尿液中冠心病的蛋白标志物及其用途的制作方法

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及尿液中冠心病的蛋白标志物及其用途。

背景技术：

冠状动脉粥样硬化性心脏病简称冠心病，以动脉粥样硬化为主要特征的冠心病及其并发症致病率及致死率较高已引起人们广泛关注。伴随疾病发生过程，动脉粥样硬化到一定时期便会发展成心肌梗死及中风，直接威胁人们生命。在其恶化之前进行疾病早期诊断对于病情的控制及治疗至关重要。目前，早期心血管疾病诊断方法，诸如心电、超声、传统的冠脉造影技术、冠状动脉计算机断层扫描血管造影技术等对于监测疾病严重程度有着良好的灵敏性和特异性，但这些方法有造价高，侵袭性强，不适用于大规模临床样本的监测诊断。

通过对冠心病的细胞生物学和分子生物学的研究已经揭示了动脉粥样硬化恶化的过程中的很多作用机制。如脂蛋白和炎症因子的变化、血管细胞微环境糖代谢的变化，具体如粘附分子捕获血液中的白细胞，内皮细胞通透性增强，单核细胞转化成巨噬细胞同时刺激其对低密度脂蛋白颗粒的吸收，最终导致泡沫细胞的形成。氧化型低密度脂蛋白可诱导动脉粥样硬化过程中一些潜在的炎症反应发生。lxr家族蛋白通过促进胆固醇的流出和逆向转运阻止巨噬细胞中泡沫细胞的形成。低密度脂蛋白中的s100a8钙离子结合蛋白(mrp8)与动脉粥样硬化信号转导相关。s100a8与s100a9与长期的炎症反应、白细胞黏附迁移、以及内皮细胞中脂肪酸的摄取过程密切相关，随着动脉粥样硬化的恶化，泡沫细胞和炎症细胞的聚集，以及细胞碎片和胆固醇凝结会形成坏死中心，同时平滑肌细胞和细胞外基质大分子会形成纤维帽覆盖纤维化的动脉粥样硬化斑块，动脉血管壁内的坏死中心和纤维化斑块将导致血管内低氧环境，使氧气和血管内能量代谢的主要来源-葡萄糖的运送受阻。但这些基于细胞、血液、组织的研究结果尚无开展大规模临床检测的实例，究其原因主要因素为生物样本复杂程度性和取材的限制，虽然基于免疫方法的elisa可以进行大规模的检测，但受限于抗体滴度和特异性的影响，在定量的结果上也有待商榷。

因此目前迫切开发一种非侵袭性样本获取，能提供相对准确的定性和定量数据，可用于监测诊断动粥样硬化患者病情的临床诊断方法。近年，尿液不仅应用于恶性肿瘤标记物检测分析中，在心脑血管疾病研究中也开始被采用。尿液相比其他临床材料，如心血管组织、细胞系、血液，具有处理方法简便，非侵袭性获取的优点，所以是一种很好的样本来源。与血液样本不同，尿液中含有较少的白蛋白和免疫球蛋白等高丰度蛋白，能够减少疾病标记物发现过程中高丰度蛋白对中低丰度蛋白鉴定的干扰。另外，尿液样本不仅包含血浆中的成分，还含有许多不同反应通路的系统代谢物，含有相对较全的生物信息。基于以上优势，采用尿蛋白质组学策略打开了发现心血管疾病相关蛋白质的一个新的窗口。多反应监控(multiplereactionmonitor,mrm)是一种基于二级质谱信号的靶标质谱定量分析技术，它不需要特殊的化学标记辅助，能够同时进行绝对和相对定量测定。靶标质谱技术能够同时对多种蛋白质进行定性和定量分析，从而克服了基于免疫方法对抗体特异性和滴度的限制。

在本发明中通过收集了冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和健康对照组各9例的尿液样品，采用标记定量蛋白质组学分析策略进行冠心病尿液差异蛋白质的筛选。除了鉴定到apoe等冠心病相关蛋白质外，还发现虽然同源家族的其他蛋白质曾报道和心脑血管疾病相关，但尿液中tff1和apod和冠心病的相关性并无明确报道。其中，tff1(三叶草因子1)该家族蛋白质序列特点都是含有三个保守二硫键的40个氨基酸长度的片段，主要分布在消化系统上皮中，其具体作用机理尚不明确，但发现其在多种肿瘤中表达水平异常的现象，该蛋白在冠心病中表达情况尚无报道。apod(载脂蛋白d)隶属载脂蛋白家族，主要功能是结合和转运脂质，此外还参与脂蛋白受体的识别、调节脂蛋白代谢酶活性等过程。

在本发明中对鉴定到的差异蛋白质开发了基于靶标质谱技术同时对tff1和apod等蛋白质检测的方法，利用仅单独存在于这两种蛋白质的特异性标签肽段，筛选母子离子对，对质谱数据结果的统计分析，发现尿液tff1和apod的靶标质谱数据结果对冠心病和健康对照组具有很好的区分度，因无tff1和apod单独或联合应用作为检测冠心病的先例，本发明开发包含尿液标准蛋白质酶解产物、检测蛋白质标签肽段离子对列表、酶解等主要实验试剂的检测试剂盒，本发明的研究结果对于冠心病的大规模筛选具有较好的应用前景。

上述对背景技术的陈述仅是为了方便对本发明技术方案(使用的技术手段、解决的技术问题以及产生的技术效果等方面)的深入理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

技术实现要素：

鉴于本领域的上述需求，根据本公开的一些实施方案，提供了蛋白的鉴定试剂在制备用于诊断冠心病的试剂中的用途，其中所述的蛋白选自tff1、apod及其组合。

在具体的实施方案中，相较于健康对照，选自以下的蛋白的表达水平降低指示所述受试者患有冠心病：tff1、apod及其组合。其中，健康对照是指未患有冠心病的个体。

在具体的实施方案中，适用于本公开的鉴定试剂是质谱鉴定试剂、抗体或其抗原结合片段。在具体的实施方案中，抗体是单克隆抗体。本公开对单克隆抗体的物种来源没有限制，任何能够结合上述蛋白的抗体均可以使用。在具体的实施方案中，抗原结合片段包括但不限于：fab、fab'、(fab')2、fv、scfv、双特异抗体、三特异抗体、四特异抗体、双-scfv。任何保留了抗原结合活性的抗体片段均适用于本公开。

在具体的实施方案中，所述质谱鉴定试剂是在多反应监控中使用的。多反应监控是一种基于二级质谱信号的靶标质谱定量分析技术，能够同时进行绝对和相对定量测定，它不需要特殊的抗体，从而克服了基于免疫方法对抗体特异性和滴度的限制。多反应检测技术能够同时对多种蛋白质进行定性和定量分析。

在具体的实施方案中，所述质谱鉴定试剂选自：seqidno:3所示的tff1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:4所示的apod的标签肽的鉴定试剂、及其组合。

在具体的实施方案中，seqidno:3所示的tff1的标签肽的位置3和位置13的半胱氨酸具有氨乙酰化修饰的半胱氨酸。

标签肽是指能够代表某一个蛋白的肽段，其特征在于存在且特异性仅存在于某蛋白质氨基酸序列中。

在具体的实施方案中，表达水平是指蛋白表达水平。

在具体的实施方案中，表达水平是在受试者的尿液样本中测定的。

在具体的实施方案中，所述受试者是人。

本发明的另一方面提供了一种用于诊断冠心病的试剂盒，其包含选自以下的蛋白的鉴定试剂：tff1、apod及其组合。

在具体的实施方案中，所述鉴定试剂是质谱鉴定试剂、抗体或其抗原结合片段，优选所述抗体是单克隆抗体。

在具体的实施方案中，所述质谱鉴定试剂在多反应监控中使用的。在具体的实施方案中，所述质谱鉴定试剂选自：seqidno:3所示的tff1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:4所示的apod的标签肽的鉴定试剂、及其组合。

在具体地实施方案中，用于诊断冠心病的试剂盒还包含0.25-0.75μg/μl的胰蛋白酶、40-60mm的nh4hco3、acn、1-3μg/μl的内标lysc肽段。

优选地，用于诊断冠心病的试剂盒还包含0.5μg/μl胰蛋白酶、50mmnh4hco3、100％acn、2μg/μl内标lysc肽段。

在具体的实施方案中，所述试剂盒还包含选自以下的蛋白的鉴定试剂：bodg、al1a1、apoe、a1ag1、klk1、klk3、gsta1、k1c19、anxa5、k1c13、a1ag2、dnas1、sdc4、ampe、cd166、lynx1、b7z1i4、及其组合。

具体地，试剂盒还包含选自以下的鉴定试剂：seqidno:5所示的bodg的标签肽的鉴定试剂、seqidno:6所示的al1a1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:7所示的apoe的标签肽的鉴定试剂、seqidno:8所示的a1ag1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:9所示的klk1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:10所示的klk3的标签肽的鉴定试剂、seqidno:11所示的gsta1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:12所示的k1c19的标签肽的鉴定试剂、seqidno:13所示的anxa5的标签肽的鉴定试剂、seqidno:14所示的k1c13的标签肽的鉴定试剂、seqidno:15所示的a1ag2的标签肽的鉴定试剂、seqidno:16所示的dnas1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:17所示的sdc4的标签肽的鉴定试剂、seqidno:18所示的ampe的标签肽的鉴定试剂、seqidno:19所示的cd166的标签肽的鉴定试剂、seqidno:20所示的lynx1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:21所示的cdnaflj57258的标签肽的鉴定试剂、及其组合。

本发明的另一方面提供了一种用于诊断受试者中冠心病的方法，包括步骤：

1)获得受试者的尿液样本，

2)任选地，从尿液样本中分离尿蛋白，

3)确定受试者尿液样本中选自以下的蛋白的表达水平：tff1、apod及其组合。

在具体的实施方案中，使用质谱方法、elisa方法、或westernblot方法确定表达水平。

当采用质谱方法确定蛋白及其表达水平时，在获得尿液样本的步骤之后，还可以包括消化步骤。在具体的实施方案中，用蛋白酶消化尿液样本中的蛋白。

在具体的实施方案中，所述质谱方法是多反应监控。具体通过蛋白质的标签肽段，筛选质谱响应信号良好的母子离子对，构建母子离子对列表，优化质谱检测碰撞能量和电压的方法，确定能够用于进行定性和定量检测分析的母子离子对列表及检测条件。具体地，检测seqidno:3所示的tff1的标签肽的鉴定试剂、seqidno:4所示的apod的标签肽的鉴定试剂、及其组合。

基于尿液上述两种蛋白的定量检测方法，可以结合标准品用其进行人群中这两种蛋白基线的建立，可以基于正常人的含量范围对冠心病诊断提供辅助评判方法。

附图说明

图1：tff1离子对谱图。tff1标签肽段qncgfpgvtpsqcank的b5、y7、y8、y11、y12离子。

图2：apod离子对谱图。apod标签肽段ipttfengr的y3、y5、y6、y7、y8离子。

图3a和图3b：蛋白质tff1(图3a)和apod(图3b)在对照组和冠心病组的mrm检测结果。cn为正常对照组，as为冠心病组。

图4：两种蛋白质和组合后的roc曲线。x轴数值为特异性，y轴数值为灵敏性，均为百分数表示。

图5：基于tff1和apod结合ampe蛋白质的roc曲线。x轴数值为特异性，y轴数值为灵敏性，均为百分数表示。

具体实施方式

以下结合附图，通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。以下提供了本发明实施方案中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1尿液中冠心病相关蛋白质筛选

采用同位素标记相对和绝对定量(itraq)标记差异蛋白质组学技术在尿液中筛选冠心病相关蛋白质。

材料与试剂

1)仪器：超高效液相色谱仪(waters公司)，型号acquityuplch-class。tripletof质谱仪(absciex公司)，型号5600。

2)主要试剂：piercebca蛋白定量分析试剂盒(thermoscientific公司)；胰蛋白酶(promega公司)；c18固相萃取小柱(3cc,60mg,waters公司)；4标itraq试剂(absciex公司)；c18反相色谱柱(4.6mm×250mm,c18,3μm,waters公司)。

3)样本：获自北京协和医院。

1.1尿液蛋白质的制备

取尿液样品在4℃条件下以5000g离心30min去除细胞碎片。取上清，以1:3比例加入预冷的无水乙醇(-20℃)，4℃条件下放置30min沉淀蛋白。以14000g的转速离心30min后取蛋白沉淀组分，并将无水乙醇挥发干净。加入蛋白裂解液，移液枪反复吹打，使蛋白充分裂解。将复溶的溶液以14000g的转速离心30min，去除沉淀，保留蛋白上清。所得蛋白质样品用bradford法测定蛋白浓度，等质量进行电泳(sds-page)。将蛋白样品等质量混合，-80℃冻存备用。

1.2滤膜辅助蛋白酶切

取10kd滤过管，加入200μlua(8m尿素+0.1mtris，ph8.5)至膜上，放入超速离心机，转速设为14000g，温度设为18℃，离心约2min，待液体离下，弃掉下层废液，重复两次。每个人取等质量蛋白质样品混合，加至滤过管中，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约20min，待液体离下，弃掉下层废液。向滤过管中加入200μlua，涡旋震荡1min，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液。重复两次。滤过管中加入200μl20mmdtt，涡旋震荡1min，放入37℃恒温水浴箱中，还原1h。水浴结束后将样品取出，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液。向滤过管中加入200μlua，涡旋震荡1min，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液，重复两次。向滤过管中加入200μl50mmiaa，涡旋震荡1min，避光，室温，反应45min。反应结束后，将样品放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液。向滤过管中加入200μlua，涡旋震荡1min，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液。重复两次。向滤过管中加入200μl25mmnh4hco3，涡旋震荡1min，放入超速离心机，14000g，18℃，离心约10min，待液体离下，弃掉下层废液。重复两次。向滤过管中加入200μl25mmnh4hco3，涡旋震荡1min。按胰蛋白酶与蛋白质质量比1:50的比例加入胰蛋白酶，涡旋震荡混匀。将样品固定于水漂里，放入盛有1l冰水的烧杯中，放入微波炉，高火，微波1min。

1.3c18固相萃取

取出c18固相萃取柱，置于固相萃取装置。向柱子中加入500μl100％乙腈进行c18的活化，待液体自然滴净，重复两次。向柱子中加入500μl1‰三氟乙酸，清洗柱子，重复两次。加入酶切好的酶解液，待液体自然滴净。向柱子中加入500μl1‰三氟乙酸进行清洗柱子除盐，重复两次。向柱子中加入500μl100％乙腈洗脱纯化的肽段，待液体自然滴下，用ep管收集滴的洗脱液，重复两次。抽干复溶后采用bca法测定纯化后多肽浓度，并分装100μg肽段抽干进行后续标记实验。

1.4itraq标记差异蛋白质组分析

将疾病组多肽样品与对照组多肽样品分别平均分成两份，每份100μg置于旋转真空干燥仪中，真空抽干。对照组分别选用itraq试剂114和116标记，疾病组分别选用itraq试剂115和117标记。将标记后的各组分样品(疾病组及对照组)等量混合。并进行离线高ph超高效液相色谱分离，收集的洗脱液置于旋转真空干燥仪中，真空抽干后复溶于0.1％fa中进行lc-ms/ms分析。所得质谱图经过mascot和scaffold软件分析，数据库为swiss-prot人蛋白质数据库(www.uniprot.org)，筛选差异蛋白质。设置两个以上肽段为筛选标准，共鉴定到蛋白数876个。标准密度散点图分析表示疾病组(r²＝0.9309)与对照组(r²＝0.9039)都有良好的实验技术重复性。其中差异倍数大于1.5倍的有100种蛋白质。包含tff1和apod。

实施例2尿液蛋白质tff1和apod的质谱检测

为更好地开展这些差异蛋白质组学分析结果在进一步更大规模临床样本中的应用检测，发明人对于鉴定到的差异蛋白质，采用靶标质谱分析方法对差异蛋白质进行监控。多反应监控(multiplereactionmonitor,mrm)是一种基于二级质谱信号的靶标质谱定量分析技术，它不需要特殊的化学标记辅助，能够同时对多种蛋白质进行绝对和相对定量测定。

材料与试剂

1)仪器：超高效液相色谱仪(waters公司)，型号acquityuplch-class。tripletof质谱仪(absciex公司)，型号5600。

2)主要试剂：piercebca蛋白定量分析试剂盒(thermoscientific公司)；胰蛋白酶(promega公司)；c18固相萃取小柱(3cc,60mg,waters公司)；4标itraq试剂(absciex公司)；c18反相色谱柱(4.6mm×250mm,c18,3μm,waters公司)。

3)样本：获自北京协和医院。

2.1差异蛋白质的母子离子对列表

基于已知信息或假定信息设定质谱检测规则，对符合规则的离子进行信号记录，去除大量不符合规则离子信号的干扰，从而得到质谱信息的一种数据获取方式。具体地说，即是根据多肽母离子质量数和碎片离子质量数，选择母离子-子离子对，允许符合设定的母离子进入碰撞室，碰撞完成后，只记录设定子离子信号。通过母离子和子离子的两次选择，去除干扰离子，降低化学背景，从而提高灵敏度。

差异蛋白质进行靶标质谱图与尿蛋白质数据库谱图的匹配分析，制定了靶标质谱检测的母子离子对。蛋白质酶解和肽段纯化过程同实施例1，其中mrm检测结果与itraq结果一致的19种蛋白质，其特征肽段的母子离子对列表如下表1：

其中tff1的肽段序列为qncgfpgvtpsqcank(seqidno:3)，apod的肽段序列为ipttfengr(seqidno:4)，这两个标签肽段的离子对质谱积分谱图1和图2所示。

2.2tff1和apod的mrm检测结果和roc曲线分析

经文献检索，除apoe已经被广泛报道的蛋白质之外，还发现相对报道较少，但其同源家族其他蛋白质在心血管疾病中有一定报道的两种蛋白质tff1和apod，他们可能作为潜在的冠心病的标志物，具有应用前景，所以我们对其进行进一步接收者操作特征曲线(receiveroperatingcharacteristic，roc)曲线分析。这两种蛋白质的氨基酸序列信息如下：

tff1(seqidno:1)，登录号：p04155。matmenkvicalvlvsmlalgtlaeaqtetctvaprerqncgfpgvtpsqcankgccfddtvrgvpwcfypntidvppeeecef

apod(seqidno:2)，登录号：p05090。mvmlllllsalaglfgaaegqafhlgkcpnppvqenfdvnkylgrwyeiekipttfengrciqanyslmengkikvlnqelradgtvnqiegeatpvnltepaklevkfswfmpsapywilatdyenyalvysctciiqlfhvdfawilarnpnlppetvdslkniltsnnidvkkmtvtdqvncpkls

基于质谱库中不同肽段的质谱响应信号和特异性分别选取tff1的肽段序列为qncgfpgvtpsqcank(seqidno:3)，apod的肽段序列为ipttfengr(seqidno:4)，基于离子对的质谱信号的积分色谱图，对13个冠心病病例和另外13个正常对照组的mrm质谱数据进行统计分析，通过内参肽段的归一化处理后积分面积作为表签肽段的量化数值，分析了mrm质谱结果在冠心病组和正常对照组的异同，如图3a和图3b所示这两种蛋白质总体上在冠心病组表现出整体下调的趋势。

对于mrm定量结果进一步进行接收者操作特征曲线(receiveroperatingcharacteristic，roc)曲线分析，从而判断这两种蛋白质区分是否患有冠心病的能力。tff1的肽段序列为qncgfpgvtpsqcank(seqidno:3)，apod的肽段序列为ipttfengr(seqidno:4)，还将这两个肽段的结果进行整合分析。roc曲线如图4所示。

apod和tff1单独使用和其整合后的灵敏性和特异性如表2所示，单独apod和tff1的roc曲线下面积auc为0.89和0.93，两种蛋白质整合后auc分析结果为0.95并且特异性为0.99，灵敏度为0.85，上述指标显示这两种蛋白质对于冠心病具有较好的临床检测应用前景。

表2roc曲线分析结果

auc：曲线下面积。

实施例3基于尿液蛋白质tff1和apod结合其他尿液蛋白质的质谱检测结果分析

除了尿液tff1和apod，还对另外17种蛋白质同时进行了质谱检测，现以ampe为例，对蛋白质组合进行roc曲线分析，结果显示tff1、apod和ampe这三种蛋白质结合后的auc分析结果为0.95，其特异性为0.92，灵敏度为0.82，相比仅用tff1和apod无明显改善，但该操作显示可以基于tff1和apod结合其他尿液蛋白质进行整合分析，具体roc曲线详见图5。

实施例4尿液蛋白质tff1和apod质谱检测试剂盒

采用实施例1中的蛋白质制备流程，进行了正常人尿液蛋白质的制备，使用胰蛋白酶酶解后的肽段作为标准蛋白，从而对提取和液相分离以及质谱分析系统能否成功对tff1肽段qncgfpgvtpsqcank和apod肽段ipttfengr进行确认。将上述标准尿蛋白质肽段作为试剂盒的成分，另外结合胰蛋白酶(0.5μg/μl，将胰蛋白酶粉末溶于50mm乙酸)、nh4hco3(50mm水溶液，在酶解中起到缓冲液的作用)、acn(100％)(乙腈，在液质分析肽段过程中主要的液相洗脱试剂)、内标lysc肽段(2μg/μl，作为质谱分析过程的指控和样本质谱数据的均一化标准，本实验室酶解的标准肽段)作为其他试剂成分。检测母子离子对列表和质谱碰撞能力及电压等如表3所示，从而组装尿液蛋白质tff1和apod质谱检测试剂盒。

表3tff1和apod蛋白质特征肽段的母子离子对列表

dp代表去簇电压；ce代表碰撞能量。

以上示例性实施方式所呈现的描述仅用以说明本发明的技术方案，并不想要成为毫无遗漏的，也不想要把本发明限制为所描述的精确形式。显然，本领域的普通技术人员根据上述教导作出很多改变和变化都是可能的。选择示例性实施方式并进行描述是为了解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的其它技术人员便于理解、实现并利用本发明的各种示例性实施方式及其各种选择形式和修改形式。本发明的保护范围意在由所附权利要求书及其等效形式所限定。

序列表

<110>中国医学科学院基础医学研究所

<120>尿液中冠心病的蛋白标志物及其用途

<130>370133cg

<160>21

<170>patentinversion3.3

<210>1

<211>84

<212>prt

<213>人类（homosapiens）

<400>1

metalathrmetgluasnlysvalilecysalaleuvalleuvalser

151015

metleualaleuglythrleualaglualaglnthrgluthrcysthr

202530

valalaproarggluargglnasncysglypheproglyvalthrpro

354045

serglncysalaasnlysglycyscyspheaspaspthrvalarggly

505560

valprotrpcysphetyrproasnthrileaspvalproprogluglu

65707580

glucysgluphe

<210>2

<211>189

<212>prt

<213>人类（homosapiens）

<400>2

metvalmetleuleuleuleuleuseralaleualaglyleuphegly

151015

alaalagluglyglnalaphehisleuglylyscysproasnpropro

202530

valglngluasnpheaspvalasnlystyrleuglyargtrptyrglu

354045

ileglulysileprothrthrphegluasnglyargcysileglnala

505560

asntyrserleumetgluasnglylysilelysvalleuasnglnglu

65707580

leuargalaaspglythrvalasnglnilegluglyglualathrpro

859095

valasnleuthrgluproalalysleugluvallysphesertrpphe

100105110

metproseralaprotyrtrpileleualathrasptyrgluasntyr

115120125

alaleuvaltyrsercysthrcysileileglnleuphehisvalasp

130135140

phealatrpileleualaargasnproasnleuproprogluthrval

145150155160

aspserleulysasnileleuthrserasnasnileaspvallyslys

165170175

metthrvalthraspglnvalasncysprolysleuser

180185

<210>3

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>tff1的标签肽

<400>3

glnasncysglypheproglyvalthrproserglncysalaasnlys

151015

<210>4

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>apod的标签肽

<400>4

ileprothrthrphegluasnglyarg

15

<210>5

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>bodg的标签肽

<400>5

sertyrglualaglythrgluileserarg

1510

<210>6

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>al1a1的标签肽

<400>6

leualaaspleuilegluarg

15

<210>7

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>apoe的标签肽

<400>7

alaalathrvalglyserleualaglyglnproleuglngluarg

151015

<210>8

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>a1ag1

<400>8

seraspvalvaltyrthrasptrplys

15

<210>9

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>klk1的标签肽

<400>9

leuthrgluproalaaspthrilethraspalavallys

1510

<210>10

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>klk3的标签肽

<400>10

pheleuargproglyaspaspserserhisaspleumetleuleuarg

151015

<210>11

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>gsta1的标签肽

<400>11

alaileleuasntyrilealaserlys

15

<210>12

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>k1c19

<400>12

valleuaspgluleuthrleualaarg

15

<210>13

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>anxa5的标签肽

<400>13

pheilethrilepheglythrarg

15

<210>14

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>k1c13的标签肽

<400>14

glnservalglualaaspileasnglyleuarg

1510

<210>15

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>a1ag2的标签肽

<400>15

gluhisvalalahisleuleupheleuarg

1510

<210>16

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>dnas1的标签肽

<400>16

ilealaalapheasnileglnthrpheglygluthrlys

1510

<210>17

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>sdc4的标签肽

<400>17

gluthrgluvalileaspproglnaspleuleugluglyarg

1510

<210>18

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>ampe的标签肽

<400>18

alaserleuileaspaspalaphealaleualaarg

1510

<210>19

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd166的标签肽

<400>19

serserasnthrtyrthrleuthraspvalarg

1510

<210>20

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>lynx1的标签肽

<400>20

valleuserasnthrgluaspleuproleuvalthrlys

1510

<210>21

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cdnaflj57258的标签肽

<400>21

serthrileleutyralaglyasnasplys

1510