用于分析蛋白修饰的化学上官能化的阵列的制作方法

相关申请的交叉引用

本申请是要求2015年3月6日提交的美国临时专利申请系列号62/129,724的权益的pct国际专利申请，其公开内容明确地通过引用并入。

本公开内容涉及用于捕获和分析经修饰的蛋白的选定集合的材料和方法。

背景技术：

疾病生物标志物发现和验证是一个有前途的任务。疾病生物标志物发现和验证对于蛋白组学平台而言是有前途的，诸如翻译后修饰(ptm)的生物标志物。ptm(诸如磷酸化、氧化、甲基化和糖基化)是癌症形成、癌症进展和其它疾病进展中的主要参与者。具有ptm的蛋白是多种治疗剂的主要靶标。

免疫测定通过使用结合生物分子(即蛋白)的抗体来检测并量化所述分子。所述抗体可以是经标记的(即酶、放射性同位素、荧光团或电化学发光的标签)以促进结合以后复合物的检测。酶联免疫吸附测定(elisa)用酶(即辣根过氧化物酶)标记检测抗体，所述酶当与所述酶的底物组合时产生可观察的颜色变化。有时，将所述酶与第二种检测抗体连接以避免制备对抗原特异性的第一检测抗体的花费。在elisa中，将样品应用于要分析的表面，并然后用报告抗体探测。所述样品可以经由吸附非特异性地结合至表面，或使用另一种捕获抗体特异性地结合。因而，大多数特异性的免疫测定将抗原“夹”在捕获抗体和检测抗体之间。

已经进行了多个研究来检查可得到的抗体的品质。从这些产生的一致意见是，小于20％的抗体具有足够的品质(参见haab,b.b.,dunham,m.j.,和brown,p.o.(2001)proteinmicroarraysforhighlyparalleldetectionandquantitationofspecificproteinsandantibodiesincomplexsolutions.genomebiology2,research0004的图5)。小于5％的抗体表现出足够的芯片上的性能，或可以用于抗体对匹配。许多抗体可以在最初的试验中表现出足够的单特异性功能，但是与多种抗体和抗原组合地表现出来自非匹配对的显著交叉反应性。为了减轻这些缺点中的一些，已经开发了反相蛋白阵列。

反相蛋白阵列(rppa)是将抗原夹在抗体之间的经典免疫测定的后续发展。rppa分析是一种具有定量能力的有效的多路化的免疫测定方案。rppa需要将目标样品直接点印在高结合平台上以吸附非常小区域中的样品的整个蛋白质组。然后可以使用它的经验证的抗体检测目标蛋白的存在。换而言之，在“反相”中，抗原结合至固相，经常是硝酸纤维素，并随后用抗体或其它亲和试剂探测。

rppa允许目标抗原(诸如经修饰的蛋白，诸如磷酸化的、糖基化的、乙酰化的、经切割的或全部的细胞蛋白)的定量分析。所述方案允许在针对相同靶标的多个样品之间进行直接半定量对比，只要它们可以印刷在相同平台上即可。因为需要相对少量的起始原料，该过程也是有益的，从而使得rppa成为临床样品(如针活组织检查、生物流体或显微解剖的组织)的有益选项。

rppa可以用于在动物模型中、在细胞系和异种移植物中和在临床样品描绘(profiling)中的蛋白信号途径绘图。生物样品可以包括来自组织显微解剖、来自异质组织样品、细胞系或亚细胞级分的直接提取、或血清或血浆的富集细胞群体。rppa是可以定量地测量生物样品中的大量低丰度分析物的可用方法。将rppa用于蛋白质组学描绘、诊断标志物鉴别、蛋白动力学监测和用于理论模型的实验验证。

已经存在多个描述新出现的用于临床样品分析的反相阵列的研究，包括针对白血病、乳腺癌、前列腺癌研究、甲状腺癌、肺癌和许多其它。例如，参见irwin,m.e.,nelson,l.d.,santiago-o'farrill,j.m.,knouse,p.d.,miller,c.p.,palla,s.l.,siwak,d.r.,mills,g.b.,estrov,z.,li,s.,kornblau,s.m.,hughes,d.p.,和chandra,j.(2013)smallmoleculeerbbinhibitorsdecreaseproliferativesignalingandpromoteapoptosisinphiladelphiachromosome-positiveacutelymphoblasticleukemia.plosone8,e70608；gollapudi,k.,galet,c.,grogan,t.,zhang,h.,said,j.w.,huang,j.,elashoff,d.,freedland,s.j.,rettig,m.,和aronson,w.j.(2013)associationbetweentumor-associatedmacrophageinfiltration,highgradeprostatecancer,andbiochemicalrecurrenceafterradicalprostatectomy.americanjournalofcancerresearch3,523-529；cheng,s.,serra,s.,mercado,m.,ezzat,s.,和asa,s.l.(2011)ahigh-throughputproteomicapproachprovidesdistinctsignaturesforthyroidcancerbehavior.clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheamericanassociationforcancerresearch17,2385-2394；和nanjundan,m.,byers,l.a.,carey,m.s.,siwak,d.r.,raso,m.g.,diao,l.,wang,j.,coombes,k.r.,roth,j.a.,mills,g.b.,wistuba,ii,minna,j.d.,和heymach,j.v.(2010)proteomicprofilingidentifiespathwaysdysregulatedinnon-smallcelllungcancerandaninverseassociationofampkandadhesionpathwayswithrecurrence.journalofthoraciconcology:officialpublicationoftheinternationalassociationforthestudyoflungcancer5,1894-1904。

归因于对相对少量材料的需要、样品-与-样品对比能力和经常亚皮克级别的灵敏度，rppa被视作一种有益的方法。但是，有争议的是，rppa的最突出的优点是每种靶标需要仅一种经验证的检测抗体。rppa消除了对捕获抗体和抗体对的需要。因此，消除对捕获抗体和抗体对的需要通常具有先进的rppa作为用于大规模蛋白分析、特别是用于临床样品的可行选项。

rppa依赖于高质量单特异性亲和抗体、可以以高亲和力和特异性检测抗原(诸如蛋白或经修饰的蛋白)的抗体的可用性。为了验证抗体，必须证实它在方法的样品基质中是特异性的、选择性的和可再现的。所述抗体必须在不同样品类型之间随时间稳健地表现。

已经进行了多个研究来检查可得到的抗体的质量。许多抗体可以在最初的试验中表现出足够的单特异性功能，但是与多种抗体和抗原组合时，许多抗体表现出来自非匹配对的交叉反应性。另外，制备了许多针对肽且需要抗原变性的抗体。但是，变性破坏了蛋白-蛋白相互作用，且可能减少特定修饰中的官能团。

rppa仅能够用可得到的经验证的抗体检测蛋白或经修饰的蛋白。目前可得到仅针对小百分比的涉入信号网络和基因调节的已知蛋白的高质量抗体。缺乏对靶蛋白的修饰或活化状态特异的抗体。修饰特异性的抗体对经修饰的蛋白的检测已经在rppa测定中受到限制，主要是由于修饰特异性的抗体相对于总蛋白的抗体的更低的相对质量。还存在显著数目(最可能数十万)的经修饰的位点，大部分不具有任何市售抗体。此外，富集的混合物中的不同类型蛋白的数目增加了检测低丰度的经修饰的蛋白(例如含磷蛋白)的复杂性。

ptm分析的rppa的当前限制包括受限的可用性和位点特异性抗体的通常的低特异性、低处理量和定量检测的缺乏。尽管频繁地使用目前可得到的磷酸ptm特异性抗体和其它ptm特异性抗体，存在多个限制它们的应用的缺点。首先，为了使用所述测定，必须预先知道目标修饰的位点，从而使分析限于仅充分表征的信号传递事件。其次，必须制备针对每种单独的经修饰的残基和蛋白的有效位点特异性抗体，从而使得测定相当昂贵和困难(如果所述抗体不可得到的话)。第三和最后，尽管已经在抗体制备领域中做出了许多进展，ptm特异性抗体的开发面临着差的选择性、总体上降低的品质和高成本的挑战。

尽管存在缺点，但是基于抗体的ptm检测仍然是主要分析模式。为了实现蛋白表达水平和调节机制的更大规模检查，已经开发并重度使用抗体微阵列技术。抗体阵列需要在单个微阵列上平行地固定化数十或数百种针对有关蛋白产生的抗体，从而能够从复杂混合物捕获这些蛋白。此后，需要被捕获的分子的检测形式。最经常地，对于修饰，将ptm特异性抗体用于已经与捕获抗体小心地匹配的特定目标位点。尽管在许多情况下是有用的，该操作具有许多缺点，包括在开发仅单个修饰位点的良好抗体匹配和检测中的困难。

目前，反相阵列仅能够用可得到的经验证的抗体(目前，所有抗体的小部分)检测蛋白或修饰。利用这样的阵列的功能研究已经限于几种选定的蛋白结构域或结合亲合性，诸如锚蛋白重复蛋白、小分子或肽结合蛋白、聚糖相互作用组和凝集素结合(参见blixt,o.,和westerlind,u.(2014)arrayingthepost-translationalglycoproteome(ptg).curropinchembiol18,62-69和hirabayashi,j.,yamada,m.,kuno,a.,和tateno,h.(2013)lectinmicroarrays:concept,principleandapplications.chemicalsocietyreviews42,4443-4458)、sh2结合结构域和配体结合筛选。这些功能研究基于使用抗体、蛋白和它们的结构域和其它蛋白衍生的亲和分子的亲和相互作用。

考虑到免疫测定和rppa的限制，仍然需要高通量技术来分析经修饰的蛋白，诸如ptm修饰的蛋白。ptm修饰的蛋白和它们的动力学的检查有益于在分子水平理解疾病的发作和进展。ptm修饰的蛋白检查允许对比暂时的细胞活性、细胞类型内的分化、动态反馈机制、网络串扰、在疾病形成和进展过程中的修饰以及生物系统对药物治疗的应答。

具体地还需要基于系统的方案来分析特定类型的经修饰的蛋白，诸如所有磷酸化的蛋白。

技术实现要素：

一种用于结合经修饰的蛋白的组合物，其包含具有活性结合分子的预组装的结合部分，所述结合部分包括至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物分子和间隔物接头的组分，其中所述结合部分选自金属离子、酰肼、羟胺、醛、羰基、叠氮化物、炔烃、巯基、等同物和它们的组合，且所述结合部分也固定化至固体支持物。

一种用于检测样品中的经修饰的生物学分析物的方法，所述方法包括下述步骤：使固定化的结合部分与样品接触，所述结合部分包括活性结合分子和至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物分子和间隔物接头的组分，使得所述结合部分选择性地结合所述样品的蛋白的修饰，除去任何未结合的样品的至少一部分，和使用选自抗体、适体、亲和体、等同物和它们的组合的检测部分分析所述蛋白。

附图说明

通过参考本公开内容的实施方案的以下描述，结合附图，本公开内容的上述和其它特征以及获得它们的方式将变得更明显，且将较好地理解本公开内容本身，在附图中：

图1是对比标准rppa方法与本文中公开的方法的一个实施方案的示意图。

图1a解释了标准的rppa操作。

图1b解释了提出的rppa平台，其中首先将所述阵列用经修饰的聚mac官能化。

图2是解释用活性结合分子涂布rppa固相、玻璃、纸或芯片的操作的示意图，所述活性结合分子用于捕获和分析经修饰的蛋白的选定集合(即磷酸化、糖基化、亚硝酰化)。然后将(非)共价地涂布的固相暴露于样品，洗涤，并随后用标记的抗体检测。

图3解释了单个阵列，其中使用本文中公开的方法的一个实施方案修饰所述阵列的右半以结合ptm蛋白。

图4是显示对照和钛修饰的膜之间的对比的图解，所述膜用于从细胞培养物捕获蛋白质组/磷酸蛋白质组。将对照或磷酸化的cjun以1:200比例掺入裂解物中，在系列稀释物中点印到两种膜上并检测。

图5是显示用机器人点印微阵列仪点印的样品的图解。将对照cjun的系列稀释物点印在上一半中，并将磷酸cjun的系列稀释物点印在下一半中。将对照或磷酸化的cjun以1:200比例掺入裂解物中，在系列稀释物中点印到两种膜上并检测。

图6是显示在血浆背景下在ti修饰的膜上的对照和磷酸-cjun捕获之间的对比的图解。每个点印的样品均含有1ngcjun和10ug血浆蛋白。

图7a和b分别是鉴别图7c的阵列的对应上和下一半的区域的图例。图7c显示了膜上的agp的检测。聚mac-o-nh2是图9c中的阵列的上一半的膜上的经修饰的涂层，且未涂布的膜是在图9c中的阵列的下一半中。将对照和氧化的agp二者在系列稀释物中从左至右在125pg至200fg范围内点印在每一半上。

图8是来自在图7中解释的聚mac-o-nh2涂布的膜上的氧化的agp的系列稀释物的信号的图。

图9a和b是鉴别图9c的对应阵列中的区域的图例。图9c显示了膜上的agp的检测。聚mac-o-nh2是所述阵列的上一半的膜上的经修饰的涂层，且未涂布的膜是在下一半中。将来自血浆的内源性agp蛋白直接点印在阵列的右侧上，并与点印在阵列左侧上的对照agp标准品进行对比。

贯穿几个附图，相同的附图标记指示相同的部分。尽管附图代表本公开内容的实施方案，但是附图不一定按比例绘制，并且可以放大某些特征以便更好地图解和解释本公开内容。

具体实施方式

下面公开的实施方案无意成为穷尽性的或将公开内容限于在下述详细描述中公开的精确形式。相反，选择和描述实施方案，使得本领域技术人员可以利用它们的教导。

尽管已经将本公开内容描述为具有一种示例性设计，可以在本公开内容的精神和范围内进一步修改本公开内容。因此，本申请意图使用它的一般原理覆盖本公开内容的任何变体、用途或改造。此外，本申请意图覆盖落入本公开内容所属领域的已知或常规实践中的来自本公开内容的这种改变。

在tao的美国专利号8,501,486中和tao等人的美国公开的专利申请2013/0095502中更详细地描述了能够特异性地捕获经修饰的蛋白集合的活性结合分子，每篇的主题明确地通过引用并入。tao的美国专利号8,501,486详述了适合用于从混合物捕获磷酸肽的基于聚合物的金属离子或金属氧化物捕获试剂(聚mac)。tao等人的美国公开的专利申请2013/0095502描述了用于检测磷酸化的分子的试剂。

本公开内容如下将标准rppa方法与根据本公开内容的实施方案的方法进行了对比：将结合部分(诸如聚mac)固定化至膜上，然后点印所述样品。图1对比了标准rppa和官能化的ptm-rppa(使用ti、o-nh2或其它化学试剂的基于聚mac的捕获)的总方法。

如在图2中所示，本公开内容解释了能够特异性地捕获经修饰的蛋白集合(诸如通过磷酸化、糖基化、亚硝酰化、磺化、氧化等修饰的蛋白)的活性结合分子。

在一个实例实施方案中，如果仅所述阵列的一半被各种聚mac试剂修饰，则可以同时检测总信号(标准rppa)和ptm(ptm-rppa)信号。图3是证实如果仅所述阵列的一半被各种聚mac试剂修饰则可以如何同时检测总信号(标准rppa)和ptm(ptm-rppa)的示意图。然后可以将相同样品点印在两半上，并且通过相同抗体一起检测靶信号，从而提供两个或更多个不同的数据集。

表1另外的结合分子

在表1中总结了各种ptm的另外的结合分子。酰肼和羟胺是捕获糖基化修饰中的氧化的糖部分的范例结合分子。巯基或其它亲核部分可以用作结合分子，以捕获亚硝酰化、次磺酰化和/或巯基化修饰。

固定化的活性结合和/或捕获(涂布)分子的活性部分可以包括但不限于金属离子、酰肼、羟胺、醛、羰基、叠氮化物、炔烃、巯基和等同物。

本公开内容可以利用诸如阵列、载玻片和/或膜的平台。用活性结合分子涂布、官能化和/或固定化所述平台。可以将活性结合和/或捕获分子原样(作为小分子或用接头)固定化在平台上，或可以官能化在聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物、凝胶、珠子等的表面上。

提出结合和/或捕获功能并未基于抗体、适体、亲和体、凝集素或其它蛋白和核酸。提出活性结合和/或捕获分子和分析物之间的结合和/或捕获功能在性质上是化学的，包括共价键、离子键、金属螯合作用、分子间键等。所述化学结合/螯合作用使得能够将经修饰的蛋白质组的整个或部分捕获在平台上。

然后可以以在标准rppa中那样使用经验证的抗体、适体、亲和体、凝集素或任意其它检测方法检测捕获的经修饰的蛋白，其中信号的变化可归因于靶标修饰的变化，如在图1中所示。平行地，可以进行标准rppa样测定以检查蛋白量的变化，并将这些变化与蛋白修饰的变化进行对比。

实施例#1

根据本公开内容的一个实施方案的磷酸-rppa方案的一个例子是：(1)将硝酸纤维素与经修饰的聚mac-ti一起涂布在载玻片上，让它干燥1hr，然后再次涂布；(2)与1％三氟乙酸一起温育15min并完全干燥；(3)通过在95摄氏度煮沸5min，使样品在含有20mm二硫苏糖醇的2％十二烷基硫酸钠(sds)中变性；(4)制作每种样品的至少4倍系列稀释物；(5)使用针或移液器点印样品；(6)使用含0.5％sds的tris缓冲盐水和tween20混合物(tbst)溶液将阵列洗涤3次，每次洗涤10min，所述tbst包括50mm三(羟基甲基)氨基甲烷、150mmnacl和0.05％聚山梨酯20(akatween20)，然后用tbst第四次洗涤；(7)用含1％牛血清白蛋白(bsa)的tbst溶液封闭阵列1hr；(8)使用含1％的bsa的tbst溶液内的最佳稀释度，与适当的第一抗体一起温育所述阵列；(9)用tbst洗涤4次，每次洗涤5min；(10)使用含1％的bsa的tbst溶液内的最佳稀释度，与适当的第二抗体一起温育所述阵列；(11)用tbst洗涤4次，每次洗涤5min；(12)根据第二抗体缀合物，使用选择的方法检测信号。

在图4所示的一个实施例中，用特异性结合分子(具体地，钛官能化的纳米聚合物树枝状聚合物)涂布固定化的硝酸纤维素膜，以实现特定类别的经修饰的蛋白(具体地，磷蛋白)的特异性捕获。给b细胞淋巴瘤细胞裂解物掺入磷酸化的gst-cjun或未磷酸化的gst-cjun，各自在200:1比率。将亚μl量的每种混合物以斑点印迹方式点印在经修饰的膜上。使用抗gst第一抗体和荧光团官能化的抗兔第二抗体检测固定化的cjun。平行地，用对照硝酸纤维素膜进行点印、温育和检测操作。

在相同检测强度的可比较结果显示在图4中。如数据揭示的，来自磷酸化的cjun的信号强度对于经修饰的膜和对照膜而言是强烈的，从而证实了磷酸化的cjun在经修饰的膜上的更完全的特异性捕获。检测限对于二者也是类似的，从而能够在最低点印量(3.7pg)检测gst-cjun。但是，在经修饰的膜的情况下，仅gst-cjun的磷酸化形式在最低点印量(3.7pg)是可检测的，从而指示磷酸化的gst-cjun的特异性捕获。

实施例#2

对于实施例#2，使用简单的斑点印迹型点印。使用图5中的标准机器人点印微阵列仪将点印的样品体积减小至低nl或亚nl，并从而集中较小区域中的信号和增加灵敏度。

经修饰的膜的结合能力是非常高的，可能归因于特异性结合分子的纳米尺寸，其显著地增加试剂的表面结合面积。因为高结合能力和通过仅富集经修饰的蛋白而显著地简化样品的能力，所以使用高得多的量的起始原料。归因于平台结合能力，标准rppa的典型开始样品限度是1μg/μl。对于经修饰的膜，可以增加样品限度，从而可能提供改善的低丰度的经修饰的蛋白的检测。作为一个例子，将gst-cjun的磷酸化和未磷酸化形式以1:10,000比例掺入复杂的未稀释的血浆样品中。每种混合物的开始总蛋白浓度是50μg/μl。将亚μl量的每种样品以斑点印迹方式点印在经修饰的膜上。使用抗gst第一抗体和荧光团官能化的抗兔第二抗体检测固定化的c-jun。血浆不含有高浓度的磷酸化的蛋白。磷酸-cjun的捕获是完全的和可检测的，如在图6中所示。对照cjun没有产生可检测信号。

用于研究蛋白修饰(诸如磷酸化，细胞信号传递的主要模式)的变化的“系统方案”能够实现药物靶标和治疗效果的更深入分析。目前，最常用的药物筛选仅检测一种或几种有关的激酶，特别是对于激酶抑制剂而言。但是，归因于抑制剂(诸如激酶抑制剂)的固有混乱，需要信号传递途径的更广泛检查来分析系统扰动和脱靶效应—药物失败的常见原因。

实施例#3

典型的糖-rppa(通过聚mac-o-nh2捕获)方案是：(1)如下用高碘酸盐氧化经纯化的糖蛋白，诸如α-1-酸糖蛋白(agp)：制备由100mm醋酸钠(调至ph5.5)组成的氧化缓冲液，制备蛋白样品(其为1mg蛋白/1ml氧化缓冲液)，通过加入10mm高碘酸盐来氧化缓冲的样品，和使它在暗处反应30分钟，然后通过加入50mm亚硫酸钠并允许在暗处反应15分钟来淬灭氧化；(2)通过在由2％sds和2％2-巯基乙醇组成的变性缓冲液中煮沸5分钟，将样品变性；(3)使用由含1％的sds的磷酸盐缓冲盐水溶液组成的稀释缓冲液将样品系列稀释，并在准备好用于分析之前储存在冰柜中。该操作以后，可以如在磷酸-rppa方案中所述点印和检测样品。

在一个实施例中，将o-nh2官能化的纳米聚合物(聚mac变体)固定化至硝酸纤维素膜以实现糖蛋白的特异性捕获。将氧化的或对照(即未氧化的)agp蛋白的5倍系列稀释物点印在膜上。使用阵列针将低nl量的该样品点印在经修饰的膜上，并使用第一抗体和荧光团官能化的抗兔第二抗体检测agp信号。平行地，用未修饰的硝酸纤维素膜进行相同的点印、温育和检测操作。在相同检测强度的可比较结果显示在图7中。图7c显示了用于从细胞培养物捕获蛋白质组/糖蛋白质组的对照和经修饰的膜之间的对比。如数据揭示的，来自氧化的agp的信号强度是非常强烈的和特异性的，在经修饰的膜上具有非常少的可检测的未氧化的agp。

归因于聚mac-o-nh2涂布的膜上的更好蛋白取向，来自经修饰的膜的信号表现出与对照膜相比25倍的强度增加。归因于高碘酸盐氧化和醛的形成，以125倍信号增加改善了选择性。经修饰的膜能够以大于99％特异性实现糖蛋白的非常选择性捕获。灵敏度是1pgagp，这等同于对于40kda蛋白而言的0.025fmol。所述信号在1pgagp以上是线性的，如在图8中所示。

实施例#4

在另一个实施例中，如在图9c中所示，直接检测来自血浆的内源性agp蛋白(图9c中的阵列的右侧，基于图例图9a和9b)，并与对照agp标准品(图9c中的阵列的左侧，基于图例图9a和9b)进行对比。像在以前的结果中一样，可以从直接点印的血浆样品检测到氧化的agp，而未氧化形式在聚mac-o-nh2膜上几乎不具有任何信号。类似地，归因于改善的蛋白取向，来自经修饰的膜的信号比来自对照膜的信号强的多。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种用于结合经修饰的蛋白到固体支持物的组合物，其包含：

具有活性结合分子的预组装的结合部分，

其中所述结合部分包括至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物分子和间隔物接头的组分，

其中所述结合部分选自金属离子、酰肼、羟胺、醛、羰基、叠氮化物、炔烃、巯基、等同物和它们的组合，

其中所述结合部分涂布到固体支持物上，

其中所述固相是膜、玻璃或塑料载玻片、反相蛋白阵列平台或任意其它类型的蛋白阵列。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述固相是硝酸纤维素膜。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述固相是免疫测定的部分。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述检测部分是反相或其它类型的蛋白或肽阵列的部分。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述结合部分包括树枝状聚合物，且所述树枝状聚合物包括酰肼和羟胺，

其中所述树枝状聚合物与醛结合以捕获糖基化修饰。

6.一种检测样品中的经修饰的生物学分析物的方法，所述方法包括下述步骤：

通过使样品与涂布有结合部分的固体支持物接触而捕获经修饰的蛋白，所述结合部分包括活性结合分子和至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物分子和间隔物接头的组分，使得所述结合部分选择性结合所述样品的蛋白的修饰，

除去任何未结合的样品的至少一部分，和

使用选自抗体、适体、亲和体、凝集素、等同物和它们的组合的检测部分分析所述经修饰的蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述固相是膜、玻璃或塑料载玻片、反相蛋白阵列的平台或任意其它类型的蛋白阵列。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述固相是免疫测定的部分。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述检测部分是反相或其它类型的蛋白或肽阵列的部分。

10.根据权利要求6所述的方法，其中平行地操作多个样品。

11.一种同时捕获和分析样品中的总蛋白和经修饰的蛋白的方法，所述方法包括下述步骤：

保留固体支持物的第一部分用于总蛋白结合，

并将结合部分涂布到至少一个第二部分，所述结合部分包括活性结合分子和至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物的组分，

使所述支持物的第一部分和至少一个另外部分与样品接触，使得所述第一部分结合所述样品中的总蛋白，且结合部分选择性地结合所述样品中的经修饰的蛋白，

除去任何未结合的样品的至少一部分，和

使用选自抗体、适体、亲和体、凝集素、等同物和它们的组合的检测部分分析结合的蛋白。

12.根据权利要求11所述的方法，其中平行地操作样品。

13.根据权利要求11所述的方法，其中将多个不同的结合部分涂布在所述固体支持物的不同部分中。

14.一种分析生物样品中的蛋白修饰的试剂盒，所述试剂盒由下述组成：

固体支持物，其具有涂布的结合部分的部分，所述结合部分包括活性结合分子和至少一种选自聚合物、纳米聚合物、树枝状聚合物分子和间隔物接头的组分，

洗涤溶液，

和检测溶液，其含有抗体、适体、亲和体、凝集素、等同物和它们的组合。