精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法与流程

文档序号:15680311发布日期:2018-10-16 20:30阅读:3960来源:国知局

本发明涉及医学检测样本收集技术领域,尤其涉及精确检测血液中谷氨酸及天冬氨酸的含量的血液处理方法。



背景技术:

谷氨酸和天冬氨酸是人体内重要的氨基酸,不仅是蛋白质的主要构成成分,在代谢中发挥着重要作用。谷氨酸是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一,是非必需氨基酸,可作为酸性氨基酸参与代谢;此外,又可作为兴奋性神经递质参与信息传递,涉及神经元和胶质细胞的增殖、发育、存活与死亡,以及学习和记忆密切相关的长时程增强效应(ltp)和长时程抑制效应(ltd)突触传递效率的可塑性变化。在脑缺血等病理情况下,脑内谷氨酸浓度升高的同时,血液中谷氨酸浓度也相应升高。测定血液中谷氨酸浓度可反映脑组织缺血程度的变化。

天冬氨酸是生物体内多种氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体,可作为k+、mg+离子的载体向心肌输送电解质,从而改善心肌收缩功能,同时降低氧消耗,在冠状动脉循环障碍缺氧时,对心肌有保护作用。并参与鸟氨酸循环,增强肝脏功能,消除疲劳。此外,其是哺乳动物中枢神经系统中主要的兴奋性氨基酸类神经递质,其在脑中特定区域的浓度变化与帕金森病密切相关,表现为含量显著升高。测定血液中天冬氨酸水平可一定程度上反应人体生理情况的变化。

血液中谷氨酸及天冬氨酸浓度对人体健康评价具有重要意义,但二者在在血液样本储存过程中极不稳定,随着样本放置时间的延长,谷氨酸及天冬氨酸浓度逐渐升高,使准确测定谷氨酸及天冬氨酸面临较大挑战。要准确测定谷氨酸及天冬氨酸浓度,必须采取合理的样本处理方法,目前尚未报道有效的谷氨酸及天冬氨酸血液样本处理方法。



技术实现要素:

本申请的发明目的是解决谷氨酸及天冬氨酸浓度在血液样本储存过程中极不稳定的问题,而提供一种精确检测血液中谷氨酸及天冬氨酸的含量的血液处理方法。

为了完成本申请的发明目的,本发明采用的以下技术方案:

本发明的一种精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,它包括以下步骤:

(一)由医护人员利用采血装置从人体静脉中采集至少2ml静脉血液,并将该静脉血液放置在采血管中;

(二)将所述采血管立即置于已平衡至4℃的低温离心机中进行离心,离心速度为4000rpm,离心时间为10min,得到上清液;

(三)使用一次性精密移液器,移取所述上清液1ml于另一试管中,然后在上述试管中加入1ml的灭活溶剂,并在震荡机中震荡20-40s,使所述上清液与灭活溶剂充分接触,得到血液检测样本;

(四)将装有所述血液检测样本的试管立即置于4℃下保存,3天内检测人员对上述血液检测样本中的谷氨酸及天冬氨酸的浓度进行检测。

本发明的一种精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,其中:所述灭活溶剂为含有5%-15%的三氯乙酸溶液。

本发明的一种精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,其中:所述灭活溶剂为含有10%的三氯乙酸溶液。

本发明的一种精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,其中:在步骤(三)中,试管在震荡器上震荡30s。

本发明的一种精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,其中:在步骤(四)中,检测人员检测到的血液检测样本中的谷氨酸及天冬氨酸的浓度分别乘以2,即为人体血液中谷氨酸和天冬氨酸的含量。

本发明有益效果:

本发明精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,可有效并及时的去除血液中某些活性成分,确保血液检测样本中谷氨酸及天冬氨酸维持在人体的真实生理水平上,消除样本放置过程中不稳定带来的测定偏差,提高了检测的准确度,为临床疾病的诊断提供可靠依据。

附图说明

图1为1号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后谷氨酸稳定性曲线;

图2为2号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后谷氨酸稳定性曲线;

图3为3号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后谷氨酸稳定性曲线;

图4为1号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后天冬氨酸稳定性曲线;

图5为2号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后天冬氨酸稳定性曲线;

图6为3号志愿者未灭活血液样本及灭活血液样本4℃放置后天冬氨酸稳定性曲线。

在图1至图6中,图中菱形连接的曲线为未灭活血液样本与放置时间的关系曲线,图中正方形连接的曲线为在4℃下灭活血液样本与放置时间的关系曲线。

下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。

具体实施方式

本发明的精确检测血液中谷氨酸和天冬氨酸含量的血液处理方法,它包括以下步骤:

(一)由医护人员利用采血装置从人体静脉中采集至少2ml静脉血液,并将该静脉血液放置在采血管中;

(二)将所述采血管立即置于已平衡至4℃的低温离心机中进行离心,离心速度为4000rpm,离心时间为10min,得到上清液;

(三)使用一次性精密移液器,移取所述上清液1ml于另一试管中,然后在上述试管中加入1ml的含有5%-15%的三氯乙酸溶液的灭活溶剂例如:10%的三氯乙酸溶液,并在震荡器上震荡30s,使所述上清液与灭活溶剂充分接触,得到血液检测样本;

(四)将装有所述血液检测样本的试管立即置于4℃下保存,3天内检测人员对上述血液检测样本中的谷氨酸及天冬氨酸的浓度进行检测,由于在步骤(三)中加入了1ml的含有5%-15%的三氯乙酸溶液的灭活溶剂,人体血液中的谷氨酸及天冬氨酸的浓度已经被稀释了一半,因此检测人员检测到的血液检测样本中的谷氨酸及天冬氨酸的浓度分别乘以2,即为人体血液中谷氨酸和天冬氨酸的含量。

本实施例中技术方法论证如下:

经过本发明的血液处理方法,是用三氯乙酸溶液的灭活溶剂处理人体血液样本,可以使血液中的谷氨酸及天冬氨酸浓度的稳定。新鲜血清样本来源于北京和合医学检验所,其中三名健康志愿者签署知情同意书,每人采集静脉血两份。两份血液分别制备常规血浆,及灭活血浆样本,考察两种样本中谷氨酸及天冬氨酸的稳定性。

由专门的医护人员对三名志愿者进行静脉抽血,每人平行抽取两份,其中一份静止30后,分离得到血浆,血浆样本于4℃保存。另外一份依照灭活方法,立即进行灭活处理,处理后样本于4℃保存。分别于采样后0.5h、4h、7h、24h、48h、72h对样本中谷氨酸及天冬氨酸浓度进行检测,绘制谷氨酸及天冬氨酸在两种类型样本中的稳定性。

由图1-图3可知,三名志愿者未灭活血液样本在4℃放置后,72h测定谷氨酸浓度与0.5h相比,增高了3倍以上;而且,在放置仅7h时,谷氨酸浓度就升高了25%以上,这提示未灭活样本随着样本放置时间谷氨酸浓度会明显升高。由图1-图3显示灭活后血液样本4℃放置72h内,谷氨酸浓度没有趋势变化,其浓度与0.5h相比,偏差在±15%以内。由此可知,灭活血液样本在4℃条件下,谷氨酸稳定性较好。

由图4-图6可知,三名志愿者未灭活血液样本在4℃放置后,72h测定天冬氨酸浓度与0.5h相比,增高了近7倍;而且,在放置仅2h时,天冬氨酸浓度就升高了50%以上,这提示未灭活样本随着样本放置时间天冬氨酸浓度会明显升高。由图4-图6显示灭活后血液样本4℃放置72h内,天冬氨酸浓度没有趋势变化,其浓度与0.5h相比,偏差在±15%以内。由此可知,灭活血液样本在4℃条件下,天冬氨酸稳定性较好。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

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