一种疏风解毒胶囊的质量控制方法
【专利摘要】本发明提供一种疏风解毒胶囊的检测方法，采用高效液相色谱法同时检测疏风解毒胶囊中的戟马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酯单铵盐、大黄素，其中，高效液相色谱法的条件包括：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相包括：流动相A为乙腈，流动相B为酸性水溶液，进行梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：210nm～400nm；理论塔板数按大黄素峰计算，应不低于5000。本发明的检测方法，可以同时检测疏风解毒胶囊中戟马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酯单铵盐、大黄素这7种有效成分的含量，从而能够较为全面地表征疏风解毒胶囊活性组分，具有精密度、稳定性、重复性高的特点。
【专利说明】一种疏风解毒胶囊的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物分析检测【技术领域】，涉及一种疏风解毒胶囊的检测方法，特别是 涉及采用高效液相色谱（HPLC)同时检测所述疏风解毒胶囊的多种组分的检测方法。
【背景技术】
[0002] 现代药物具有稳定均一、安全、有效三大特性，其中稳定均一性是药品安全有效的 基础。而药品稳定均一性主要来源于药品制备工艺的全程控制和药品质量标准的科学评价 两个环节。中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，其化学成分的多样性与复杂性是 质量控制的难点。选取与处方功能主治相关联的化学组份，并采用HPLC等现代分析检测技 术进行准确测定和评价称为近来中药质量研究的热点之一。
[0003] 疏风解毒胶囊为安徽济人药业有限公司生产的中药大品种，由虎杖、板蓝根、芦 根、连翘、柴胡、马鞭草、甘草、败酱草8味药材组成的中药复方制剂，用于急性上呼吸道感 染属风热证，症见发热，恶心，咽痛，头痛，鼻塞，流浊涕，咳嗽等，临床疗效显著。疏风解毒胶 囊执行标准为国家食品药品监督管理局标准YBZ00652009,该标准中仅采用薄层扫描法测 定大黄素的含量，采用薄层鉴别方法定性鉴别连翘、马鞭草和柴胡，难以反映药品的整体质 量。本发明建立了同时测定疏风解毒胶囊中与功能主治密切相关的虎杖苷、大黄素、戟叶马 鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐7种指标成分的RP-HPLC方法，从 而较为全面有效地控制药品内在质量。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种检测疏风解毒胶囊的方法，该方法能够全面检测疏风解 毒胶囊的药物活性组分及其含量，从而表征和控制其内在质量。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0006] -方面，本发明提供了一种疏风解毒胶囊的检测方法，所述疏风解毒胶囊由虎杖、 板蓝根、芦根、连翘、柴胡、马鞭草、甘草、败酱草组成，所述检测方法包括采用高效液相色谱 法同时检测所述疏风解毒胶囊中的虎杖苷、大黄素、戟马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛 蕊花糖苷、甘草酸单铵盐，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：
[0007] 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
[0008] 流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0. 1%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；
[0009] 所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：
[0010] 0?651^11，流动相六为10?30%，流动相8为90%?70%;
[0011] 65?85min，流动相A为30 %?80 %，流动相B为70 %?20 %;
[0012] 85?87min，流动相A为80 %?10 %，流动相B为20 %?90 % ;
[0013] 87?lOOmin，流动相A为10%?10%，流动相B为90%?90%。
[0014] 所述高效液相色谱法的条件还包括：
[0015]流速：1.Oml/min;
[0016]柱温：3(TC;
[0017]检测波长：210nm?400nm;
[0018] 理论塔板数按大黄素峰计算，应不低于6000。
[0019] 其中，所述检测方法包括通过以下步骤制备对照品溶液：取虎杖苷对照品、大黄素 对照品、戟马鞭草苷对照品、马鞭草苷对照品、连翘酯苷A对照品、毛蕊花糖苷对照品、甘草 酸单铵盐对照品，加入甲醇溶解制成每lml含虎杖苷119. 2yg，大黄素53. 2yg，戟叶马鞭 草苷96. 0yg，马鞭草苷89. 2yg，连翘酯苷A58. 8yg，毛蕊花糖苷211. 2yg，甘草酸单铵盐 206. 0yg的溶液，作为混合对照品溶液。
[0020] 并且，所述检测方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取疏风解毒胶囊内容 物l.〇g，精密称定，置于50ml圆底烧瓶中，加入25ml70 %乙醇水溶液，称重，回流提取2h， 冷却后称重，用70%乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0021] 测定：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10Ul注入高效液相色谱仪，根 据以下色谱条件进行测定：
[0022] 采用上述方法可以对待测疏风解毒胶囊样品中的多指标成分进行测定，待测产品 的虎杖苷、大黄素、戟马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐含量范围 应为下述范围：虎杖苷5. 4?12.lmg/g、大黄素2. 9?7. 3mg/g、连翅酯苷A1. 2?5. 6mg/ g、毛蕊花糖苷1. 7?2. 2mg/g、戟马鞭草苷2. 6?3. 7mg/g、马鞭草苷3. 2?4. 6mg/g、甘草 酯单铵盐4. 7?7. 7mg/g。
[0023] 以下是本发明的详细描述。
[0024] 色谱条件
[0025] 本实验考察对比了不同的流动相系统，包括甲醇-水、乙腈-水、甲醇_0. 1%甲酸 溶液、乙腈_〇. 1 %甲酸溶液，结果表明，以乙腈_〇. 1 %甲酸溶液体系为流动相，采用梯度洗 脱方法，样品中的待测组分分离较好，理论塔板数符合要求，故选用乙腈_〇. 1 %甲酸水作为 流动相。由于各指标成分的极性差异较大，必须采用梯度洗脱的方法进行分离分析。实验 中，考察了不同洗脱梯度，最后确定疏风解毒胶囊的梯度洗脱条件：乙腈为流动相A，0. 1% 甲酸为流动相B，0?65min，流动相A为10?30%，流动相B为90%?70% ;65?85min， 流动相A为30 %?80 %，流动相B为70 %?20 % ;85?87min，流动相A为80 %?10 %， 流动相8为20%?90%;87?1001^11，流动相六为10%?10%，流动相8为90%?90%。
[0026] 供试品溶液采用二极管阵列检测器（DAD)在210?400nm波长范围内进行全波长 扫描，并对各波长下的色谱图进行分析比较。先用甲醇溶液分别配制虎杖苷、大黄素、戟叶 马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐对照品溶液，进行紫外扫描，结 果可知，戟叶马鞭草苷、马鞭草苷在240nm处有最大吸收，虎杖苷在306nm处有最大吸收，连 翘酯苷A、毛蕊花糖苷在330nm处有最大吸收，甘草酸单铵盐、大黄素在250nm处有最大吸 收。分别对比供试品溶液在230nm、250nm、330nm波长下HPLC色谱图可知：在230nm检测波 长下，基线漂移；在330nm检测波长下，戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、甘草酸单铵盐、大黄素的 吸光度均较低；在250nm检测波长下，7种待测成分均具有较高的吸光度，分离度良好，符合 定量测定要求。故选择250nm作为检测波长。
[0027] 混合对照品溶液的制备
[0028] 分别精密称定虎杖苷、大黄素、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、 甘草酸单铵盐对照品适量，用甲醇溶解并稀释至刻度，即为混合对照品溶液。
[0029] 供试品溶液制备
[0030] 本实验以虎杖苷、大黄素、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草 酸单铵盐的含量为主要考察指标，优选了供试品溶液制备方法。对包括超声、回流和索氏提 取3种提取方式进行考察，结果表明采用回流提取时提取收率最高。另对回流提取条件包 括提取溶剂、提取时间、提取次数进行考察，实验结果表明，采用70%乙醇回流提取2h时， 提取效率最高。最终确定为取疏风解毒胶囊内容物1. 〇g，精密称定，置于50ml圆底烧瓶中， 加入25ml70%乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70%乙醇溶液补足失重，摇 匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0031]与现有技术相比，本发明提供的疏风解毒胶囊检测方法具有以下积极效果：
[0032]首先，本发明所涉及的疏风解毒胶囊内容物为8味中药组成，各个药材所含化学 成分复杂，对含量检测时各个成分相互造成干扰，在采用HPLC进行检测时，导致其他成分 对各指标成分干扰，使含量结果重复性差，所以必须严格控制流动相的色谱条件，才能使各 指标成分得到良好的特征峰。实验证明，只有采用本发明经过大量实验所得到的切实可行 的、特定的色谱条件，才能得到该药物的有效成分虎杖苷、大黄素、戟叶马鞭草苷、马鞭草 苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐的特征峰，从而实现了特征峰的有效分离。
[0033] 其次，本发明的方法可以同时对疏风解毒胶囊例如疏风解毒胶囊的主要有效成分 虎杖苷、大黄素、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐进行含量 检测，从而实现对疏风解毒胶囊的最大可能化学成分进行检测，有利于对其质量的全方面 监控，以使疏风解毒胶囊的质量控制方法更加完善。
[0034]并且，本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。在同一 测试条件下，同时实现了疏风解毒胶囊中虎杖苷、大黄素、戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、连翘 酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐的含量测定。
【专利附图】
【附图说明】
[0035] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0036] 图1为混合对照品的HPLC图，
[0037] 其中1为戟马鞭草苷，2为马鞭草苷，3为虎杖苷，4为连翘酯苷A，5为毛蕊花糖苷， 6为甘草酸单铵盐，7为大黄素；
[0038] 图2为疏风解毒胶囊内容物的HPLC图，
[0039] 其中1为戟马鞭草苷，2为马鞭草苷，3为虎杖苷，4为连翘酯苷A，5为毛蕊花糖苷， 6为甘草酸单铵盐，7为大黄素；
[0040] 图3至5分别为实施例5中试验的梯度洗脱条件1至3的HPLC图；
[0041] 图6为疏风解毒胶囊UPLC/Q-T0F及生物活性分析。
【具体实施方式】
[0042]为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结 合具体实施例和附图，进一步阐述本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非 全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得 其它实施例，都属于本专利的保护范围。
[0043] 以下各实施例中所使用的对照品来源如下：
[0044] 戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐、大黄 素对照品购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110713-201208、110737-201212、 111575-201302、111810-201306、111530-201305、110731-201310、110756-201310。
[0045] 以下各实施例中所使用的供试品疏风解毒胶囊为安徽济人药业有限公司按照国 家食品药品监督管理局标准YBZ00652009制备，制备过程中充分注重了处方中各药材的产 地属性、采收季节特征、工艺控制特征。制得的产品批号见下表1 :
[0046] 表1实施例中米用的疏风解毒胶囊的样品表
【权利要求】
1. 一种疏风解毒胶囊的检测方法，其特征在于，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝 根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成，所述检测方法包括采用高效液相色谱法同时检 测所述疏风解毒胶囊中的戟马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酯 单铵盐、大黄素，其中，所述高效液相色谱法的条件包括： 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0. 1%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱； 所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比： 0?651^11，流动相六为10?30%，流动相8为90%?70%; 65?85min，流动相A为30 %?80 %，流动相B为70 %?20 % ; 85?87min，流动相A为80 %?10 %，流动相B为20 %?90 % ; 87?lOOmin，流动相A为10%?10%，流动相B为90%?90%。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱法的条件还包 括： 流速：1. Oml/min ; 柱温：30°C ; 检测波长：210nm?400nm ; 理论塔板数按大黄素峰计算，应不低于6000。
3. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括通过以下步 骤制备对照品溶液：取戟马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酯单 铵盐、大黄素对照品，加入甲醇溶解制成每lml戟马鞭草苷96 y g，马鞭草苷89. 2 y g，虎 杖苷119. 2 y g，连翘酯苷A58. 8 y g，毛蕊花糖苷211. 2 y g，甘草酸单铵盐206 y g，大黄素 53. 2 y g的溶液，作为混合对照品溶液。
4. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述建立方法还包括通过以下步骤 制备供试品溶液：将疏风解毒胶囊内容物置于研钵中研成粉末状，称取1. 〇〇〇g药粉，置于 100ml圆底烧瓶中，加入25ml70 %乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70 %乙醇 溶液补足失重，滤过，作为供试品溶液。
5. 根据权利要求1至4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法包 括以下步骤： (1) 制备混合对照品溶液：取戟马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、 甘草酯单铵盐、大黄素，加入甲醇溶解制成每lml含戟马鞭草苷96 y g，马鞭草苷89. 2 y g， 虎杖苷119. 2 y g，连翘酯苷A58. 8 y g，毛蕊花糖苷211. 2 y g，甘草酸单铵盐206 y g，大黄素 53. 2 y g的溶液，作为混合对照品溶液； (2) 制备供试品溶液：将疏风解毒胶囊内容物置于研钵中研成粉末状，称取l.OOOg药 粉，置于l〇〇ml圆底烧瓶中，加入25ml70%乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用 70%乙醇溶液补足失重，滤过，作为供试品溶液； (3) 测定：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10 yl注入高效液相色谱仪，根据 以下色谱条件进行测定： 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0. 1%甲酸水溶液，进行梯度洗脱； 流速：1. Oml/min ; 柱温：30°C ; 紫外检测波长：250nm ; 流动相比例如下： 0?651^11，流动相六为10?30%，流动相8为90%?70%; 65?85min，流动相A为30 %?80 %，流动相B为70 %?20 % ; 85?87min，流动相A为80 %?10 %，流动相B为20 %?90 % ; 87?1001^11，流动相六为10%?10%，流动相8为90%?90%; 记录峰面积，采用外标法计算马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘 草酯单铵盐、大黄素的含量。
【文档编号】G01N30/02GK104330489SQ201410583418
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年10月27日 优先权日:2014年10月27日
【发明者】朱月信, 张铁军, 杨景生, 刘素香, 白雪, 邢雪飞, 丁连峰 申请人:安徽济人药业有限公司