一种灵敏度高的肌钙蛋白i检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒，包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，试剂R1组成及含量：Hopes缓冲液pH7.6、氯化钠80～150mmol/L、曲拉通X-1141～10g/L、亚铁氰化钾1ug/L~2ug/L、吡唑0.1～1g/L?；试剂R1组成及含量：甘氨酸缓冲液pH7.6?、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒1～5mL/L、N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.1～1g/L、吡唑0.1～1g/L；本发明提供的试剂盒的检测灵敏度高于现有同类试剂盒。
【专利说明】—种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种测定血清中肌钙蛋白I (Tn I)含量的试剂盒，属于临床体外检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肌I丐蛋白(Troponin, Tn)是组成横纹肌细丝的结构蛋白，其亚单位1、T、C组成复合物，在肌肉收缩和舒张过程中起重要作用。其中，心肌肌I丐蛋I (Caldiaetroponinl, CTnI)经大量的研究，已被证实为心肌损伤最特异性、最敏感的血清标志物之一，正逐渐取代肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)成为判断心肌损伤，特别是急性心肌梗塞(AMI)的“金标准”。因此，肌钙蛋白I目前已成为诊断心肌损伤的前提条件。
[0003]TnI是心肌细胞中的特有蛋白质。临床上其它非急性心肌梗死(AMI)也可由TnI释放，如不稳定心绞痛、充血性心衰，冠状动脉分流术造成的缺血性损伤。在急性心肌梗死时，血清心肌肌钙蛋白T(TnT)及心肌肌钙蛋白I (TnI)在2.7?4.9小时开始升高，5.8?29小时达到高峰值，83?168小时恢复正常。所以，血清心肌肌钙蛋白测定，有助于早期及中后期急性心肌梗死的诊断，尤其对于微小的、小灶性心肌梗死的诊断更有价值。不稳定型心绞痛、围手术期心肌损害及其他心肌损害等，心肌肌钙蛋白也均可增高。在急性心肌梗死后I?4天，血清中心肌肌钙蛋白I(TnI)浓度之比，可作为溶栓是否成功的指标之一。
[0004]AMI病人于发病后3?6小时升高，发病10?120小时内检测敏感性达100%，peaktime于发病后10?48小时左右出现，可达参考值的30?40倍。出现峰值较晚或峰值较高的病人增高可持续2?3周。对于非Q波M1、亚急性MI或用CK-MB无法判断预后的病人更有意义。因此心肌肌钙蛋白I的检测对心肌损伤病的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义。
[0005]目前市场上适用的肌钙蛋白I的检测方法有=ELISA法、放射免疫法、ELFA法、化学发光法，金标免疫法等，但分别收到检测线性范围小、操作复杂，稳定时间短、价格昂贵、只能定性分析，受主观因素影响大等原因受到了一定的局限。而目前市场上心肌肌钙蛋白I诊断试剂盒，在其性能及价格方面都有了较大的改善，并有全自动生化分析仪，形成了完整的检测系统，提高了心肌损伤的早期诊断效率。但是仍然存在低值灵敏度不够，阳性检测率相对较低的问题，使在检测时存在假阳性的问题，因此在检出率上还存在一定的局限。所以发明一种特异性好、灵敏度高的试剂盒具有非常重要的临床意义。
[0006]
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种检测肌钙蛋白I的方法，在试剂Rl中加入亚铁氰化钾，试剂R2中加入一定浓度的N-乙酰顺丁烯二酰亚胺，以克服现有技术的缺陷，显著提高试剂盒低值检测时的灵敏度及与‘金标准’化学发光相比阳性检测率的一致性。
[0008]本试剂盒包括体积比为3:1的试剂Rl和试剂R2，其组成分别为: 试剂I (Rl):
Hopes 缓冲液PH 7.6
氯化钠80?150mmol/L
曲拉通X-114I?10g/L
亚铁氰化钾lug/L?2 ug/L
吡唑0.1?I g/L;
试剂2 (R2):
甘氨酸缓冲液PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒I?5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.1?I g/L
吡唑0.1?I g/L。
[0009]制备方法:取各组分用缓冲溶液溶解达到规定浓度即可。
[0010]本发明提供的试剂盒，与其灵敏度和一致性显著提高。
【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0012]实施例1
I)本实施例所描述的肌钙蛋白I的检测试剂盒，包括试剂Rl和试剂R2:
其Rl的组成为:
Hopes 缓冲液PH 7.6
氯化钠120mmol/L
曲拉通X-1143g/L
亚铁氰化钾2 ug/L
吡唑0.8g/L ；
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.5 g/L
吡唑0.8 g/L。
[0013]2)市场同类肌钙蛋白I的检测试剂盒，包试剂Rl和试剂R2:
其Rl的组成为:
Hopes 缓冲液PH 7.6
氯化钠120mmol/L
表面活性剂3g/L
吡唑0.8g/L ；
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3mL/L
吡唑0.8 g/L3)本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的肌钙蛋白I检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，利用双试剂终点法进行测定。将Rl和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1:表1肌钙蛋白I检测试剂检测方法
【权利要求】
1.一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于，包括体积比为3:1的试剂Rl和试剂R2，其组成及含量分别为: 试剂Rl: Hopes 缓冲液PH 7.6 氯化钠80?150mmol/L 曲拉通X-114I?10g/L 亚铁氰化钾lug/L?2 ug/L 吡唑0.1?I g/L; 试剂R2: 甘氨酸缓冲液PH 7.6 羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 I?5mL/L N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.1?I g/L 吡唑0.1?I g/L。
【文档编号】G01N33/68GK104181309SQ201410418663
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】谭柏清, 罗维晓, 甘宜梧, 王绮, 李静 申请人:山东博科生物产业有限公司