一种检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的方法与流程

本发明属分析化学领域，公开了一种检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的方法，尤其是一种用高效液相色谱法检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)的方法。
背景技术：
：恩杂鲁胺的化学名称为4-[3-(4-氰基-3-三氟甲基苯基)-5，5-二甲基-4-氧代-2-硫代咪唑烷-1-基]-2-氟-N-甲基苯甲酰胺；英文为4-{3-[4-cyano-3-(triflu-oromethyl)phenyl]-5，5-dimethyl-4-oxo-2-sulfanyli-deneimidazolidin-1-yl}-2-fluoro-N-methylbenz-amide；分子式为C21H16F4N4O2S；分子量为464.44；CAS登记号为915087-33-1。恩杂鲁胺是一种新型的非类固醇类雄激素受体抑制剂，作用于雄激素受体信号通路。竞争性抑制雄激素与雄激素受体的结合，同时抑制雄激素受体核移位和与DNA的相互作用。恩杂鲁胺软胶囊商品名为由安斯泰来和Medivation两家公司共同研发。该药于2012年8月31日被FDA批准上市，用于既往接受过多西紫杉醇(多西他赛，docetaxel)化疗的转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的治疗。2014年9月10日，FDA批准用用于既往未接受化疗的转移性去势性前列腺癌(mCRPC)男性患者的治疗，这一决定显著增加了这款口服药物潜在的适用人群。FDA公开说明书中提到恩杂鲁胺软胶囊内容物组成为恩杂鲁胺、辛酰癸酸聚乙二醇甘油酯、抗氧剂丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)。但恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的检测，目前还没有相关的文献报道。为保证恩杂鲁胺软胶囊在放置过程的质量控制，有必要针对恩杂鲁胺软胶囊建立抗氧剂的检测方法。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的问题提供一种检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的方法，对恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂BHA、BHT进行有效分离，从而对恩杂鲁胺软胶囊产品质量进行有效控制，保证恩杂鲁胺软胶囊的质量。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的方法，包括：步骤1：取恩杂鲁胺软胶囊内容物，加稀释液溶解，定量配制成一定浓度的供试品溶液；步骤2：对供试品溶液进行高效液相色谱检测，以水相为流动相A、有机相为流动相B进行梯度洗脱。本发明中，首先采用稀释剂将恩杂鲁胺软胶囊中溶解后配制成供试品溶液。优选的，所述稀释液为乙腈和/或甲醇。更优选为乙腈。优选的，所述供试品溶液中每1mL含恩杂鲁胺约1mg-10mg。即恩杂鲁胺软胶囊内容物，加稀释液溶解后，加稀释液调整供试品溶液的浓度至每1mL含恩杂鲁胺约1mg-10mg。更优选为每1mL含恩杂鲁胺约5mg。本发明定量吸取供试品溶液进高效液相色谱仪，采用一定比例的水相-有机相为流动相，结合梯度洗脱方法，用于检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂。本发明中，所述“抗氧剂”在没有明确区分的情况下，可以是BHA或者BHT。本发明的测定方法均适用于恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂BHA和BHT的检测。本发明所述方法对高效液相色谱仪无特殊要求。可以为岛津LC-20AT高效液相色谱仪，也可以为岛津SPD-M20A效液相色谱仪。优选的，所述供试品溶液吸取量为10μl-20μl。优选的，所述色谱柱为FluoroSep-RPPhenyl色谱柱。优选的，所述检测波长为260～300nm，柱温为25～45℃。优选的，检测波长为277nm，柱温为38℃～42℃。优选的，所述水相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液。更优选为甲酸水溶液。优选的，所述水相中所含酸浓度为0.005％～0.5％。更优选为0.05％。优选的，所述有机相选自甲醇、乙腈。更优选为乙腈。优选的，所述流动相A和流动相B的流速为1.4～1.7mL/min。更优选为1.5mL/min。优选的，所述梯度洗脱程序为在一些实施方案中，所述梯度洗脱程序中流动相A与流动相B的初始比例为70:30。在一些实施方案中，所述梯度洗脱程序中流动相A与流动相B的初始比例为65:35。在另一些实施方案中，所述梯度洗脱程序中流动相A与流动相B的初始比例为75:25。分离度(R)用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。可以通过测定待测物质与杂质的分离度，对色谱系统分离效能进行评价与调整。无论是定性鉴别还是定量测定，均要求待测物质色谱峰与其他色谱峰之间有较好的分离度。本发明按中国药典2015年版第四部通则0512(高效液相色谱法)对本发明所述方法进行分离度验证。结果表明利用本发明所述方法检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂BHA、BHT，BHA和BHT色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度均大于1.5，表明本发明所述方法可以对恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂BHA、BHT有效分离，为控制恩杂鲁胺软胶囊的质量提供有效控制，具有较大的实际应用价值。由上述的技术方案可知，本发明所述检测恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂的方法以一定比例的水相-有机相为流动相，结合梯度洗脱方法可以对恩杂鲁胺软胶囊中抗氧剂与其他成分进行有效分离，从而有效控制恩杂鲁胺软胶囊产品的质量。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示实施例1空白溶剂色谱图；图2示实施例1对照溶液色谱图；图3示实施例1恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液色谱图；图4示实施例2在流速为1.4ml/min条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图；图5示实施例3在流速为1.7ml/min条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液色谱图；图6示实施例4在柱温为38℃条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图；图7示实施例5在柱温为42℃条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图；图8示实施例6在流动相A:B初始比例为(65:35)的条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图；图9示实施例7在流动相A:B初始比例为(75:25)的条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图；图10示实施例8在色谱仪为岛津SPD-M20A条件下恩杂鲁胺软胶囊供试品溶液的色谱图。具体实施方式以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本邻域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳方法与材料仅作示范之用。实施例1仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪及其工作站，PDA检测器色谱柱：FluoroSep-RPPhenyl(4.6×250mm5μm)流动相A：0.05％甲酸水溶液(0.5ml甲酸，加水1000ml)流动相B：乙腈检测波长：277nm流速：1.5mL/min进样量：20μL柱温：40℃梯度洗脱程序如表1。表1梯度洗脱程序时间(min)A％B％0.01703010406015010020010020.1703030Stop--稀释液：乙腈取恩杂鲁胺软胶囊内容物，加稀释液配制成每1mL含恩杂鲁胺约5mg的溶液，作为供试品溶液。取BHA和BHT适量，加稀释液溶解混匀，作为对照溶液。取空白溶剂和供试品溶液，分别按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。典型色谱图见图1，图2，图3。图2中BHA保留时间为12.797min，BHT保留时间为16.951min。图3中BHA保留时间为12.768min，与相邻两杂质的分离度依次为：3.682、1.992；BHT保留时间为16.943min，与相邻杂质分离度为1.520。结果表明，空白溶剂不干扰测定，抗氧剂BHA、BHT与其相邻的各杂质均能达到良好的分离，符合中国药典的要求。实施例2改变柱流速1.4ml/min，其余色谱条件同实施例1进行测定。典型图谱见图4。BHA保留时间为13.243min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.430、1.624；BHT保留时间为17.302min，与BHT相邻杂质分离度为1.509。实施例3改变柱流速1.7ml/min，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图5。BHA保留时间为11.900min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.854、2.491；BHT保留时间为16.281min，与BHT相邻杂质分离度为2.260。实施例4改变柱温38℃，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图6。BHA保留时间为12.790min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.620、1.769；BHT保留时间为16.932min，与BHT相邻杂质分离度为1.552。实施例5改变柱温42℃，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图7。BHA保留时间为12.714min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.510、1.914；BHT保留时间为17.072min，与BHT相邻杂质分离度为1.535。实施例6改变流动相梯度如表2，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图8。BHA保留时间为12.033min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：4.065、2.084；BHT保留时间为16.871min，与BHT相邻杂质分离度为2.035。表2梯度洗脱程序实施例7改变流动相梯度如表3，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图9。BHA保留时间为13.375min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.738、1.645；BHT保留时间为17.010min，与BHT相邻杂质分离度为1.514。表3梯度洗脱程序时间(min)A％B％0.01752510406015010020010020.1703030Stop--实施例8改变色谱仪为岛津SPD-M20A，其余色谱条件同实施例1进行测定，典型图谱见图10。BHA保留时间为10.662min，与BHA相邻两杂质的分离度依次为：3.393、1.963；BHT保留时间为14.888min，与BHT相邻杂质分离度为1.592。当前第1页1 2 3