本发明涉及宠物药品
技术领域：
，具体涉及硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法及其制备方法。
背景技术：
：乳房炎是奶牛泌乳期最为常见、发病率很高的一种乳房疾病，可造成患牛泌乳机能及产奶量急剧下降，给奶牛养殖造成巨大损失。硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)为动物专用第四代头孢类抗生素，主要用于治疗由葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等引起的奶牛泌乳期乳房炎，具有抗菌谱广，吸收快，生物利用度高，安全性好等优势。在制备硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)后，需要检测其中的药物含量，即进行质量控制，保证药物安全。目前硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的检测一般采用高效液相色谱法，该实验方法耗时长，不利于提高生产效率，且投入成本高，不利于普及；且需要采用不环保的试剂如三乙胺和高氯酸钠，不利于环保。技术实现要素：基于此，本发明提供一种检测速度快、成本低且环保的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法。为了实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：一种硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，其包括如下步骤：取硫酸头孢喹肟乳房注入剂，置于离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷，混匀并离心；弃去离心得到的上清液，沉淀物在室温下挥发至干；在挥发至干的沉淀物中加入乙腈，使硫酸头孢喹肟溶解；将溶解后的硫酸头孢喹肟定量移置至量瓶中，用所述的乙腈稀释至刻度，摇匀、滤过，得到供试品溶液；取供试品溶液，用紫外-可见分光光度法，在266±1nm的波长处测定吸收度；取硫酸头孢喹肟对照品，用乙腈溶液稀释，制备成为浓度为特定硫酸头孢喹肟浓度的对照品溶液；对照品溶液用紫外-可见分光光度法在266±1nm的波长处测定吸收度；以对照品溶液计算硫酸头孢喹肟乳房注入剂中硫酸头孢喹肟的含量。上述的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，用正己烷混合离心后，再采用乙腈作为溶剂溶解，定量后进行检测，相比其他方法来说检测结果更加准确，且直接溶解后检测，检测速度大大提高；采用的试剂成本较低，使得检测成本大大降低，且试剂无毒环保，响应了国家的环保政策。其中一些实施例中，所述以对照品溶液计算硫酸头孢喹肟乳房注入剂中硫酸头孢喹肟的含量具体为：硫酸头孢喹肟乳房注入剂中硫酸头孢喹肟的含量＝对照品溶液浓度/对照品溶液吸收度*供试品溶液吸收度*供试品溶液稀释倍数/供试品称样量。其中一些实施例中，所述步骤：定量移置至量瓶中，用所述的乙腈稀释至刻度，摇匀、滤过之后，还具有如下步骤：精密量取稀释后的硫酸头孢喹肟至量瓶中，再次用所述的乙腈稀释至刻度，得到供试品溶液。其中一些实施例中，所述用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷的加入量与硫酸头孢喹肟中头孢喹肟含量的比值为0.5-1.5ml/mg。其中一些实施例中，所述离心的转速为4500r/min。其中一些实施例中，所述离心时间为10min。其中一些实施例中，所述步骤：弃去离心得到的上清液，沉淀物在室温下挥发至干，具体是：弃去离心得到的上清液，得到中间物，将所述中间物再次离心，得到沉淀物，沉淀物在室温下挥发至干。其中一些实施例中，所述乙腈为8％-12％的乙腈。其中一些实施例中，所述乙腈为10％的乙腈。其中一些实施例中，所述步骤：在挥发至干的沉淀物中加入乙腈，使硫酸头孢喹肟溶解，具体是：在挥发至干的沉淀物中加入乙腈，并在冷水浴中超声处理，使硫酸头孢喹肟溶解。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本发明所述的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，用于测定硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)中硫酸头孢喹肟的含量，以保证药物含量在标准范围内，保证药物的安全性。所述的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，包括如下步骤：取硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)，置于离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷，混匀并离心；硫酸头孢喹肟中包含头孢喹肟，其含量在制备时有粗略的估计，例如加入的硫酸头孢喹肟中含头孢喹肟10mg，后续再进行精确测定。采用正己烷和硫酸头孢喹肟混合，超速离心后硫酸头孢喹肟沉淀在底部。其中的正己烷的加入量与硫酸头孢喹肟中头孢喹肟预估含量的比值为0.5-1.5ml/mg，例如头孢喹肟含量10mg，加入正己烷5-15ml。实际操作中用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷是将头孢喹肟加入正己烷中，一瓶500ml正己烷大概加20-30mg头孢喹肟。当饱和有头孢喹肟析出时，将饱和的正己烷放置一段时间进行沉淀，将加进去的硫酸头孢喹肟完全沉在底部，避免移液时引进硫酸头孢喹肟，影响实验结果。弃去离心得到的上清液，沉淀物在室温下挥发至干；此步骤中，第一次弃去离心得到的上清液后，得到中间物，然后中间物再次离心，得到沉淀物；其中的离心次数可以根据需要而定，当然，次数越多，沉淀越完全。离心采用转速为4500r/min，离心时间为8-12min，优选为10min。在挥发至干的沉淀物中加入乙腈，并在冷水浴中超声处理，使硫酸头孢喹肟溶解；该步骤中乙腈为10％的乙腈，采用8％-12％的乙腈作为稀释液，硫酸头孢喹肟在该稀释液中的性能比较稳定，能够保证测试的准确性。稀释液优选为10％的乙腈。将溶解后的硫酸头孢喹肟定量移置至量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀、滤过，得到供试品溶液；该步骤中，还可以包括如下步骤：精密量取稀释后的硫酸头孢喹肟至量瓶中，再次用上述的乙腈稀释至刻度，得到供试品溶液。取供试品溶液，用紫外-可见分光光度法，在266±1nm的波长处测定吸收度。取相同质量的硫酸头孢喹肟对照品，定量移置至量瓶中，用上述的乙腈稀释至刻度，摇匀、滤过，得到特定硫酸头孢喹肟浓度的对照品溶液，取对照品溶液，用紫外-可见分光光度法，在266±1nm的波长处测定吸收度；以对照品溶液计算硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)中硫酸头孢喹肟的含量。其中，计算方法为：硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)中硫酸头孢喹肟的含量＝对照品溶液浓度/对照品溶液吸收度*供试品溶液吸收度*供试品溶液稀释倍数/供试品称样量。例如对照品溶液的头孢喹肟浓度为0.1mg/ml。上述硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，例如：取混匀后的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)适量，约相当于头孢喹肟10mg，精密称定，置50ml离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷10ml，混匀，每分钟4500转离心10分钟，弃去上清液，重复提取2次，沉淀在室温下挥发至干，加入10％乙腈约30ml，置冷水浴中超声处理10分钟，使硫酸头孢喹肟溶解，定量移置100ml量瓶中，用10％乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml置50ml量瓶中，用10％乙腈稀释至刻度即得供试品溶液。照紫外-可见分光光度法，在266nm的波长处测定吸收度。另取硫酸头孢喹肟对照品适量，约相当于头孢喹肟10mg，精密称定，置100ml量瓶中，用10％乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制备成0.1mg/ml的对照品溶液，同法测定，计算硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)中硫酸头孢喹肟的含量。上述方法是利用对照品溶液的标准曲线得到的，标准曲线的绘制方法如下：精密称取硫酸头孢喹肟对照品10mg，置100ml容量瓶中，加10％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液。分别精密移取1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml以及7.00ml的对照品储备液到50ml容量瓶中，用10％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，制成含头孢喹肟分别为2、4、6、8、10、12.、14ug/ml的对照工作液，用紫外-可见分光光度计进行测定。以对照品工作液的浓度(c)为横坐标，吸光度值(a)为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程，求得相关系数r，得到得标准曲线。实际数据：精密称取硫酸头孢对照品(批号：k0321406；来源：中国兽医药品监察所；含量82.6％)0.01020g。所得标准曲线数据如下：得到的标准曲线为：y＝0.0393x+0.0020，r＝0.9999，说明硫酸头孢喹肟的吸光度值与浓度有线性相关性。上述方法的偏差测定：本专利方法所测含量与原法定方法所测含量的对比数据如下：由上表可得，本专利方法所测含量与原法定方法所测含量的相对偏差均小于2.0％。用高效液相色谱法出峰慢，一针耗时9min，故一批样品总共需耗时2h(7针对照+6针样品)；而用紫外分光光度法测一批样品的上机时间约为20min，大大缩短检测时间。并且经过多次实验，本实施例所述的方法测得的结果与药典规定方法测得的结果很接近，二者的相对偏差在可接受的范围内。上述的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)含量的快速测定方法，用正己烷混合离心后，再采用乙腈作为溶剂溶解，定量后进行检测，相比其他溶剂来说检测结果更加准确，且直接溶解后检测，相比传统的检测方法，其前序步骤较少，检测速度大大提高；采用的试剂成本较低，使得检测成本大大降低，且试剂无毒环保，响应了国家的环保政策。以下将通过一些实验来证明本发明的方案优于传统的测定方案。稀释液的选择：分别取混匀后的本品适量，约相当于头孢喹肟10mg，精密称定，置50ml离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷10ml，混匀，离心10分钟(每分钟4500转)，弃去上清液，重复提取2次，沉淀在室温下挥发至干，加入稀释液约30ml，置冷水浴中超声处理10分钟，使硫酸头孢喹肟溶解，定量移置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取5ml置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，在266nm波长处分别测定吸收度。另取硫酸头孢喹肟对照品适量(约相当于头孢喹肟10mg)，精密称定，置100ml量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取5ml置50ml量瓶中，同法测定。稀释倍数的确定方法是：使上机浓度的吸光度数值控制在0.3-0.7范围内。稀释液选为：10％乙腈(此浓度是根据原液相色谱方法中高氯酸钠缓冲液中乙腈的比重而定)、水、甲醇、高氯酸钠缓冲液、无水乙醇、无水乙醇(盐酸溶解作为母液)，结果如下。由于样品在水、无水乙醇和无水乙醇(盐酸溶解作为母液)这3种溶液中溶解性差，故排除用此3种作为稀释液。以上六种溶剂中，高氯酸钠缓冲液含有盐，以10％乙腈为空白，在269nm处测得高氯酸钠缓冲液的吸光值为0.0169，偏高，故排除用高氯酸钠缓冲液作为稀释液。分别用10％乙腈、甲醇、无水乙醇作为稀释液，按上述操作步骤对同一批样品含量进行检测，放置一段时间后(实际放置了17h)，再复检一次含量，数据如下。放置前含量％放置后含量％甲醇105.2％100.9％10％乙腈105.7％106.8％由上表可知，以甲醇为稀释液时含量变化大，故该样品在甲醇中可能不稳定(吸光度数值由0.4降为0.2，且以甲醇为稀释液时紫外图谱中有两个峰，由此推断硫酸头孢喹肟在甲醇中可能会发生降解或发生某种变化)，故排除甲醇作为稀释液。而以10％乙腈为稀释液含量稳定，且乙腈的成本较之高氯酸钠缓冲液较低。故采取10％乙腈作为稀释液。最大吸收波长的确定：设置波长为200nm-400nm，按照上述的操作方法，在图形中寻找波峰从而确定最大吸收波长。具体是：取标准曲线项下不同溶度的工作液共7个样，分别测定其最大吸收波长，分别为265、265、266、266、265、266、266nm；取6个处理后的样品溶液测定最大吸收波长，分别为265、266、266、266、266、266nm。最大吸收波长在266±1nm，因此采用10％乙腈溶液为稀释液时，其最大吸收波长为266±1nm。上述方法的重复性测试：取标准曲线下的为10ug/ml工作液，在同一条件下，在波长为266±1nm时，用紫外-可见分光光度计重复测定10次，数据如下：共十个吸光度，其平均值为0.3433，rsd值为0.2％。取处理后的样品溶液6瓶，在同一条件下，在波长为266±1nm时，用紫外-可见分光光度计重复测定10次，数据如下：通过考察对照溶液和样品溶液连续上机时，测定吸光度的稳定性，实验结果较好，重复性能达到要求。上述方法的耐用性试验：分别取6份混匀后的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)适量(约相当于头孢喹肟10mg)，精密称定，置50ml离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷10ml，混匀，离心10分钟(每分钟4500转)，弃去上清液，重复提取2次，沉淀在室温下挥发至干，加入10％乙腈约30ml，置冷水浴中超声处理10分钟，使硫酸头孢喹肟溶解，定量移置100ml量瓶中，用10％乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液10ml至100ml容量瓶中，用10％乙腈定容至刻度。分别在0h、0.5h、1.5h、2.5h、3.5h、5h在266nm波长下测其吸光度，测定数值如下：6组数中，rsd值均小于2.0％，耐用性符合要求。上述方法的回收率测定：分别取9份已知含量的混匀后的硫酸头孢喹肟乳房注入剂(泌乳期)适量(约相当于头孢喹肟10mg)，精密称定，置50ml离心管中，加入用硫酸头孢喹肟饱和的正己烷10ml，混匀，离心10分钟(每分钟4500转)，弃去上清液，重复提取2次，沉淀在室温下挥发至干，加入10％乙腈稀释液约30ml，置冷水浴中超声处理10分钟，使硫酸头孢喹肟溶解，定量移置100ml量瓶中，分别按80％、100％、120％的比例加入已知含量的硫酸头孢喹肟原料，每个比例各3份，用10％乙腈稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取5ml置100ml量瓶中，用10％乙腈稀释液稀释至刻度，在266nm波长处分别测定吸收度。另取硫酸头孢喹肟对照品适量(约相当于头孢喹肟10mg)，精密称定，置100ml量瓶中，用10％乙腈稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取5ml置50ml量瓶中，同法测定，测定数据如下：回收率均落在95％-102％的区间内，rsd＝1.61％<2.0％，符合要求。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12