金橙Ⅱ胶体金检测卡及其制备方法与流程

文档序号:11109963阅读:来源:国知局

技术特征:

1.金橙Ⅱ胶体金检测卡,其特征在于:所述检测卡包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸,其中,所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上;所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的第二种属动物蛋白和抗金橙Ⅱ单克隆抗体,所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有金橙Ⅱ-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有抗第二种属动物蛋白的IgG的质控线。

2.根据权利要求1所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡,其特征在于:所述的抗第二种属动物蛋白的IgG为羊抗兔IgG。

3.根据权利要求1所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡,其特征在于:所述的第二种属动物蛋白为非抗体来源动物的蛋白质,如牛血清白蛋白、鸡卵白蛋白或人血清白蛋白中的一种,本发明具体为牛血清白蛋白。

4.根据权利要求1所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡,其特征在于:所述免疫胶体金纸片具有胶体金颗粒,胶体金颗粒大小在30nm左右,形状为圆形,大小基本相等,均匀一致,无凝集,所述胶体金是由柠檬酸三钠还原法制备获得。

5.根据权利要求4所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡,其特征在于:所述金橙Ⅱ胶体金检测卡包括经过预处理液进行过预处理的玻璃纤维纸,所述预处理的预处理液包括1~1.5%Tween-80,6~8%双糖、多糖,溶剂为水。

6.如权利要求1-5任意一项所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:

1)柠檬酸三钠还原法制备胶体金;

2)用步骤1)制备的胶体金,标记第二种属动物蛋白和抗金橙Ⅱ单克隆抗体,获得胶体金标记的第二种属动物蛋白和抗金橙Ⅱ单克隆抗体;

3)免疫胶体金纸片的制备:预处理玻璃纤维纸;稀释步骤2)获得的胶体金标记的第二种属动物蛋白和抗金橙Ⅱ单克隆抗体,得到免疫胶体金溶液;用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸,获得免疫胶体金纸片;

4)将金橙Ⅱ-牛血清白蛋白复合物和抗第二种属动物蛋白的IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上,烘干备用,制得免疫硝酸纤维素膜;

5)将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上,切裁制得试剂条;

6)将试剂条装入塑料盒,即获得金橙Ⅱ胶体金检测卡。

7.如权利要求6所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡的制备方法,其特征在于:所述柠檬酸三钠还原法为:

制备浓度为0.01%的HAuCl4水溶液100ml,水浴或油浴至95-100℃,控制温度恒定,之后边搅拌边加入1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)水溶液1.80ml,继续搅拌加热20分钟左右,超声振荡(频率在20-30kHz)2-3分钟后冷却至4.0℃水浴中保持温度恒定,即制得30nm左右粒径的胶体金溶液;

其中,配置各种水溶液均采用双蒸或三蒸去离子水。

8.如权利要求6所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡的制备方法,其特征在于:所述步骤3)免疫胶体金纸片的制备为:

A.用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体,获得OD540值为1.5的免疫胶体金溶液;

B.用预处理液浸泡玻璃纤维纸,干燥后,再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸,干燥,制得免疫胶体金纸片。

9.如权利要求8所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡的制备方法,其特征在于:所述步骤A中的喷金缓冲液配方如下:10~15%1.0M Tris液,0.2~0.5%聚乙二醇20000,0.1~0.2%牛血清白蛋白,0.1~0.3%脱脂牛奶,0.4~0.6%酪蛋白,和0.02~0.08%叠氮化钠,用盐酸调节pH至8.0±0.05,余量为水。

10.如权利要求6所述的金橙Ⅱ胶体金检测卡的制备方法,其特征在于:所述步骤4)中,喷在硝酸纤维素膜质控线(C线)上的抗第二种属动物蛋白的IgG的浓度为0.3~0.5mg/ml,喷在硝酸纤维素膜检测线(T线)上的金橙Ⅱ-牛血清白蛋白复合物浓度为0.4~0.6mg/ml。

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