一种连翘及含连翘产品的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种连翘及含连翘产品的检测方法，其对照品为五福花苷酸，或用连翘苷对照品为五福花苷酸替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量。在现有产品中，有个别商家为了以次充好，用连翘叶来替代连翘果实，导致最终产品效果差，发明人意外的发现：连翘叶中不含五福花苷酸，利用检测五福花苷酸可以控制连翘产品质量的合法性，以保证含连翘产品的质量。
【专利说明】一种连翘及含连翘产品的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药的检测方法领域，具体涉及一种连翘及含连翘产品的检测方法。
【背景技术】
[0002] 连翘是中国临床常用传统中药之一，又名黄花条、连壳、青翘、落翘、黄奇丹等，果 实入药。连翘是清热解毒的中药，主治热病初起，风热感冒，发热，心烦，咽喉肿痛，急性肾炎 等。
[0003] 连翅的入药部位为连翅（Forsythiasuspensa(Thunb. )Vahl)的干燥果实。秋季 果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称青翘；果实熟透时采收，晒干，除去杂 质，习称老翘。
[0004] 在《中国药典》2010年版中，有连翘提取物和连翘的含量检测方法，具体如下：
[0005] 连翘，有两种成分连翘苷（C27H34O14)、连翘酯苷（C29H36O15),限定连翘苷不低于 0. 15 %，连翘酯苷A不少于0. 25 %，具体含量检测方法为：
[0006] 连翘苷
[0007] 色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (25 :75)为流动相；检测波长为277nm，理论板数按连翘苷峰应不低于3000;
[0008] 对照品溶液的制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.2mg 的溶液，即得；
[0009] 供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz) 25分钟，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧 化铝0. 5g拌匀，加在中性氧化铝柱（100-200目，lg，内径为1-1. 5cm)上，用70%乙醇80ml 洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50 %甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。
[0010] 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各?〇μ1，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0011] 连翘酯苷A
[0012] 色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0. 4% 冰醋酸溶液（15 :85)为流动相；检测波长为330nm，理论板数按连翘酯苷F峰计算应不低于 5000；
[0013] 对照品溶液的制备：取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 O-Img的溶液，即得（临用配制）；
[0014] 供试品溶液的制备：取本品粉末（过五号筛）约〇.5g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入70%甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz) 30分钟，放 冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0015]测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇μ1，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0016] 连翘提取物中，连翘苷A不得少于6.0%，连翘苷不得少于0.5%。其制备方法为， 取连翘，粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1. 5小时，滤过，合并滤液，滤液于60°C以下减压 浓缩至相对密度1. 10-1. 20 (室温）的清膏，放冷，加入4倍量乙醇，搅匀，静置2小时，滤过， 滤液减压回收乙醇，浓缩液喷雾干燥，即得。
[0017] 关于连翘提取物的含量测定方法，具体为：
[0018] 色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动 相A，以水为流动相B，按照下表进行梯度洗脱，检测波长为235nm，理论板数按连翘酯苷F峰 计算应不低于4000 ;
[0019]
[0020]
【权利要求】
1. 一种连翘及含连翘产品的检测方法，其对照品为五福花苷酸，或用连翘苷对照品为 五福花苷酸替代物，用校正因子计算五福花苷酸含量。
2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含连翘产品为连翘与其他中药 组合制成的产品，优选地，所述含连翘产品为双黄连口服液、双黄连注射液、双黄连胶囊、双 黄连颗粒、双黄连片、双黄连糖浆、双黄连滴丸、双黄连泡腾片、双黄连气雾剂、注射用双黄 连（冻干）、双黄连栓、小儿热速清口服液、小儿热速清糖楽、小儿热速清颗粒、复方苳兰口 服液。
3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，双黄连口服液中每lml含五福花苷酸 以连翘苷计不得少于〇. 4mg。
4. 根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括五福花苷酸的 检测方法，具体为：色谱条件与系统适用性试验、对照品的制备、供试品的制备、检测。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件与系统适用性试验为： 色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18，以0.05%甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.05% 甲酸溶液为流动相B，；柱温为20°C;流速为每分钟0. 9ml ;检测器：二极管阵列检测器，定性 鉴别检测条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm ;定量测定检测条件：检 测波长：〇min，236nm，20min，278nm，理论板数按连翅苷峰计算不低于6000。
6. 根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序见下表：
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7. 根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于所述供试品溶液的制备： 连翘药材：取药材l_2g，置锥形瓶中，加40%甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补 重，用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或 含连翘产品：精密量取本品lml(或0.5g)置5ml量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
8. 根据权利要求4-7任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： 对照品溶液的制备：取五福花苷酸对照品适量，精密称定，加40%甲醇制成每lml含 100ug的溶液，即得； 供试品溶液的制备： 连翘药材：取药材l_2g，置锥形瓶中，加40%甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补 重，用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或 含连翘产品：精密量取本品lml(或0.5g)至5ml量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得； 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：AgilentZorbaxEclipse父08-(：18(150111111\4.61111111.(1.，511111)，配父08-(：18预柱 ；流动相：以0.05%甲酸乙腈溶液为 流动相A，以0. 05%甲酸溶液为流动相B，线性梯度洗脱程序见下表；流速：0. 9ml/min;检 测波长：〇min236nm，20min278nm;柱温：20°C;进样量：5iU;
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9.根据权利要求4-7任一项所述的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： 对照品溶液制备：取连翘苷对照品适量，精密称定，加40 %甲醇制成每lml含 200-260yg的溶液，即得； 对照药材溶液制备：取连翘对照药材〇. 1-0. 5g至5ml量瓶中，精密称定，加40%甲醇 至近5ml，密塞，超声处理2小时，功率250W，频率40kHz，放冷，加40%甲醇至刻度，摇匀， lOOOOrpm离心lOmin，取上清液，再用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得； 供试品溶液制备： 连翘药材：取药材l_2g，置锥形瓶中，加40%甲醇25-50ml，摇匀，称重，超声2小时，补 重，用0. 22ym的微孔滤膜滤过，取续滤液即得；或 含连翘产品：精密量取本品〇. 5-2ml(或0. 5-2g)至5ml量瓶中，加40%甲醇稀释至刻 度，摇匀，用〇. 22 的微孔滤膜滤过，取续滤液即得； 色谱条件：色谱柱：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18(150mmX4.6mmi.d.，5um)，配 XDB-C18预柱；流动相：（0.01 %-0.4%)(甲酸、乙酸、磷酸）乙腈溶液（A)-(0.01 %-0.4%)(甲酸、乙酸、磷酸）溶液（B)，按照线性梯度洗脱表运行41min，具体见下表；色谱图记录 35min ;流速：0? 80-1. 10ml/min ;柱温：20-25°C;进样量：2-10 iil，检测器：二极管阵列检测 器，定性鉴别条件：波长扫描范围：190-400nm，检测波长：236nm，278nm ;定量检测条件：检 测波长：〇min，236nm，20min，278nm ;
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10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在检测连翘及含连翘产品的应用。
【文档编号】G01N30/02GK104483411SQ201410835171
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月29日 优先权日:2014年12月29日
【发明者】方同华, 邵青, 葛志伟, 岳大彪, 许照芹, 周广红, 席桂才, 代喜国, 王倩, 冯慧, 贾文娟 申请人:黑龙江珍宝岛药业股份有限公司