一种肾上腺皮质激素氟米龙含量及有关物质的分析方法与流程

本发明属于药物分析方法领域，具体是一种肾上腺皮质激素氟米龙含量及有关物质的分析方法。

背景技术：

目前，液相色谱是现代色谱技术中应用最广泛的分析方法之一，在化工、环境、生化、食品、农业、药物等多个领域的应用较为普遍。

氟米龙是一种治疗对糖皮质激素敏感的眼睑球结膜、角膜及其它眼前段组织的炎症的特效药；氟米龙的抗炎作用是氢化可的松的40倍，局部外用有抗炎、血管收缩及止痒作用。其结构是如下：

目前关于氟米龙分析方法各药典都有报道，其中美国药典USP37、BP2011收录了氟米龙含量和有关物质的测定方法，都是采用高效液相色谱分析方法，以十八烷基硅烷键合硅胶柱为分离色谱柱，紫外检测器检测，检测波长为254nm，

在USP37、BP2011收录的氟米龙原料测定方法中：氟米龙含量和有关物质采用相同流动相和色谱体系，流动相由甲醇和水组成，甲醇和水体积比为6:4，检测波长：254nm，色谱柱：250mm×4.6mm，5μ，流速：2.0ml/min。该方法检测的有关物质为：

杂质A：环氧物，结构如下:

杂质B：脱水物，结构如下：

杂质C：：溴羟物，结构如下：

目前，对于氟米龙我们开发了新的工艺路线以及提纯方式，我们在研究中发现药典中现有的分析方法不适合我们新的合成工艺。用USP37、BP2011收录的氟米龙含量和有关物质的测定方法进行检测，存在很多问题，例如有些杂质检测不出；部分色谱峰之间的分离度达不到药典要求，有些色谱峰峰型不好，流速比较大，柱压偏高，易耗损色谱柱。

为了确保基本原料药质量和公众用药安全，以及加快与国际标准接轨的步伐，提高我国药品的国际竞争力，自2009年起，国家药监局加快推进提高国家药品标准行动计划的实施，例如，2010版《中国药典》大幅度提高了药品的标 准，除在附录中加强安全性检查总体要求外，新版药典在品种正文标准中也大幅度增加或完善安全性检查项目，提高对高风险品种的标准要求，加强对重金属或有害元素，杂质，溶剂残留等方面的控制；2012年国家药监局颁布《药品包装材料与药物相容性试验指导原则》，对药品包装材料与药物相容性考察做出了严格规定。

因此，迫切需要建立一种新的分析方法，不仅可以检测旧的氟米龙合成工艺，同时也满足新开发的合成工艺的含量及有关物质得测定。

技术实现要素：

为解决上述背景技术中提出的问题，本发明提出了一种肾上腺皮质激素氟米龙含量及有关物质的分析方法，操作简单，杂质分析准确。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种肾上腺皮质激素氟米龙含量及有关物质的分析方法，具体方法如下：

(1)该方法采用的色谱条件：使用高效液相色谱仪，采用ZORBAX SB-C18色谱柱；紫外检测器检测；检测波长为235nm-254nm；流速为1.0ml/min-2.0ml/min；流动相由A相和B相组成，流动相A是水，流动相B是乙腈或甲醇，照下表进行梯度洗脱：

(2)氟米龙含量的测定方法如下：

先配制对照品溶液，精密称取对照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(体积比例为80:20)稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

再配置供试品溶液，精密称取对照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(体积比例为80:20)稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

最后，精密称取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按照外标法以峰面积计算，即得含量。

(2)有关物质方法测定：

先配制供试品溶液，供试品溶液的配制同含量测定；

再配置1％自身对照溶液，精密量取供试品溶液1ml，置100ml容量瓶中，用乙腈-水(体积比例为80:20)稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；

精密称取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按照自生对照法计算各杂质。

所述方法中的流动相B是甲醇或乙腈体系，优选乙腈体系；

所述方法中的检测时温度为25-35℃，更优选30℃；

所述方法中的测试对照品为对应测试样品精制得到的含量为99.5％以上的标准品或工作对照品；

所述方法中的流动相流速设定的范围一般为1.0ml/min-2.0mi/min，优选 1.0ml/min。

本发明具有如下的优点如下：

(1)按照国家食品药品监督管理局颁布的“化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则”(【H】GPH5-1)对上述分析条件进行方法学验证，证明本发明提供的分析方法实用可靠，稳定性较好，能满足氟米龙含量和有关物质的检测。

(2)适用性好，可以同时测定氟米龙的含量和有关物质，有关物质涵盖了从原料到产品过程中所有的中间体及合成杂质的分离。

(3)本发明的流动相选用的两个介质普通易得，可行性高。

(4)本发明的操作过程简单方便，检测结果准确，重复性好。

附图说明：

图1是本发明的实施例1的液相谱图。

具体实施方式

下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步限定。本领域的技术人员应理解，对本发明的技术特征所做的等同替换或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1：

1、色谱条件：

高效液相色谱仪：Agilent 1260HPLC

色谱柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

检测器：紫外检测器 检测波长：235nm

进样量：10μl 柱温：35℃

流速：1.0ml/min

分析天平：万分之一

流动相：A：水 B：乙腈

2、梯度条件如下表：

3、检验结果：如下表1所示。

表1

氟米龙与前后杂质的分离度大于2.0，其他各峰间的分离度均大于1.5；

图1为本发明实施例1的液相谱图。

实施例2:

1、色谱条件：

高效液相色谱仪：Agilent 1260HPLC

色谱柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

检测器：紫外检测器 检测波长：254nm

进样量：10μl 柱温：30℃

流速：1.2ml/min

分析天平：万分之一

流动相：A：水 B：乙腈

2、梯度条件同实施例1中的梯度条件。

3、检验结果：如下表2所示。

表2

氟米龙与主峰后杂质的分离度小于2.0，其他各峰间的分离度均大于1.5。

实施例3:

1、色谱条件：

高效液相色谱仪：Agilent 1260HPLC

色谱柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

检测器：紫外检测器 检测波长：254nm

进样量：10μl 柱温：25℃

流速：2.0ml/min

分析天平：万分之一

流动相：A：水 B：乙腈

2、梯度条件同实施例1中的梯度条件。

3、检验结果：有关数据列于下表3。

表3

氟米龙与主峰后杂质的分离度小于2.0，其他各峰间的分离度均大于1.5。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同替换和改进，均应包含在本发明技术方案的保护范围之内。