一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:12451282阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,包括R1试剂、R2试剂、校准品和冻干精浆质控品;所述R1试剂为包含EDTA·2Na的Tris-HCl缓冲液;所述的R2试剂为包含邻苯三酚的盐酸溶液;所述校准品为超氧化物歧化酶溶液;所述冻干精浆质控品为定值的含超氧化物歧化酶的精浆冻干粉。

2.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述R1试剂中EDTA·2Na的浓度为0.5~5.0mmol/L、Tris的浓度0.01~0.06mol/L,pH为8.0~8.5。

3.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述R2试剂中邻苯三酚的浓度为0.5~2.5mmol/L,盐酸的浓度为0.005~0.015mol/L。

4.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述校准品活性为30U/mL和90U/mL。

5.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述超氧化物歧化酶溶液的溶剂为包含酶保护剂的磷酸盐缓冲液,pH=7.5~8.0,其中酶保护剂为D-海藻糖,浓度为0.15~0.5mol/L。

6.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述冻干精浆质控品在冻干前加入保护剂蔗糖、甘氨酸和NaCl,以及防腐剂山梨酸钾,使蔗糖、甘氨酸、NaCl和山梨酸钾的浓度分别为0.01~0.02mol/L、0.05~0.1mol/L、0.01~0.03mol/L和0.01~0.03g/dl。

7.根据权利要求6所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,所述冻干精浆质控品的定值范围通过以下步骤获得:

取冻干前精浆等体积的纯化水复溶该冻干精浆质控品,混匀后,分装,-25~-20℃保存,备用;从-25~-20℃中每天取出1支分装后冻干精浆质控品,室温下自然解冻,混匀后用该试剂盒每天检测1次,连续1个月,计算这些数据的平均值、标准差、±2倍标准差,以平均值为该质控品的靶值,平均值±2倍标准差为该质控品的定值范围。

8.根据权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒,其特征在于,包括R1试剂、R2试剂、2瓶校准品、冻干精浆质控品、说明书和内衬。

9.如权利要求1所述的精浆超氧化物歧化酶检测试剂盒在全自动生化分析仪上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述应用的检测步骤为:

(1)试剂和样本的准备:采集精液,液化,3000~10000r/min离心5~10min分离精浆,即刻用于检测,试剂盒从2~8℃取出后,于室温下平衡30~60min;

(2)设置全自动生化分析仪的主、副波长分别为330~340nm、660~700nm,R1/样本/R2加样量按体积比40:1:12,范围为(120~200μl):(3~5μl):(36~60μl);

(3)检测方法:速率法,加入R1和样品后混匀,37℃孵育5min,加入R2后混匀37℃孵育2~5min,连续测定2~5min内的吸光度,仪器计算吸光度变化率△A/min;

(4)计算公式:

样本中SOD活性(U/mL)=K×△A/min+B

式中,K和B分别为校准曲线的斜率和截距,通过全自动生化仪自动测定校准品得到;

△A/min通过全自动生化仪自动测定样本得到;

(5)取冻干前精浆等体积的纯化水复溶冻干精浆质控品,混匀后,分装,-25~-20℃保存,备用;从-25~-20℃中取出一支分装后的冻干精浆质控品,在室温下自然解冻、混匀,将此冻干精浆质控品随着样本一起检测,根据质控品结果是否在定值范围内以判断样本结果是否在控。

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