本发明属于复方虎杖氨敏片组分含量检测技术领域，尤其涉及一种测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法。
背景技术：
复方虎杖氨敏片为中西药复方的非处方感冒药，用于感冒引起的头痛、发热、流涕、咽喉炎等，收载于国家药品标准(地标升国标)第四册。其处方组成为每片含千里光干膏296.3mg，虎杖干膏1158mg，对乙酰氨基酚100mg，马来酸氯苯那敏0.7mg，原标准仅采用高效液相色谱法对处方中的对乙酰氨基酚进行含量测定，另外3个组分既无含量检测方法，又无限度规定，无法确保药物的安全有效。经查，尚未有对复方虎杖氨敏片中其他组分进行含量测定的研究报道。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种准确、灵敏、快速的测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法，为更好地评价和控制复方虎杖氨敏片质量提供参考。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法，采用50％的甲醇溶液超声提取，以乙腈-0.1％磷酸溶液作为流动相，Kromasil 100-5C18色谱柱分离，紫外检测波长为222nm、326nm。
色谱条件为：色谱柱Kromasil 100-5C18(5μm，250×4.6mm)；流动相A是乙腈，流动相B是0.1％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，进样量20μL，柱温30℃，检测波长222nm、326nm。
梯度洗脱程序为0～8min(A：13％)；8～20min(A：13％→25％，第8分钟用乙腈体积百分数为13％的混合液，第20分钟用乙腈体积百分数为25％的混合液，即12分钟内，洗脱液浓度逐渐增加，下同)；20～30min(A：25％→80％)，30～37min(A：80％)，37～38min(A：80％→13％)。
样品的制备按以下进行操作：取供试品20片，精密称定，研细，精密称取半片的量置于50mL量瓶中，加入50％甲醇溶液约30ml，超声提取10min，取出，放冷，用50％甲醇溶液稀释并定容至刻度，用0.45μm微孔滤膜滤过。
混合对照品溶液的制备按以下进行操作：分别精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷对照品，分别用甲醇配制成1mg/mL储备液，置于4℃保存，临用时用50％甲醇溶液稀释成对照溶液。
针对复方虎杖氨敏片缺乏重要药效成分含量测定的问题，发明人建立了一种测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法，采用50％的甲醇溶液超声提取，以乙腈-0.1％磷酸溶液作为流动相，Kromasil 100-5C18色谱柱分离，紫外检测波长为222nm、326nm。该法采用高效液相色谱法-紫外光谱双波长法，实现同时对对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏两个化学成份及千里光干膏的主要成分绿原酸，虎杖干膏的主要成分虎杖苷进行含量检测，具有前处理快速、四组分与其它组分分离度良好，准确度好的特点。本发明为更好地评价和控制复方虎杖氨敏片质量提供了参考。
附图说明
图1是混合对照溶液色谱图(检测波长222nm)。
图2是混合对照溶液色谱图(检测波长326nm)。
图3是供试品溶液色谱图(检测波长222nm)。
图4是供试品溶液色谱图(检测波长326nm)。
具体实施方式
一、仪器与试药
1.1仪器Waters e2695型液相色谱仪(配PDA检测器)；Milli-Q去离子水发生器(Milli-Q公司)；梅特勒-托利多XS205DU电子天平。
1.2试药对乙酰氨基酚；马来酸氯苯那敏；绿原酸；虎杖苷对照品均购于中国食品药品检定研究院，甲醇、乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，其它试剂为分析纯。6批复方虎杖氨敏片均为A厂家(每片含千里光干膏23毫克、虎杖干膏55毫克、对乙酰氨基酚100毫克、马来酸氯苯那敏0.7毫克)。
二、方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5C18(5μm，250×4.6mm)；流动相：A：乙腈，B：0.1％磷酸溶液，梯度洗脱程序：0～8min(A：13％)；8～20min(A：13％～25％)；20～30min(A：25％～80％)，30～37min(A：80％)，37～38min(A：80％～13％)；流速为1.0mL/min；进样量20μL；柱温30℃；检测波长：222nm(对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏)，326nm(绿原酸、虎杖苷)。取混合对照品溶液进样，记录色谱图(图1和图2)。
结果各组分的理论板数均不低于4000，各主峰与前后相邻的其它峰的分离度均大于1.5，表明该方法专属性好(见图1～4)。
2.2样品制备取供试品20片，精密称定，研细，精密称取约半片的量置于50mL量瓶中，加入50％甲醇溶液约30ml，超声提取10min(超声频率40kHz)。取出，放冷，用50％甲醇溶液稀释并定容至刻度，用0.45μm微孔滤膜滤过，供高效液相色谱仪测定。
2.3混合对照品溶液的制备分别精密称取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷对照品适量，分别用甲醇配制成1mg/mL储备液，置于4℃保存，临用时用50％甲醇溶液稀释成适当浓度的对照溶液。
2.4线性关系及检测限取对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷储备液各适量，配制成一系列浓度的混合对照溶液，分别进样进行测定，以化合物峰面积(Y)和对应的浓度(X)进行线性回归，结果见表1。
表1线性范围、线性方程、相关系数(r)和定量限
2.5精密度试验
取同一份供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，计算乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷峰面积的RSD分别为0.1％、0.6％、0.8％、0.6％，表明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别在0、4、8、12、24小时进样，记录色谱图，计算乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷的峰面积的RSD分别为0.4％、2.0％、0.4％、0.7％，表明各组分在24小时内稳定。
2.7重复性试验
取同一批样品，按2.2项下制备6份供试品溶液，进样，记录色谱图，按外标法计算乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷的平均含量分别为101.6mg/片、1.983mg/片、0.1095mg/片、1.950mg/片，RSD分别为1.8％、1.7％、1.8％、1.9％，表明重复性良好。
2.8回收率实验称取同一批复方虎杖氨敏片粉末6份，每份约四分之一片的量，分别按一定量加入对照品，照“2.2”方法处理后进样测定。结果如表，2，对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷平均回收率(n＝6)在98.5％～104.0％之间，相对标准偏差在0.4％～2.4％之间。
表2加标回收率
2.9样品测定结果应用建立的方法将收集到的6批复方虎杖氨敏片进行测定，结果见表3。
表3含量测定结果(mg/片)
综上，本发明采用高效液相色谱法同时对复方虎杖氨敏片中四种主要成分对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、绿原酸、虎杖苷进行含量测定的方法，具有操作简便、快速、准确度好的优点，适用于该制剂中上述四种主要成分的含量测定。