1.一种高效液相色谱外标法测定大豆肽蛋白质粉中β-羟基-β-甲基丁酸含量的方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)样品溶液的制备:取样品0.6g,精密称定,置25ml量瓶中,加入0.1mol/L的盐酸溶液5ml,用力振摇使固体溶解,以乙腈稀释至刻度,振摇1分钟,滤过,精密吸取续滤液2.0ml置5ml量瓶中,以0.1mol/L的盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,经0.45μm滤膜滤过,取续滤液,作为样品溶液;
(2)对照品溶液的制备:取β-羟基-β-甲基丁酸钙水合物对照品适量,加0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释,制成每ml含β-羟基-β-甲基丁酸为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.7mg、1.0mg的对照品溶液;
(3)β-羟基-β-甲基丁酸含量测定方法:
色谱条件:色谱柱为十八烷基硅烷硅胶为填充剂,以0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液-乙腈为流动相,柱温为35℃,流速为0.4~0.6ml/min,样品进样量:5μl,检测波长为214nm;
测定法:精密量取对照品溶液1~5各5μl,注入液相色谱仪,按浓度对峰面积绘制标准曲线计算回归方程;另精密量取样品溶液5μl注入液相色谱仪,记录色谱图,用回归方程计算样品中β-羟基-β-甲基丁酸的含量;
所述步骤(3)的液相色谱条件中色谱柱为PhenomexUranus C18,5μm,长度:250×4.6mm;
所述步骤(3)的液相色谱条件中流动相为0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液-乙腈,两者的体积比为93~97:7~3;
所述步骤(3)的液相色谱条件中流动相流速:0.5ml/min;
所述步骤(3)的液相色谱条件中,流动相用10%磷酸溶液调节pH值为2.8 ~3.2。