一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法与流程

文档序号:11107425阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:

步骤一:胱氨酸标准溶液的配制,用电子天平称取1.2015g的L-胱氨酸,用适量的氢氧化钠溶解,调节pH,并用蒸馏水定容至50mL的容量瓶中,配制成0.1mol∕L的溶液,之后可以根据需要将储备液进行稀释,临用配制作为操作液;

步骤二:称取0.6057g的三羟甲基氨基甲烷(Tris),用蒸馏水溶解并定容至50mL的容量瓶中,配制成0.1mol/L的溶液;将50mL0.1mol/L Tris溶液与7.0mL0.1mol/L的盐酸混匀并稀释至100mL,配制成0.05mol/L的Tris-HCl缓冲溶液;

步骤三:荧光光谱的实验,准确移取1mL 0.1 mol/L胱氨酸标准溶液至10mL比色管中,加Tris-HCl缓冲溶液,再加蒸馏水定容L,摇匀,室温静置15 min;在水浴加热后,于Cary Eclipse 和F-7000荧光分光光度计上测量;设置各项荧光光谱测量参数如下:激发波长:410 nm;狭缝比5.0nm/5.0nm;发射光谱波长范围:415~700 nm;扫描速度:中速; 将反应后胱氨酸溶液在FLS920荧光光谱仪上测定其荧光量子产率,在FS5荧光光谱仪上测定荧光寿命;

步骤四:胱氨酸片样品的荧光光谱测定;准确移取市售胱氨酸片10片,用研钵研细,用电子天平准确称取0.1g,加到10mL洁净干燥的比色管中,加少量碱溶后加水定容超声溶解后,过滤;取1mL于10mL洁净干燥的比色管中,加的Tris-HCl缓冲溶液,再加蒸馏水定容,摇匀,室温静置15 min;水浴加热后,制成溶液;于荧光分光光度计上,设置狭缝5.0nm/5.0nm,最佳激发波长Ex=410nm,在415~700nm扫描范围内进行荧光光谱分析;同时用二次水进行空白实验。

2.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,所述Tris-HCl缓冲溶液的pH=8.9。

3.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,所述Tris-HCl缓冲溶液用量为5mL。

4.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,所述水浴加热时间为12小时。

5.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,所述水浴加热的加热温度为90℃。

6.根据权利要求1所述的一种胱氨酸片中胱氨酸含量的直接荧光光谱检测方法,其特征在于,所述荧光强度在一定范围内随着胱氨酸浓度的增加而增强,线性范围为1×10-4mol/L -1×10-3 mol/L,相关系数r=0.9927拟合的线性方程为:Y=-19.02+4.524×104C(mol/L);出限QL=3SD/K=4.0×10-5mol/L,K为工作曲线的斜率。

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