CD93在制备预警婴幼儿血管瘤脐血检测试剂盒及治疗药物中的应用的制作方法

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及cd93在制备预警婴幼儿血管瘤(infantilehemangioma,ih)的脐血检测试剂盒中的应用。

背景技术：

ih是最常见的婴幼儿良性肿瘤。在中国，发病率高达4-10％，流行病学研究发现女婴、早产儿与低体重儿中更常见，其中男女发病比例约为1：4。其独特的快速增殖与自然消退病程，使之成为人类观察肿瘤性血管生成的唯一天然模型。更重要的是，鉴于ih的高发病率、高侵袭性、独特的病程与流行病学表现，及不甚满意的治疗现状，探索其病因及发生发展机制成为国内外学者研究的热点和难点。

ih常于出生数周内出现，短期内迅速增殖，进展极快。60％以上瘤体位于颜面部，数周的生长就可能侵袭眼鼻口等器官，损毁患儿的容貌。除外观之外，部分病例还可伴发大面积溃疡、感染、呼吸道压迫梗阻、血小板减少等，甚至危及生命。经历一年左右的增生后，ih逐渐稳定，进入长达多年的退化期，但畸形的遗留和心理的创伤难以避免。目前，ih病因及发病机制尚未阐明，治疗缺乏特异性，其危害不容小觑，由于部分ih易与静脉畸形等表观类似的体表肿物相混淆，造成误诊误治，不但延误治疗，还给患儿带来不必要的医源性损伤。

ih发病率高，好发于面部，发病早而快，数周内迅速生长，猝不及防，给无数家庭带来延续多年，甚至终生的灾难，是中国弃婴的一个重要原因。但遗憾的是，目前尚缺乏预测ih发生的血清预警蛋白。

因此，寻找脐血预警蛋白，预测ih发生，对ih(尤其是严重ih)的早期监测、早期治疗、甚至预防ih发生，具有极为重要的临床意义和社会价值。同时，该预警蛋白的发现将为发病机制研究提供重要的线索，为开发相关药物，甚至预防用药提供新的切入点。

技术实现要素：

本发明的第一个目的在于，提供cd93在制备预警婴幼儿血管瘤的脐血检测试剂盒中的应用。

本发明的第二个目的在于，提供cd93在制备治疗婴幼儿血管瘤药物中的应用。

本发明的第三个目的在于，提供cd93在制备预防婴幼儿血管瘤药物中的应用。

本发明的第四个目的在于，提供cd93在制备血管瘤血清标记物中的应用。

为了实现上述第一个目的，本发明提供了cd93在制备预警婴幼儿血管瘤的脐血检测试剂盒中的应用。

为了实现上述第二个目的，本发明提供了cd93在制备治疗婴幼儿血管瘤药物中的应用。

为了实现上述第三个目的，本发明提供了cd93在制备预防婴幼儿血管瘤药物中的应用。

为了实现以上第四个目的，本发明提供了cd93在制备血管瘤血清标记物中的应用。

本发明的优点在于，本研究发现新生儿脐血血清cd93具有预测/预警ih发生的重要作用，并具有很强的预测/预警价值(roc曲线下面积达0.91，特异度达91.67％)，系ih肿瘤血清标记物，以往ih研究中从未见报道，属源头创新。由于新生儿脐血恰好在ih发病前期易于足量采集，具无创伤、家属易于接受等优势，因此，研发以cd93为预测/预警蛋白的脐血检测试剂盒或试纸，广泛应用于新生儿出生阶段，以预警发病率高达4-10％，常于出生数周内出现且迅速增殖，易损毁容貌的ih的发生，对最常见的婴幼儿良性肿瘤——ih开展早监测、早发现、早治疗，尽可能降低严重ih的致畸率，减少误诊误治率，具有极为重要的临床意义和社会价值。同时，提示cd93作为跨膜蛋白，能促进血管瘤干细胞血管生成，具有抗血管生成治疗靶标的重要意义，可应用于制备相关的治疗药物及预防用药，以开展ih的早期治疗及预防。

附图说明

图1定量质谱检测结果聚类分析图。

图2样品间鉴定蛋白一致性分析。

图3为差异频次图。

图4为差异蛋白火山图分析。

图5cd93elisa法血清学验证，提示两组血清间cd93表达水平存在显著性差异(p<0.01)，实验组高于对照组。

图6roc曲线分析，提示曲线下面积达0.9097，特异度91.67％，敏感度75％(p＝0.0007)，具有很强的诊断价值。

图7cd93elisa法血清学验证重复实验，再次验证两组血清间cd93表达水平存在显著性差异(p<0.05)，实验组高于对照组。

具体实施方式

以下，结合具体实施方式对本发明的技术进行详细描述。应当知道的是，以下具体实施方式仅用于帮助本领域技术人员理解本发明，而非对本发明的限制。

实施例1.新生儿脐血血清cd93具有预测/预警ih发生的重要作用

为寻找脐血预警蛋白，作如下实验标本采集和研究：

1、2014年至2016年前瞻性采集预留约1100例新生儿脐血血清标本，-80℃冰箱保存，实验过程中标本避免反复冻融。

2、每位新生儿均观察随访半年，发现ih的患儿共12例，从而将预留的血清标本分为两组：发生ih的实验组(随访阳性脐血血清)和未发生ih的对照组(随访阴性脐血血清)。

3、利用非标记定量蛋白质组学技术(label-freequantitativeproteomicstechnology)行定量质谱检测9对实验组和对照组血清样品，以获取两组间的差异蛋白。

4、聚类分析质谱检测结果，将实验组血清和对照组血清各聚成两类，绘制聚类图(图1)，每类都有一些表达水平相当的蛋白。样品间鉴定蛋白一致性分析(图2a和图2b)提示一致性在80％以上，说明样品制备和分析重复性良好。两组血清蛋白差异频次符合正态分布(图3)，可信度高。

5、检测对比9例实验组和9例对照组血清样品，共鉴定到517种差异蛋白，绘得差异蛋白火山图(图4)，图中红色(右上角区域)及绿色(左上角区域)散点提示实验组和对照组血清间显著性定量差异蛋白(p<0.05，变化倍数>2.5倍)，其中红点为增高超过2.5倍，绿点为降低超过2.5倍。红点所代表增高超过2.5倍的差异蛋白共19个，从中进行二次筛选：结合前期血管瘤组织标本基因芯片数据ipa(ingenuitypathwayanalysis)生物信息分析结果，分析上述19个差异蛋白与血管瘤发病机制的相关性，筛选出4个增高超过2.5倍的差异蛋白。

针对这4个差异蛋白分别进一步行elisa法血清学验证。最终检测得唯有cd93在两组间存在显著性差异(p<0.01)，实验组表达水平高于对照组(图5)。受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve，roc曲线)分析提示：曲线下面积(auc)达0.91，特异度91.67％，敏感度75％(p＝0.0007)，具有很强的诊断价值(图6)。并且，行重复实验，再次验证cd93在两组间存在显著性差异(p<0.05)，实验组cd93表达水平高于对照组(图7)。得以重复验证的结果说明：ih患儿在尚未出现ih的刚出生阶段，其脐血血清cd93表达水平已出现增高迹象，说明脐血血清cd93具有预测/预警ih发生的功能。并且，roc曲线auc达0.91(auc>0.9即具强诊断价值)，特异度达91.67％说明该因子诊断价值强，预警意义高。同时，上述数据说明脐血cd93与ih的发病密切相关，系良好的肿瘤血清标记物，不但与ih的发生/发展呈伴随现象，而且可能是ih的致病因素和治疗靶标。cd93作为跨膜蛋白，提示能促进血管瘤干细胞血管生成，具有抗血管生成治疗靶标的重要意义，可应用于制备相关的治疗药物及预防用药，以开展ih的早期治疗及预防。

综上所述，本研究发现新生儿脐血血清cd93具有预测/预警ih发生的重要作用，并具有很强的预测/预警价值，系ih肿瘤血清标记物。cd93在以往血管瘤研究中未见报道，本研究属源头创新。

本研究发现新生儿脐血血清cd93具有预测/预警ih发生的重要作用，并具有很强的预测/预警价值(auc达0.91，特异度达91.67％)，因此，可利用新生儿脐血易于足量采集、无创伤、家属易于接受等优势，研发以cd93为预测/预警蛋白的脐血检测试剂盒或试纸，广泛应用于新生儿，以预警发病率高达4-10％的ih的发生，对ih(尤其是严重ih)开展早监测、早发现、早治疗，尽可能降低严重ih的致畸率，减少误诊误治率，具有极为重要的临床意义和社会价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。