本发明属于药品检测检验
技术领域：
，特别是涉及一种西青果中没食子酸的检测方法。
背景技术：
：西青果为使君子科植物诃子TerminaliachebulaRetz的干燥幼果。呈长卵形，略扁，长1.5～3cm，直径0.5～1.2cm。表面黑褐色，具有明显的纵皱纹，一端较大，另一端略小，钝尖，下部有果梗痕。质坚硬。断面褐色，有胶质样光泽；果核不明显，常有空心，小者黑褐色，无空心。气微，味苦涩，微甘。性味与归经：苦、酸、涩，平。归肺、大肠经。功能与主治：清热生津，解毒。用于阴虚白喉。现有的国家标准中确定了西青果的薄层色谱法鉴别方法，该方法存在：1）展开时间长；2）准确度差，灵敏度低；3）定量效果差，专属性不强；4）受外界环境影响大，对显色剂喷雾的要求较高。而且，该方法仅仅是西青果中没食子酸的定性鉴定，没有涉及主要有效成分的含量的定量测定，故而不能满足产品质量控制标准的要求。液相色谱法是一种以液体为流动相的色谱法，高效液相色谱法是现在应用十分广泛的一种液相色谱法，这种方法是20世纪兴起，经过不断的完善和发展，现已被应用于各个领域。在医药分析领域，液相检验的应用已经普及，而高效液相色谱法作为液相检验中的一种重要手段，也得到了大力的推广和应用。目前，公开的文献中还没有采用液相色谱法对西青果中没食子酸进行定量测量的技术存在。技术实现要素：本发明的目的就在于提供一种采用液相色谱法对对西青果中没食子酸进行定量测量的方法。为实现上述发明目的所采取的技术方案为：一种西青果中没食子酸的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行测定，所述高效液相色谱法的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.005mol/L磷酸-甲醇为流动相，其中磷酸和甲醇的体积比为98:2；检测波长为270nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于4000。上述方法还包括如下步骤：1）对照品溶液的制备：精密称取没食子酸适量，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含20～30μg没食子酸的溶液，作为对照品溶液；2）供试品溶液的制备：取西青果果皮粉末适量，精密称定，加入甲醇适量，水浴回流提取，过滤，用甲醇稀释定量，摇匀，精密量取，蒸干，加入10%盐酸适量，置沸水浴中加热水解，取出迅速冷却至室温，加水定量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；3）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定供试品溶液和对照品溶液没食子酸色谱峰面积；根据对照品溶液没食子酸浓度及其色谱峰面积和供试品溶液没食子酸色谱峰面积及试样重量，用外标法计算试样中没食子酸的含量。所述水浴回流提取2次，每次20-40分钟。所述加热水解2-4小时。本发明建立了一种通过高效液相色谱法检测西青果中没食子酸的含量的方法，并对检测方法进行验证，结果表明：此方法准确度高、重现性好，能有效测量其中没食子酸的含量。并进而控制西青果的质量。具体实施方法下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。1、仪器与试剂岛津LC-20AT高效液相色谱仪，岛津SPD-20A紫外检测器；电子分析天平AB135-S（梅特勒-托利多仪器有限公司）电子分析天平；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110831-201505）；西青果样品（宁夏多维药业有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂有限公司），水（去离子水），其他试剂均为分析纯。2、方法与结果1）方法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（本实验用VP-ODS色谱柱（250mm×4.6mm））；0.005mol/L磷酸-甲醇（98：2）为流动相；检测波长为270nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品5mg，置200ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含没食子酸25μg）。供试品溶液的制备：取本品果皮粉末（通过3号筛）80mg，精密称定，加入甲醇40ml，水浴回流提取2次，每次20-40分钟，取出，过滤，滤液合并，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，蒸干，加入10%盐酸5ml，置沸水浴中加热水解2-4小时，取出迅速冷却至室温，定量转移至25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。2）方法学考察线性关系考察：精密称取没食子酸对照品适量，加水制成每1mL含没食子酸50μg的对照品溶液，精密吸取对照品溶液1，2.5，5，7.5，10mL，分别置10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，各精密吸取20μL，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，以质量浓度为横坐标绘制标准曲线，没食子酸的线性回归方程为：y=55068X－21051；r=0.9993（n=5）。表明没食子酸在5～50μg.mL-1范围内与峰面积线性关系良好。稳定性试验：吸取同一供试品溶液20μL，于0，2，4，6，8h进行测定。结果峰面积RSD=0.31%（n=5），结果表明供试品溶液在常温下8小时内稳定性良好。精密度试验：精密吸取25μg/mL的对照品溶液20μL，连续进样6次。结果峰面积的RSD=0.47%（n=6）。表明仪器精密度良好。重复性试验：取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法，制备溶液并测定。结果没食子酸平均含量8.53%，RSD=1.94%（n=6）。加样回收率试验：精密称取已知含量为（8.35%）的样品6份，分别按照所取供试品含量的80%，100%，120%准确加入没食子酸对照品溶液适量各2份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表1。表1加样回收试验结果（n=6）取样量（g）样品含量（mg）加入量（mg）测定量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）0.04103.423502.6726.024197.330.04093.415152.6706.003796.950.03973.314953.346.524896.100.04103.423503.346.8014101.1398.091.820.04103.423504.0087.352498.030.03973.415154.0087.382599.013、样品含量测定按供试品溶液的制备项下方法分别制得3批供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液20μL，依次进样，测定。每批次供试品溶液测定3次，按测得的峰面积积分值取平均值，采用外标法计算含量，结果见表2。表2样品中没食子酸含量测定结果（n=3）样品批号没食子酸含量（%）RSD（%）150212-18.350.52150212-28.380.96150212-38.920.43当前第1页1 2 3