MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断的试剂盒中的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒中的应用。

背景技术：

肺腺癌是世界上最难治疗的疾病之一，有发病率高，致死率高和存活率低的特点。现在主流的诊断方法是利用生物标志物对活体组织进行病理学检测，在生物标记物诊断领域，应用比较多的有E-cadherin,Vimentin,Ki67等。尽管如此，临床疗效仍不理想，错误诊断率及漏诊率仍然很高。目前临床选用的肺腺癌标记物在特异性和敏感性方面难于一致，特异性高的敏感性差，而敏感性高的特异性差，这是近年来制约肺癌标记物应用的主要因素。近年研究发现不同类型肺癌体液中肿瘤标记物水平有较大差异。因此筛选新型的，高效的肺腺癌诊断生物标记物势在必行。

Mest(mesoderm-specific transcript)/Peg1(paternally expressed gene 1)定位于人类染色体7q32，该区域是人类基因组中重要的印记群之一，Mest周围的十几个基因都同样是印记基因。已经有文献表明该区域印记紊乱会导致一系列疾病如Russell–Silver syndrome(RSS)。作为一个alpha/beta水解酶超家族成员，之前有报道MEST高表达于胚胎组织和精子细胞中。另外又有报道表明MEST高表达于脂肪组织，能够调节脂肪形成。以上的各项研究，主要是围绕着MEST的基因印记以及在脂肪发生相关功能的领域而展开，而MEST在肿瘤发生发展方面扮演的角色目前仍不清楚。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒中的应用。

为实现本发明的目的，技术方案如下：

MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒中的应用。这是基于本发明发明人发现MEST蛋白在肺癌中高度表达所提出的发明创造。

所述的肺癌为肺腺癌。

所述MEST蛋白的氨基酸序列如下所示：

MVRRDRLRRMREWWVQVGLLAVPLLAAYLHIPPPQLSPALHSWKSSGKFFTYKGLRIFYQDSVGVVGSPEIVVLLHGFPTSSYDWYKIWEGLTLRFHRVIALDFLGFGFSDKPRPHHYSIFEQASIVEALLRHLGLQNRRINLLSHDYGDIVAQELLYRYKQNRSGRLTIKSLCLSNGGIFPETHRPLLLQKLLKDGGVLSPILTRLMNFFVFSRGLTPVFGPYTRPSESELWDMWAGIRNNDGNLVIDSLLQYINQRKKFRRRWVGALASVTIPIHFIYGPLDPVNPYPEFLELYRKTLPRSTVSILDDHISHYPQLEDPMGFLNAYMGFINSF。

MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒中的应用，包括如下步骤：，对来自个体的生物学样品中检测所述的MEST蛋白，得到生物标记值；MEST蛋白的表达量和肺癌病人的存活时间成负相关。

优选的，所述的生物学样品是肺组织时，所述的检测方法为免疫组织化学分析法。

优选的，所述生物学样品选自体液时，所述的检测方法为流式细胞学分析法。

优选的，所述个体是人或小鼠。

优选的，所述个体是肺腺癌患者或肺腺癌小鼠模型。

本发明的有益效果

(1)MEST作为一种新型的生物标志物，在肺腺癌细胞中高表达，而在癌旁组织中低表达或者不表达，利用该指标的能够准确地判断肺腺癌，大大提高肺腺癌的确诊率。

(2)通过检测临床组织样品中MEST的表达量，可以判读病人的预后情况。本发明发现，高表达MEST的病人存活时间平均约3个月，而低表达MEST病人的平均存活时间约5.5个月。

(3)检测手段上，MEST可作为活体检测或体液检测指标之一，利用免疫组织化学或者流式抗体可以特异性检测到组织或者病人体液中MEST的含量。

附图说明

图1是MEST在人肺腺癌组织染色强度，利用肺腺癌病人肿瘤组织进行MEST免疫组化染色的结果图；其中，按照MEST在肺腺癌组织的染色强度进行排序，其中图A为染色强度最低，而图D为染色强度最高。

图2是病例1的人肺腺癌组织及癌旁组织中MEST的表达情况检测结果图，其中，图A是病例1的人肺腺癌组织，图B是癌旁组织。

图3是病例2的人肺腺癌组织及癌旁组织中MEST的表达情况检测结果图，其中，图A是病例2的人肺腺癌组织，图B是癌旁组织。

图4是MEST在肺腺癌与癌旁的表达统计图。

图5是MEST表达量与肺腺癌病人存活时间的关系曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

利用MEST作为肺腺癌生物标记物的检测手段主要为免疫组织化学和流式细胞术检测。针对临床活体组织样品的检测，主要是通过免疫组化染色检测MEST的表达量，而利用流式细胞术检测主要对象是体液中的循环肿瘤细胞。本次实施例子以免疫组化作为介绍：

对90例肺腺癌病人组织中获取癌腺和癌旁组织，分别进行免疫组化分析。

(1)肺腺癌组织芯片用anti-MEST单克隆抗体(biorbyt)按照1:500进行4℃孵育过夜，之后用PBS清洗3次，并用过氧化物酶交联的二抗(Dako)孵育；最后用二氨基联苯胺(Dako)进行显色；

(2)染色结果的判读方法按照染色强度分为A、B、C和D(结果见图1)。，对90例肺癌腺病人进行MEST免疫组化染色，选取2例具有代表性的癌和癌旁进行展示，如图2和3所示，MEST在肺腺癌组织中染色强度深而在癌旁组织中染色比较浅，说明MEST在肺腺癌组织中高表达而在癌旁组织中低表达。根据图2和3对MEST在90例肺腺癌病人组织的染色情况进行评分及统计，结果如图4所示，MEST在肺腺癌组织中染色强度均显著高于癌旁组织，统计结果显示有显著差异(P<0.001)。

(3)根据免疫组化结果对病人进行生存分析：按照MEST染色强度将病人肺腺癌分成2组，MEST阳性组和阴性组，结合对应的存活时间拟合出存活曲线；

(4)MEST表达水平的临床参数关系表：按照MEST染色强度将病人肺腺癌分成2组，MEST阳性组和阴性组，结合对应的病人年龄，性别，肿瘤分级进行统计检验。

图1，2、3和4，肺腺癌病人免疫组化结果显示MEST在肺腺癌组织的染色强度和细胞阳性率均显著高于癌旁组织，90例病人的统计结果显示有显著差异(P<0.01)。另外，根据MEST染色强度，将病人肺腺癌分成2组，MEST阳性组和阴性组，结合对应的存活时间拟合出存活曲线(图5)，说明MEST的表达水平和病人存活时间有显著的负相关关系。图5是事先把数目按照中位数分为高和低组，然后再做成图，纵坐标的0.5对应过去2条曲线所对应的横坐标分别为3个月和5.5个月。临床病理特征表明MEST的高表达与转移相关(表1)，预示着MEST是一个有效的肺腺癌诊断生物标记物，具有肺腺癌临床诊断的应用价值。

关于MEST蛋白的功能，之前有报道该蛋白在脂肪生成方面扮演着重要的角色，可作为脂肪生成的生物标记物。而现在发现MEST在肺腺癌中高度表达，并且其表达量和肺腺癌病人的存活时间成负相关，可以作为一个有效的肺腺癌临床诊断的生物标记物。

表1.MEST表达水平与肺腺癌组织临床病理参数关系表

本发明的实施方式不限于此，按照本发明的上述内容，利用本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，本发明还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，均落在本发明权利保护范围之内。

序列表

<110> 暨南大学

<120> MEST蛋白在制备肺癌辅助诊断和/或预后判断试剂盒中的应用

<141> 2017-11-24

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 335

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Val Arg Arg Asp Arg Leu Arg Arg Met Arg Glu Trp Trp Val Gln

1 5 10 15

Val Gly Leu Leu Ala Val Pro Leu Leu Ala Ala Tyr Leu His Ile Pro

20 25 30

Pro Pro Gln Leu Ser Pro Ala Leu His Ser Trp Lys Ser Ser Gly Lys

35 40 45

Phe Phe Thr Tyr Lys Gly Leu Arg Ile Phe Tyr Gln Asp Ser Val Gly

50 55 60

Val Val Gly Ser Pro Glu Ile Val Val Leu Leu His Gly Phe Pro Thr

65 70 75 80

Ser Ser Tyr Asp Trp Tyr Lys Ile Trp Glu Gly Leu Thr Leu Arg Phe

85 90 95

His Arg Val Ile Ala Leu Asp Phe Leu Gly Phe Gly Phe Ser Asp Lys

100 105 110

Pro Arg Pro His His Tyr Ser Ile Phe Glu Gln Ala Ser Ile Val Glu

115 120 125

Ala Leu Leu Arg His Leu Gly Leu Gln Asn Arg Arg Ile Asn Leu Leu

130 135 140

Ser His Asp Tyr Gly Asp Ile Val Ala Gln Glu Leu Leu Tyr Arg Tyr

145 150 155 160

Lys Gln Asn Arg Ser Gly Arg Leu Thr Ile Lys Ser Leu Cys Leu Ser

165 170 175

Asn Gly Gly Ile Phe Pro Glu Thr His Arg Pro Leu Leu Leu Gln Lys

180 185 190

Leu Leu Lys Asp Gly Gly Val Leu Ser Pro Ile Leu Thr Arg Leu Met

195 200 205

Asn Phe Phe Val Phe Ser Arg Gly Leu Thr Pro Val Phe Gly Pro Tyr

210 215 220

Thr Arg Pro Ser Glu Ser Glu Leu Trp Asp Met Trp Ala Gly Ile Arg

225 230 235 240

Asn Asn Asp Gly Asn Leu Val Ile Asp Ser Leu Leu Gln Tyr Ile Asn

245 250 255

Gln Arg Lys Lys Phe Arg Arg Arg Trp Val Gly Ala Leu Ala Ser Val

260 265 270

Thr Ile Pro Ile His Phe Ile Tyr Gly Pro Leu Asp Pro Val Asn Pro

275 280 285

Tyr Pro Glu Phe Leu Glu Leu Tyr Arg Lys Thr Leu Pro Arg Ser Thr

290 295 300

Val Ser Ile Leu Asp Asp His Ile Ser His Tyr Pro Gln Leu Glu Asp

305 310 315 320

Pro Met Gly Phe Leu Asn Ala Tyr Met Gly Phe Ile Asn Ser Phe

325 330 335