酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法及装置与流程

本发明属于生殖医学技术领域，具体涉及一种酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法及装置。

背景技术：

不孕不育已经成为现代一大社会问题，各大医院的生殖中心都人满为患。其原因各种各样：电脑辐射、疾病、油炸食物、和环境的改变，均可导致近年来男性的精子密度质量大幅下降。不少年轻人多数睡眠不足，不良的饮食习惯和生活习惯，高温桑拿等，也一定程度上影响了男性性功能。

全国不孕人口达到4000万，单纯男方因素不孕占不孕人群30％以上，全中国超过1000万男方不孕。其中男性不孕的一个重要原因则是精子的密度达不到要求，依据精液分析结果可进一步分为无精子症、极重度少精子症、少精子症、弱精子症和不明原因的不育症等。

医生为了鉴定男性生育能力，常嘱男方做精液检查，正常精液颜色为灰白色或乳白色。如节欲时间长者，可呈淡黄色，若出现鲜红色、暗红色，则提示患者有炎症或生殖道损伤。每次排精量为1.5毫升以上为正常，常受排精次数与频率的影响。新鲜精液呈稠厚胶冻状。正常精子数应超过1500万个/ml。排精后1小时内活动精>＝50％。世界卫生组织推荐精子活动力分为四级：0级：不活动；1级：精子原地摆动；2级：有中等的前向运动；3级：前向运动活跃，快速直线运动。正常的精子活动力为2～3级的精子>＝40％～50％；精子形态：畸形精子小于50％。分析男性生育能力不能单从精液的一项指标定论，应对精子数量、活力、活动率、液化时间、畸形率等多方面进行综合能力分析。正常精液标本体积应大于1.5ml，who第五版人类精子和宫颈黏液操作手册(2009)建议的男性每次排精的精子总数大于等于39x10⁶，这也是评估男性睾丸生精能力的重要指标之一采集精液前2～7天内必须停止性生活，并且不得有手淫、梦遗等情况，还应禁烟戒酒，忌服对生精功能有影响的药物等。由于众所周知的原因，男性的生精能力并非一成不变的，在一个生精周期(约60-90天)内，多次的精液检测可以评估在该段时间内该名男性的生精功能，才能获得最为准确的判断结果。

在医院标准的精液采集流程是以晨起采集为佳，采精前用温水将双手、阴部，尤其是龟头洗净。可采用手淫法或电动按摩射精法引起排精。精液的排出具有一定顺序，开头部分来自前列腺、附睾及壶腹，伴有大量精子，最后部分来自精囊，故应收集整份精液，不要遗漏任何部分，尤其是开头部分。正因为易丢失精液的第一部分，故不能用体外射精法收集精液。盛精液的容器应干净、无菌、干燥，采精前容器的温度应与室温相同；瓶子不应过大，但瓶口不应过小，以免将精液射出瓶外；在冷天应将精液标本保温，放置在贴身内衣袋中，不可倾斜或倒置，尽可能在1小时内送到实验室。正是由于标准的精液采集流程和一定的隐私性，加上患者紧张的心理情绪，病人往往在家里都很难收集好精液，出现漏检和射精困难等现象。同时，在医院的排精室更是出现集体排精困难的窘况。

因此需要一种全新简单的方法来实现病人在家庭的检测，这样既方便的病人多次往返医院检查(3次以上反复检验)，同时降低了病人心理和生理的影响，更为客观的反应出精子的真实密度有助于病人的治疗。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法及装置，目的是根据精子细胞的压积，结合离心和酶试剂的辅助，最终以精子细胞在特制离心管内的压积高低来客观反映精子的密度。

一种酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的装置，包括无菌采集杯，500微升定量气囊吸管，等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，上粗下细的附有帽塞的玻璃锥形离心管，离心管管体上附有刻度标尺1500万个/ml，搭配有与锥形离心管尺寸形状匹配的小型离心机以及标准精子细胞压积比较卡。

其中，所述的上粗下细的玻璃锥形离心管全长8cm，其中细的部分长4cm，粗的部分长4cm，细的部分管内直径为1mm，粗的部分直径为8mm。

实现本发明目的的酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法按照以下步骤进行：

(1)使用无菌采集杯收集完整的精液；

(2)在室温25℃条件下放置30min，或于36℃水浴20min，使精液初步液化，由胶冻状变为液体状；

(3)采用500微升定量气囊吸管或实验室移液管吸取400ul液体状精液，加入等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，混合后促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色变清亮，降低了精液的粘稠度增加流动性；

(4)将完全液化的精液注入锥形离心管中，在配套的离心机中以1500rpm的转速离心5分钟；

(5)离心后的精子细胞通沉积到锥形离心管底层，观察锥形离心管刻度显示的压积高度，与标准精子细胞压积比较卡进行比较，低于1.0厘米的为可疑低密度精子数量，高于或等于1.0厘米为正常男性精子密度。

与现有技术相比，本发明的特点和有益效果是：

(1)精液是有精子细胞、精浆以及前列腺液等组成的，本发明中采用糜蛋白酶+透明质酸酶相结合的组合，降低了精浆液化的背景，降低了精液的粘稠度增加流动性，有利于精子细胞后续离心沉积。

(2)往往由于实验室拥有较好的设备条件允许，但是家庭没有较好的条件。因此我们为了实现在家庭的使用，设计出家庭装套装，家庭套装装置中涉及了上粗下细的锥形离心管，这种形状设计与直型的玻璃管相比，更能便捷地注入精液，考虑到家庭使用者均为非专业人士，更为方便和便捷。同时精子离心下沉更好的保护细胞结构不会破幻，造成缓冲。

(3)本发明通过离心的方法将精子细胞的压积高度来进行比较，客观反映精子的数目和密度。

附图说明

图1是本发明上粗下细的玻璃锥形离心管示意图；

图2是本发明实施例1～3经离心处理后精子细胞压积标注图；

图3是本发明实施例1中酶试剂处理前后精液样本对比图；

其中：(a)酶试剂处理前精液样本；(b)酶试剂处理后精液样本。

具体实施方式

本实施例中使用酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的装置，是家庭套装装置，包括无菌采集杯，500微升定量气囊吸管，等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，上粗下细的附有帽塞的玻璃锥形离心管，离心管管体上附有刻度标尺1500万个/ml，如图1和图2所示，搭配有与锥形离心管尺寸形状匹配的小型离心机以及标准精子细胞压积比较卡。

实施例1

本实施例的酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法按照以下步骤进行：

(1)使用无菌采集杯收集完整的精液；

(2)在室温25℃条件下放置30min，使精液初步液化，由胶冻状变为液体状；

(3)采用500微升定量气囊吸管或实验室移液管吸取400ul液体状精液，加入等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，混合后促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色变清亮，降低了精液的粘稠度增加流动性，酶试剂处理前后的对比如图3所示；

(4)将完全液化的精液注入锥形离心管中，在配套的离心机中以1500rpm的转速离心5分钟；

(5)离心后的精子细胞通沉积到锥形离心管底层，观察锥形离心管刻度显示的压积高度，如图2所示，与标准精子细胞压积比较卡进行比较，低于1.0厘米的为可疑低密度精子数量，高于1.0厘米为正常男性精子密度，本实施例中样品高度为0.5cm，属于750万个/ml低精子密度样本。

实施例2

本实施例的酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法按照以下步骤进行：

(1)使用无菌采集杯收集完整的精液；

(2)于36℃水浴20min，使精液初步液化，由胶冻状变为液体状；

(3)采用500微升定量气囊吸管或实验室移液管吸取400ul液体状精液，加入等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，混合后促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色变清亮，降低了精液的粘稠度增加流动性，酶试剂处理前后的对比如图3所示；

(4)将完全液化的精液注入锥形离心管中，在配套的离心机中以1500rpm的转速离心5分钟；

(5)离心后的精子细胞通沉积到锥形离心管底层，观察锥形离心管刻度显示的压积高度，如图2所示，与标准精子细胞压积比较卡进行比较，低于1.0厘米的为可疑低密度精子数量，高于1.0厘米为正常男性精子密度，本实施例中样品高度为1cm，属于1500万个/ml的正常人精液。

实施例3

本实施例的酶促液化结合离心辅助半定量检测精子密度的方法按照以下步骤进行：

(1)使用无菌采集杯收集完整的精液；

(2)在室温25℃条件下放置30min，使精液初步液化，由胶冻状变为液体状；

(3)采用500微升定量气囊吸管或实验室移液管吸取400ul液体状精液，加入等体积的5000u透明质酸酶、5000u糜蛋白酶和枸橼酸钠溶液，混合后促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色变清亮，降低了精液的粘稠度增加流动性，酶试剂处理前后的对比如图3所示；

(4)将完全液化的精液注入锥形离心管中，在配套的离心机中以1500rpm的转速离心5分钟；

(5)离心后的精子细胞通沉积到锥形离心管底层，观察锥形离心管刻度显示的压积高度，如图2所示，与标准精子细胞压积比较卡进行比较，低于1.0厘米的为可疑低密度精子数量，高于1.0厘米为正常男性精子密度，本实施例中样品高度为1cm，属于3000万个/ml高精子密度。

本发明未详述部分为现有技术。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。