm，具 体洗脱参数为净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。
[0026] 本发明的当归药材的检测方法，农药残留量的测定中，上述农药对照品包括敌 敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、 S -六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯 胺、百菌清、甲基毒死蝶、艾氏齐?、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯 基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、 反式环氧七氯、三唑醇Α、三唑醇Β、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、 PP' -DDD、OP' -DDT、PP' -DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、 硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、 氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
[0027] 本发明的当归药材的检测方法，藁本内酯的含量测定中，上述供试品制备的超声 条件为功率200W，频率40kHz。
[0028] 本发明的当归药材的检测方法，藁本内酯的含量测定中，上述对照品溶液于_80°C 保存。
[0029] 本发明的的当归药材的检测方法，农药残留量的测定中，上述待测药材的粒径为 180-2000 μ m〇
[0030] 本发明上述方法通过对当归药材所含的有效成分含量的测定以及对当归药材农 药残留量的检测，进行当归药材真伪优劣的判定标准。本发明通过高效液相色谱法检测阿 魏酸和藁本内酯的含量，不仅准确且简单易行。本发明通过气相色谱-质谱联用的方式检 测药材的残留农药量，不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且通过对检测条件的特定 筛选，可一次性将当归药材中常见的农药种类进行一次性的有效检测，可同时完成多个检 测指标，上述方法准确率及实用效果均较好，更有利于对当归药材质量的控制，有助于提高 该药物使用的安全性和稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0031] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合 附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
[0032] 图1为实施例2中藁本内酯对照品的色谱图；
[0033] 图2为实施例2中藁本内酯样品的测定色谱图；
[0034] 图3为实施例3中农药标准品的全扫描气相色谱图；
[0035] 图4为实施例3中农药标准品的0-10分钟扫描气相色谱图；
[0036] 图5为实施例3中农药标准品的10-20分钟全扫描气相色谱图；
[0037] 图6为实施例3中农药标准品的20-40分钟全扫描气相色谱图。
【具体实施方式】
[0038] 下述实施例用于进一步说明本发明但不限于本发明。
[0039] 实施例1当归药材中阿魏酸的含量测定
[0040] 供试当归药材来源和产地见表1，按不同批次予以编号检测，检测的具体步骤如 下：
[0041] (1)精密称取阿魏酸对照品l〇mg，置棕色量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至50mL ; 精密量取3mL溶液，加70%甲醇定容至50mL，摇匀得每lmL含12 μ g阿魏酸的对照品溶液；
[0042] (2)精密称取待测当归药材粉末0· 2g，加入70%甲醇20mL，称定重量，加热回流30 分钟，放冷后再称定重量，并用70%甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过， 取续滤液，得供试品溶液；
[0043] (3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17 : 83的乙腈-0. 085%磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm ;柱温35°C ;分别精密吸取 对照品溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定，理论板数按阿魏酸峰计算应不 低于5000 ;按干燥品当归药材计算，含阿魏酸不得少于0. 070%。
[0044] 对上述药材中阿魏酸含量的检测结果见表1。
[0045] 表1当归样品产地、来源及阿魏酸含量测定结果（％ )
[0046]
【权利要求】
1. 一种当归药材的检测方法，该方法包括如下藁本内酯和阿魏酸的含量测定步骤以及 农药残留量的测定步骤，其中， A、藁本内酯的含量测定包括如下步骤： (1) 精密称取藁本内酯对照品10. 14mg,加乙腈定容至10mL,得到每lmL含1. 014mg的 储备溶液；精密吸取5mL所述储备溶液，加乙腈定容至50mL，得到每lmL含101. 4 μ g的对 照品溶液； (2) 精密称定待测当归药材粉末0. 2g，精密加入70%甲醇20mL，称定重量，超声40分 钟；用70%甲醇补足减失的重量，摇匀静置，取上清液经0. 45 μ m滤膜滤过，取续滤液，即得 供试品溶液； (3) 照高效液相色谱法试验，以Diamonsil ODS C18柱为色谱柱；以乙腈为流动相A、以 1 %的乙酸水溶液为流动相B，控制流速为1. OmL/min进行梯度洗脱，所述洗脱梯度程序具 体为：0-15min，A :B 为 38% :62% ;15-20min，A :B 为 38% :62%- 70% :30% ;20-40min， A :B为70% :30% ;在328nm检测波长，柱温为室温条件下测定；分别精密吸取对照品、供试 品溶液各10 μ L注入液相色谱仪，测定；理论板数按藁本内酯峰计算应不低于5000 ; Β、阿魏酸的含量测定包括如下步骤： (1) 精密称取阿魏酸对照品l〇mg，置棕色量瓶中，加 70%甲醇溶解并稀释至50ml ;精密 量取3mL溶液，加 70%甲醇定容至50mL，摇匀得每lmL含12 μ g阿魏酸的对照品溶液； (2) 精密称取待测当归药材粉末0. 2g，加入70%甲醇20mL，称定重量，加热回流30分 钟，放冷后再称定重量，并用70 %甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过，取 续滤液，得供试品溶液； (3) 照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17 :83的 乙腈-0. 085%磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm ;柱温35°C;分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各10 μ L，注入液相色谱仪，测定； C、农药残留量的测定包括如下步骤： (1) 精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每lmL含100 μ g三苯基磷酸酯的溶液，作 为内标贮备液； 分别精密量取各农药对照品贮备溶液lmL及所述内标贮备液lmL，加丙酮定容至 100mL，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不 同浓度的溶液，作为混合对照品溶液； 另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每lmL含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇 适量，加水溶解制成每lmL含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶 液各lmL混勻，加乙腈定容至lOmL，作为分析保护剂； (2) 精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠 lg混匀，精密加入丙酮100mL，冰浴超声 处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有lg无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟； 随后精密量取上述溶液60mL减压浓缩至近干，并加入体积比为1 :1的环已烷-乙酸乙酯溶 液溶解样品并定容至10mL，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1 :1的环 已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干； 向上述样品中加入体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并转移至石墨 碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗脱，收集 洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5yL，加乙腈定容至lmL，作为供试品溶液； (3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400 μ L，并分别加入所述分 析保护剂1〇〇 μ L混匀，随后分别精密吸取1 μ L，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中， 所述气相色谱分析条件为：取规格为30mX0. 25mmX0. 25um的弹性石英毛细管柱 DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1. 3mL/分钟，进样量1 μ L，采用高压不分流进样，设置 进样口温度为230°C，升温程序具体为：初始温度60°C，以30°C /分钟升至120°C、以10°C / 分钟升至200°C、以2°C /分钟升至230°C、以30°C /分钟升至300°C，并保持7分钟； 所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230°C，接口温度 250。。。
2. 根据权利要求1所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定 中，所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3200-400目，净 化柱为2. 5mmX 40cm，具体洗脱参数为净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。
3. 根据权利要求1或2所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测 定中，所述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α -六六六、 β_六六六、六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷 胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲 基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲 戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、三唑醇Α、三唑醇Β、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反 式硫丹、PP' _DDE、PP' -DDD、0P' -DDT、PP' -DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷 酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀 螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。
4. 根据权利要求1-3任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述藁本内酯的 含量测定中，所述供试品制备的超声条件为功率200W，频率40kHz。
5. 根据权利要求1-4任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述藁本内酯的 含量测定中，所述对照品溶液于_80°C保存。
6. 根据权利要求1-5任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量 的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000 μ m。
【文档编号】G01N30/02GK104267110SQ201410375336
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年7月31日 优先权日:2014年7月31日
【发明者】杨锡, 陈杰, 李波, 韩斌, 李登鹏, 宋平顺, 何禄仁, 赵建邦, 王兰霞, 杨静 申请人:甘肃中天药业有限责任公司