把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂的制作方法

本发明属于体液检测技术领域，涉及一种对体液的前处理技术，尤其涉及一种把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂。

背景技术：

在临床上，体液或排泄物的检测能了解体液在生理和病理条件下的变化规律，对诊断、防治预防具有重要意义。由于体液组成较复杂，针对不同的检测项目，检测前会对体液进行相应的前处理。

在体液标本的有些检测项目中，需要对体液标本沉淀物进行凝固处理。目前，各个医院普遍采用的方法要么是采用离心后加琼脂方法，要么是买进口成套的试剂和专用的耗材。离心后加琼脂方法操作过程复杂，对操作者操作技能有较高要求，使用进口试剂和专用耗材成本大且方法步骤繁琐。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种成本低、可快速方便地将体液标本沉淀物即刻凝固的一步把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂，以克服现有技术存在的不足。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂，其特征在于，每100体积数量的试剂中内含有5-20体积数量的三氯甲烷、0.5-8体积数量的冰醋酸，1-10体积数量的甲醛溶液，余下为乙醇溶液；所述乙醇溶液的体积浓度为10-100％，所述甲醛溶液的体积浓度为37～40％。

在本发明的优选实施方式中，所述乙醇溶液的体积浓度为40-80％。

蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依又在胶粒之间起了隔离作用。如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。

促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：

第一类是可逆的沉淀反应。这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。

第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。

天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持的，而变性后次级键被破坏，蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构(但一级结构并未改变)。所以，原来处于分子内部的疏水基团大量暴露在分子表面，而亲水基团在表面的分布则相对减少，至使蛋白质颗粒不能与水相溶而失去水膜，很容易引起分子间相互碰撞而聚集沉淀。在溶液的ph值小于蛋白质的等电点时，带正电荷的蛋白质与生物碱试剂的负离子结合成盐而沉淀。

在本发明中，甲醛作为细胞固定剂，冰醋酸作为细胞核固定加强剂；三氯甲烷作为助蛋白质萃取沉淀剂。乙醇一方面作为脱水剂，可与体液沉淀物中的蛋白质争夺水化膜；加入乙醇还可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀；另一方面，乙醇作为还作为稳定剂可以与三氯甲烷产生的有毒光气作用生成无毒的碳酸二乙酸，减少配制过程对人呼吸系统和眼睛的损害。

因此，使用本发明的试剂，能够把体液标本沉淀物即刻凝固，具有如下优点：

1、试剂原料价格低廉，制备方便，成本低；

2、可以在离心同时快速完成液体标本沉淀物凝固，保持细胞形态，诊断准确率高；

3、所用设备为一般实验室用试管及普通离心机，操作方法便捷。

具体实施方式

本发明的把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂，一种把体液标本沉淀物即刻凝固的试剂，每100体积数量的试剂中内含有5-20体积数量的三氯甲烷、0.5-8体积数量的冰醋酸，1-10体积数量的甲醛溶液，余下为乙醇溶液；所述乙醇溶液的体积浓度为10-100％，所述甲醛溶液的体积浓度为37～40％。

试剂配制：

在乙醇溶液中加入三氯甲烷、甲醛溶液、冰醋酸混合、搅拌均匀配制成试剂。

具体配制举例：如果用体积浓度40％的乙醇溶液配制，就是先在50毫升体积浓度40％的乙醇溶液中加三氯甲烷5毫升，冰醋酸0.5毫升，甲醛溶液1毫升，然后用体积浓度40％的乙醇溶液补足至100毫升。

试验方法

将乙醇溶液代号设为a，三氯甲烷代号设为b，冰醋酸代号设为c，甲醛溶液代号设为d。

将乙醇溶液a的体积浓度由低到高分成6梯度,依次用a、b、c、d、e、f表示。将三氯甲烷b、冰醋酸c、甲醛溶液d分的加入体积按从低到高分成3梯度，配制的每一份试剂如下表1所示。

表1

本试验以a的a、b、c、d、e、f6个体积浓度、对应b、c、d分别加入的a、b、c3种体积，制成不同配比的试剂共6组18份实施例，每份实施例的试剂体积均是100ml，如下表2所示。

表2

上述18个不同配比的实施例试剂统一用同一个病人的样本进行测试。试验时以10毫升体液为量离心沉淀，均加入1毫升的上述试剂，观察凝固情况、切片细胞、背景情况，观察结果如下表3。

表3

上表3中，

凝固：肉眼细胞凝固成块的情况，以+～+++表示，“+”越多表示凝固状态越好；

背景：细胞块中含血等背景情况，以+++～+表示，“+”越少表示背景情况越好；

细胞：细胞形态，染色清晰度情况，以+～+++表示，“+”越多染色清晰度越好。

从表3横行方向上，a^a组实施例a^ab^ac^ad^a、a^ab^bc^bd^b、a^cb^cc^cd^c凝固出来的组织量少，散；a^b组实施例a^bb^ac^ad^a、a^bb^bc^bd^b，凝固出来的组织量稍多，实施例a^bb^cc^cd^c明显增多；a^c组实施例a^cb^ac^ad^a、a^cb^bc^bd^b，凝固出来的组织量比a^b明显的增多，实施例a^cb^cc^cd^c与a^bb^cc^cd^c没有明显差异。

从表3竖列方向上，在实施例a^ab^ac^ad^a至a^fb^ac^ad^a，细胞组织凝固情况从实施例a^cb^ac^ad^a开始基本>0.2cm：在实施例a^ab^bc^bd^b至a^fb^bc^bd^b细胞组织凝固情况从实施例a^cb^bc^bd^b开始基本>0.4cm；在实施例a^ab^cc^cd^c至a^fb^cc^cd^c细胞组织凝固情况从a^bb^cc^cd^c开始基本>0.4cm。

肉眼看凝固>0.4cm的a^bb^cc^cd^c，a^cb^bc^bd^b凝固状态最好。

显微镜下：a^cb^cc^cd^c，a^db^ac^ad^a，a^db^bc^bd^b，a^eb^ac^ad^a在细胞形态保存上优良。其中，实施例a^cb^cc^cd^c凝固状态、细胞形态、染色极佳，具高诊断价值；实施例a^db^bc^bd^b虽然背景稍多，但凝固状态、细胞形态、染色较佳，具有诊断价值。实施例a^eb^ac^ad^a凝固状态、细胞形态、染色较佳，背景太多细胞碎片，影响显微镜观察。实施例a^db^ac^ad^a在细胞形态、染色较佳，背景稍多，但凝固状态不理想。