本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测甲状腺过氧化酶抗体的检测试剂。
背景技术：
甲状腺过氧化物酶抗体是主要的甲状腺组织自身抗体，是甲状腺激素合成过程的关键酶，与甲状腺组织免疫性损伤密切相关。近年来，通过免疫学、生物化学及基因重组研究，已证实甲状腺过氧化物酶抗体是甲状腺微粒体的主要成分，甲状腺过氧化物酶抗体是甲状腺微粒体抗体的活性成分，因此存在于患者体内的甲状腺过氧化物酶抗体就是甲状腺微粒体。甲状腺过氧化物酶抗体也是自身免疫性甲状腺疾病重要的自身抗原，可以刺激机体免疫系统产生抗甲状腺过氧化物酶抗体。测定抗甲状腺过氧化物酶抗体的临床意义与抗甲状腺球蛋白抗体也大致相同，主要对于慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进症、原发性甲状腺功能减退症，有辅助诊断、疗效考核价值。某些病人抗甲状腺球蛋白抗体阴性，但抗甲状腺过氧化物酶抗体阳性，因而两种抗体同时检测可提高抗甲状腺自身抗体的阳性检出率，并可作为临床诊断和鉴别诊断自身免疫性甲状腺炎的重要依据。
检测甲状腺过氧化物酶抗体有助于解决临床诊断出现的难题，比如异常的高促甲状腺素水平同时伴随正常水平的游离甲状腺素，若甲状腺过氧化物酶抗体升高，应考虑亚临床甲状腺功能减退和早期慢性淋巴细胞性甲状腺炎。低水平的甲状腺过氧化物酶抗体在无症状患者中占10％，预示易患甲状腺自身免疫性疾病；85％甲亢和甲减患者表现高水平的甲状腺过氧化物酶抗体，因此在大多数甲状腺自身免疫性疾病的诊断中，甲状腺过氧化物酶抗体和甲状腺球蛋白抗体联合检测具有更高的临床价值。此外，产后甲状腺炎，萎缩性甲状腺、部分结节性甲状腺肿患者，甲状腺过氧化物酶抗体可为阳性；某些自身免疫性疾病如类风湿疾病、系统性红班狼疮可见甲状腺过氧化物酶抗体升高。
目前临床上检测甲状腺过氧化物酶抗体的方法有放射性免疫分析、酶免疫分析、免疫荧光分析、时间分辨免疫荧光分析和化学发光免疫分析等。放射性免疫分析灵敏度高、特异性强但是该方法具有放射性污染，操作繁琐，市场逐渐萎靡；酶免疫分析操作简单、检测时间短而且无污染，但灵敏度不够好；免疫荧光分析和时间分辨免疫荧光分析需要特殊的仪器设备，检测费用较贵；化学发光免疫分析具有灵敏度高，特异性强、检测范围宽、特别是无放射性危害等优势，在逐步取代放射性免疫分析和酶免疫分析。在医疗机构及临床实验室中，性能较好的试剂有罗氏、雅培、贝克曼、西门子、日立等，这几种检测方法所得的临床标本的检测值可较真实的反应患者的疾病状态，特异性强、灵敏度高，漏诊率和误诊率都较低，常常作为临床标本检测的理想方法，但是上述试剂必须与昂贵的配套仪器配套使用，大大增加了试剂成本，主要适用于大型医院及科研机构。针对于国家二级及以下医院来说采用进口试剂成本很高，不适宜推广。目前国产的检测甲状腺过氧化物酶抗体的检测试剂以北京源德生物技术有限公司为代表，国产的试剂不需要特殊昂贵的仪器，检测费用较低，适用于中小型医院及一些乡镇医院，但存在一定的稳定性不好，重复性略差等现象。因此，有必要开发处国产的高性能的化学发光免疫分析检测试剂。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种检测甲状腺过氧化物酶抗体的检测试剂，该检测试剂具有较高的灵敏度及准确性，与本公司生产的全自动化学发光免疫分析仪配套使用大大降低了试剂成本。
本发明的技术方案包括以下内容：1、一种检测甲状腺过氧化物酶抗体的检测试剂，包括：试剂一：甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒悬浮液；试剂二：反应稀释液；试剂三：以鼠抗人igg标记的吖啶酯；校准品和质控品。其特征在于是由以下配比：试剂一组成为甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒悬浮液2.5mg，防腐剂7.5μl，稀释液为含有蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液。试剂二组成为含有蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液，防腐剂7.5μl。试剂三组成为以鼠抗人igg标记的吖啶酯2.5mg，防腐剂7.5μl，稀释液为含有蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液。校准品组成为水平1：甲状腺过氧化物酶抗体32.14iu/ml，防腐剂1μl，含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液；水平2：甲状腺过氧化物酶抗体159.24iu/ml，防腐剂1μl，含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液。质控品组成为质控品1含甲状腺过氧化物酶抗体21.18-36.38iu/ml，防腐剂1μl，含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液；质控品2含抗甲状腺过氧化物酶抗体103.07-147.27iu/m，防腐剂1μl，含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液；
所述甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒悬浮液中，所采用的磁微粒具有超顺磁性，其粒径为1.0-1.2μm。
本发明检测试剂的样本为人血清或血浆，也适用于含有乙二胺四乙酸、柠檬酸钠或肝素抗凝剂的样本。
本发明的试剂采用化学发光法磁微粒检测法，生产工艺稳定可行，生产成本低，对该试剂的系统评价表明其具有准确度高，高度的灵敏度和特异性以及不易受到各种干扰物质的影响。试剂重复性好，有效期可达12个月，适于临床应用。
具体实施方式
一种检测甲状腺过氧化物酶抗体的检测试剂，包括：
试剂一：甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒悬浮液；
试剂二：反应稀释液；
试剂三：鼠抗人igg标记的吖啶酯；
校准品、指控品。
实施例1试剂一的制备：
步骤一：将磁微粒溶液进行充分混匀，取1ml磁微粒均匀溶液(含量1％)置于微管中。将微管静置于磁性底座上1分钟，并除去上清液。取1ml反应液加入到上述微管中，充分混匀震荡30分钟后将100μg甲状腺过氧化物酶抗原加入到反应液中，继续室温震荡混匀30分钟。将微管置于磁性底座上1分钟，除去上清液。用1ml清洗缓冲液对磁微粒进行冲洗后，静置除去上清液，重复清洗三次后得甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒悬浮液。加入指定量的含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液，混匀得试剂一。
步骤二：试剂一浓度的确定
将甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒用检定合格的磁微粒稀释液稀释，同加样量体积进行正交实验，稀释比例分别为1∶6.25、1∶12.5、1∶25和1∶50，加样量体积25μl、50μl。使用tpo抗原梯度稀释样本对反应系统进行评价，结果见表1。
表1磁微粒的稀释比例与加样量正交实验
从表1的结果可知：磁微粒1∶12.5稀释、50μl使用时，线性相关系数r最佳，为0.9982，此时斜率也较好为0.9341，且本底较低。综合考虑线性相关系数r、斜率、变异和本底，最后优选甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒稀释比例为1∶12.5、加样量为50μl。
实施例2试剂二的制备：
步骤一：(1)取鼠抗人igg抗体1mg，用结合缓冲液透析24小时，并用结合缓冲液配制成浓度1mg/ml。(2)取吖啶酯1mg溶于1ml二甲基亚砜中得到浓度为1mg/ml。(3)取上述浓度的吖啶酯溶液80μl加入到抗体溶液中，并充分搅拌2小时。(4)用存储缓冲液对步骤(3)中的溶液进行透析24小时，再加入50％甘油后充分混匀。加入指定量的含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液混匀后得试剂二。
步骤二：试剂二浓度的确定
将鼠抗人igg标记吖啶酯按照1∶100、1∶500、1∶1000和1∶2000的比例分别进行稀释，同50μl、100μl的加样量体积进行正交实验。使用甲状腺过氧化物酶抗原梯度稀释样本对反应系统进行评价，检测结果见表2所示。
表2鼠抗人igg标记吖啶酯的浓度梯度与加样量正交实验
由表2可以看出，鼠抗人igg标记的吖啶酯在1∶100稀释100μl加样量时，线性相关系数r最佳，为0.9963，此时斜率也最好为0.9385。因此，优选鼠抗人igg标记的吖啶酯稀释比例为1/100、加样量为100μl。
实施例3试剂三稀释浓度确定
将反应稀释液原料按照1∶100、1∶200、1∶400、1∶800分别进行稀释，通过检测甲状腺过氧化物酶抗体梯度稀释样本，对反应系统进行评价。检测结果见表3所示。
表3反应稀释液的稀释比例
由表3可以看出，反应稀释液在1∶200稀释时，线性相关系数r最佳，为0.9972，此时线性参考品斜率也最好为0.9580。因此最终优选反应稀释液稀释比例为1∶200。
实施例4校准品的制备
取甲状腺过氧化物酶抗体加入到含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液充分混匀后，用国家标准品进行赋值。
实施例5指控品的制备
取甲状腺过氧化物酶抗体加入到含蛋白稳定剂的磷酸盐缓冲液充分混匀后，用国家标准品进行赋值。
实施例6检测方法：
第一步，将样本、反应稀释液以及人甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒混合并孵育，样本中的甲状腺过氧化物酶抗体同人甲状腺过氧化物酶抗原包被的磁微粒相结合。洗涤后进入第二步，加入抗人igg标记的吖啶酯孵育形成“甲状腺过氧化物酶抗原磁微粒-甲状腺过氧化物酶抗体-抗人igg吖啶酯”复合物，洗涤后，在反应混合物中加入预激发剂和激发剂。样本中的甲状腺过氧化物酶igg抗体含量和全自动化学发光免疫系统检测到的相对光亮值成正比，通过校准曲线确定甲状腺过氧化物酶抗体浓度。本试剂在方法学上采用了灵敏度高的化学发光法，操作简单，分析灵敏度高，能够大大降低检测成本，并在方法学上能避酶联免疫分析法由于血清或血浆中甲状腺过氧化物酶抗体低滴度而导致的漏检。
实施例7线性范围验证：
用检测试剂的缓冲体系将抗甲状腺过氧化物酶抗体国家标准品，按照本试剂的线性范围(2.00iu/ml～1000.00iu/ml)，按比例稀释至少5个浓度点，重复测定3次，计算其平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r应不低于0.9900。
表4线性范围测试
实施例8灵敏度试验：
严格按照说明书操作，检测零校准品，重复测定20次，得出20次测量结果的发光值(相对发光值)，计算其平均值和标准差，得出平均值和两倍标准差之和，根据零浓度校准品和校准品水平一之间的浓度和发光值(相对发光值)进行两点回归，得出一次方程，将平均值和两倍标准差之和带入此一次方程中，得出对应的浓度值，即为最低检测限，结果应不高于1.00iu/ml。
表5灵敏度测试
实施例9稳定性实验：
在2-8℃储存条件下，分别在0个月、12个月对质控品进行测定，每个样本测定10次，取均值。结果表明(见下表)，变异系数能够满足要求，说明实施例1、2中的检测试剂在2-8℃储存条件下至少可以稳定12个月。
表6稳定性实验测试
以上对本发明实施例所提供的一种抗甲状腺过氧化物酶抗体检测试剂，进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。