一种六神曲的薄层色谱检测方法与流程

本发明属于药材鉴别领域，具体涉及一种六神曲的薄层色谱检测方法。

背景技术：

六神曲又名六曲、神曲，最早收载于《药性论》，由蓼子草、苍耳草、青蒿、苦杏仁、赤小豆、麦麸、面粉制备而成，具有健脾和胃、消食调中的功效。临床主要用于因饮食失节，食积停滞所引起的脘腹胀满，呕吐泻痢等消化不良症状。

薄层色谱可将中药内含成分通过分离达到直观、可视化，具有承载信息大、专属性强、快速、操作简便、易普及等优点，目前文献报道的六神曲薄层色谱检测方法中，通常是通过有机溶剂提取制备供试品溶液，然后薄层检测。但六神曲的制备工艺为水提后发酵而成，而使用有机溶剂制备供试品时，可能引入一些脂溶性成分杂质，影响检测结果的准确性。

例如公开号为cn105403653a的专利申请公开了一种六神曲的薄层色谱检测方法，但其制备供试品溶液时使用甲醇提取，而且薄层色谱检测时使用的展开剂为石油醚、乙酸乙酯、甲酸三者混合，配制复杂。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供一种六神曲质量检测的薄层色谱方法。

本发明提供了一种六神曲的薄层色谱检测方法，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：

取待检药材，用水提取，然后石油醚萃取，甲醇溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液；

以东莨菪内酯对照品制备对照品溶液；

或者，以东莨菪内酯对照品、青蒿药材、阴性对照药材分别制备对照品溶液；所述阴性对照药材是按照下述方法制备得到的药材：取六神曲的原料药，所述原料药中不包括青蒿，按照六神曲的制备工艺制备；

(3)薄层检测：

分别将供试品溶液和对照品溶液在薄层板上点样，展开剂展开，显色，检视，比对即可；所述展开剂由下述体积份的成分组成：

石油醚2-3份、乙酸乙酯1-2份。

其中，步骤(1)中，所述展开剂是石油醚-乙酸乙酯＝2：1。

其中，步骤(1)中，用水提取的方法如下：

加入10倍量的水，煎煮1h，过滤，即可。

其中，步骤(2)中，以东莨菪内酯对照品制备对照品溶液的方法为：取东莨菪内酯对照品，甲醇溶解。

其中，步骤(2)中，以阴性对照药材制备对照品溶液的方法为：按照制备供试品溶液相同的方法，取阴性对照药材粉末，用水提取，然后石油醚萃取，甲醇溶解。

其中，用水提取的方法如下：加入10倍量的水，煎煮1h，过滤，即可。

其中，所述步骤(3)中，所述薄层板为高效硅胶g板。

其中，步骤(3)中，所述点样的点样量是10μl。

其中，步骤(3)中，所述显色以2％香草醛硫酸乙醇溶液为显色剂。

其中，步骤(3)中，所述检视的波长是365nm。

由于六神曲中青蒿的制备工艺为水提取，所以成分应该更加关注水溶性成分，常规甲醇超声的方法并不适用。

本发明的薄层色谱检测方法，通过特定的样品前处理方法，选择了合适的对照品和展开条件，将六神曲中的多个成分有效分离开来，可以准确、可靠地监控六神曲药材的质量，为六神曲的品质鉴别、临床疗效提供了有效保障。

另外，由于六神曲是以多种中药材为原料制得的发酵产品，没有标准品。为了更全面地监控六神曲药材的质量并且证明本发明的专属性，发明人自制了不含青蒿的阴性对照药材，可以与东莨菪内酯对照品、青蒿药物三者共同作为对照，从而更全面地监控六神曲药材的质量。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1青蒿不同部位筛选图；从左到右依次为石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水部位

图2展开剂系统的选择；其中，1、4为青蒿石油醚部位，2、5为六神曲成品石油醚部位，3、6为缺青蒿阴性对照石油醚部位。

图3不同显色剂的选择；其中，1、4为青蒿石油醚部位，2、5为六神曲成品石油醚部位，3、6为缺青蒿阴性对照石油醚部位。

图4不同点样量的选择；其中，1～6分别代表成品石油醚部位1μl、2μl、5μl、10μl、15μl、20μl。

图5不同温度条件下展开情况；其中，1、4为青蒿石油醚部位，2、5为六神曲成品石油醚部位，3、6为缺青蒿阴性对照石油醚部位。

图6不同湿度条件下展开情况；其中，1、4为青蒿石油醚部位，2、5为六神曲成品石油醚部位，3、6为缺青蒿阴性对照石油醚部位。

图7不同薄层板展开情况；其中，1、4为青蒿石油醚部位，2、5为六神曲成品石油醚部位，3、6为缺青蒿阴性对照石油醚部位。

图8六神曲成品鉴别；其中，1为青蒿石油醚部位，2为六神曲成品石油醚部位，3为缺青蒿阴性对照石油醚部位，4为东莨菪碱内酯，365nm荧光下检视。

具体实施方式

下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。

本发明所用的实验仪器与试剂如下：

1仪器bsa224s型精密电子天平(北京赛多利斯天平有限公司，d＝0.1mg，max220g)；hhs-8s电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱器厂)；zf-90型紫外分析仪(温州奥利生物医学仪器厂)；uph-ⅰ-10t超纯水器(成都超纯科技有限公司)；毛细管(0.3mm,100mm华西医科大学仪器厂)

2试剂试药对照品东莨菪碱内酯(批号151208，成都普菲德生物技术有限公司)、对照品青蒿素(批号151103，成都普菲德生物技术有限公司)；

石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、甲酸等(试剂均有成都市科龙化工厂试剂提供；高效硅胶g薄层板(青岛海洋化工厂分厂)。

3样品，青蒿样品由四川辅正药业有限责任公司提供。

六神曲(批号20170524，四川辅正药业有限责任公司)，制备工艺如下：取净制的青蒿、蓼子草、苍耳草各50g加10倍量水，煎煮1h，过滤，浓缩成清膏，另取苦杏仁10g和赤小豆10g粉碎成粗粉，与面粉500g、麦麸250g混和均匀，再将药汁加入与药粉搅拌均匀，以手捏成团，掷之即散为宜，制成方块，发酵，干燥，即得。

实施例1本发明的六神曲鉴别方法

1、供试品溶液的制备

将青蒿药物2g、六神曲样品(以青蒿有效浓度折算36.8g)及不含青蒿的六神曲阴性对照样品(34.8g)分别单独用10倍量的水煎煮1h，趁热过滤，滤液浓缩至50ml,取石油醚1:1萃取，重复两次，合并石油醚部位挥干，再加2ml甲醇溶解，作为供试品。

2、对照品溶液的制备

取东莨菪碱内酯对照品加甲醇配置成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

3、固定相：高效硅胶g薄层板。

4、薄层色谱鉴别

分别吸取10μl待检样品，分别点于同一高效硅胶g薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视即可。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：

试验例1本发明方法的筛选

1、供试品溶液的制备方法筛选

将青蒿药物2g、六神曲样品(以青蒿有效浓度折算36.8g)及不含青蒿的六神曲阴性对照样品(34.8g)分别单独用水提取，然后将水煎液分别用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分成5个溶剂部位，将不同药物的同一溶剂部位，点在一张薄层板上，筛选出最佳部位，并以此部位为供试品。

分别将青蒿不同部位提取物分别用各自展开剂展开，展开剂分别为

石油醚：乙酸乙酯(2:1)、二氯甲烷：乙酸乙酯(2:1)、二氯甲烷：乙酸乙酯(1:1)、正丁醇：醋酸：水(4:1:5)、正丁醇：甲醇(1:1)。

得到结果如图1。

由图1可见，石油醚部位斑点较多且分离较好，利于六神曲有效鉴别，氯仿、乙酸乙酯部位斑点较少，正丁醇、水部位没有斑点。因此选择石油醚部位为供试品。

2、展开系统的筛选

以石油醚部位为供试品，筛选三种展开系统的分离情况，

展开系统1：石油醚-乙酸乙酯(2:1)；

展开系统2：石油醚-二氯甲烷(2:1)；

展开系统3：石油醚-乙醚(2:1)。

结果如图2所示。

由图2可见，展开系统2、3各点rf值均偏小，展开系统1点多位于中间且分离度较好。结果显示应选择展开系统1。

3.显色剂的筛选

使用不同显色剂，结果见图3。

由图3可见，使用香草醛显色剂时显色斑点清晰，颜色分明，显示点数较多，各点较好分辨。因此应选择2％香草醛硫酸乙醇溶液为显色剂。

4、不同点样量的选择

取六神曲成品石油醚部位，使用不同的点样量，结果见图4。

由图4可见，1-5μl点样时斑点较浅难分辨，10-20μl范围斑点清晰且无拖尾现象，故点样量应在10-20μl范围内。

5、薄层色谱展开条件(不同温度)的耐用性考察

比较在4℃(冰箱冷藏室)和30℃(水浴控温)展开比较，结果见图5。

从图5可知，展开系统ⅰ在4℃和30℃的不同温度条件下，展开情况均较好，说明展开条件的耐用性较好。

6、薄层色谱展开条件(不同湿度)的耐用性考察

比较在相对湿度32％(配制硫酸:水＝68:100的溶液)和相对湿度72％(配制硫酸:水＝27.5:100的溶液)，分别将上述2种不同浓度的硫酸溶液倒入展开缸一侧，另一侧加入展开系统1，饱和展开缸30min，薄层点样后将薄层板放入展开缸，密闭1小时，放入展开剂一侧展开，结果见图6。

从图6可知，展开系统1在相对湿度32％和72％的不同湿度条件下，展开情况均较好，说明展开条件的耐用性较好。

7、不同薄层板的考察

自制版与预制板的比较，结果见图7。

从图7可知，展开系统ⅰ(正文系统)在自制版和预制板不同的薄层板条件下，展开情况均较好，说明本发明展开条件稳定可靠。

试验例2六神曲成品的鉴别

取六神曲成品，按照实施例1的方法进行薄层色谱检测，结果见图8。

从图8可以看出：六神曲样品与青蒿样品水提液经石油醚萃取后，在上述展开条件下，明显与东莨菪内脂有相同对应点，而青蒿阴性对照组没有对应点，由此可鉴别六神曲。

综上，本发明的薄层色谱检测方法，通过特定的样品前处理方法，选择了合适的对照品和展开条件，将六神曲中的多个成分有效分离开来，可以准确、可靠地监控六神曲药材的质量，为六神曲的品质鉴别、临床疗效提供了有效保障。