检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法与流程

文档序号:14909615发布日期:2018-07-10 23:02阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:它包括以下步骤:

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液,上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后,加入含有5-20%体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL,并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀4-6min后,再加入10mol/L的NaOH溶液200μL,并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后,再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min,得到清液,分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中,在常温下用N2缓慢吹干;向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL,然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后,再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min,得到上清液,分别取上述上清液90uL,用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测,得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图,以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y,以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x,将以上检测所得至少三组数据进行线性回归,拟合得到标准曲线方程为y=a*x+b,并且得出权重系数a和b;所述标准工作液为含有奥氮平的溶液;

(a)标准工作液的配制:

精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶,用含水量为0%-25%的甲醇溶液进行溶解,并定容于10ml,得到标准储备液A,将标准储备液A用含水量为20%-50%的甲醇溶液的稀释液进行稀释,分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液,并在-80℃条件下保存;

(二)检测血液的离心

取待检测血液至少5ml,在离心速度为3500rpm下离心10min,取上清液得血清或血浆,上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用;

(三)待测样品处理

(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中,然后用移液枪移取含有5-20%体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中,并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min,然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL,并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后,再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-10min,得到清液;

(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中,在常温下用N2缓慢吹干;

(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL,然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后,再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min,得到上清液即为待测样品;

(四)待测样品的检测

使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测,得出上述待测样品的奥氮平色谱图,将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中,通过计算得到待检测样品中目标物浓度x,即为待检测血液中的奥氮平药物浓度。

2.如权利要求1所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液,七种不同浓度的标准工作液分别为含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL浓度的奥氮平溶液。

3.如权利要求2所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述萃取剂是由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成萃取剂。

4.如权利要求3所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:在步骤(a)中用由4∶6的水和甲醇组成的稀释液进行稀释。

5.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/160.5M。

6.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters公司的XBridgeC18。

7.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱仪设置的柱温为35℃。

8.如权利要求4所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述高效液相色谱仪所使用流动相为含0.3%甲酸和20nmol/L乙酸铵的水-甲醇,并且采用梯度洗脱,流速为0.35mL/min,进样量为15uL。

9.如权利要求4至9之一所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述紫外检测器是VANQISH检测器,其检测波长为275mn,采集频率为5.0Hz。

10.如权利要求9所述的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法,其特征在于:所述含水量为体积比的含水量。

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