本发明属于医药
技术领域：
，本发明涉及瑞舒伐他汀钙重要起始物料的分析检测工作，特别是4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶纯度测定的方法。
背景技术：
：4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶(供试品)是合成瑞舒伐他汀钙的起始原料。其分子式为C16H19BrFN3O2S，分子量为416.31，其合成工艺过程中可能会产生以下5各杂质，其结构式如下：本发明的目的为了使4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的出峰时间与溶剂峰及各杂质峰完全分离，改善出峰峰型，进而准确控制4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的含量，目前很难查询到4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶与杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E相关高效液相色谱检测方法。本发明的特点在于克服了合成4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的工艺路线中杂质较多(杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E)，不能很好和溶剂峰及杂质峰分离的困难。本发明找到了一种与杂质分离度高，出峰时间适中，分析时间短的检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶有关物质的方法。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的高效液相色谱检测方法,该方法应专属性好,且灵敏度高,可以解决现有技术中存在的上述问题。本发明涉及的一种4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：,(1)制备系统适应性溶液：取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含供试品0.1mg～1.0mg，含杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E约为1ug/ml～10ug/ml(2)制备供试品溶液：取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶适量，用有机溶剂稀释制成每1ml中含4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶为0.1mg/ml～1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。(3)采用十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱。(4)设置液相色谱仪的流动相，即A相为水，B相为有机相，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表。时间(分钟)A(％)B(％)0406054060153565303565351090451090464060554060(5)设置液相色谱仪的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长200nm～300nm，以及设置液相色谱仪色谱柱温度箱温度为10℃～40℃。(6)取步骤(1)、(2)的样品溶液10ul注入经步骤(3)、(4)、(5)设置的液相色谱仪，完成4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶检测。(7)按照峰面积归一化法计算4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。所述步骤(1)中，系统适用性溶液4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的浓度约为0.1mg/ml～1.0mg/ml，杂质A的浓度为1ug/ml～10ug/ml，杂质B的浓度为1ug/ml～10ug/ml，杂质C的浓度为1ug/ml～10ug/ml，杂质D的浓度为1ug/ml～10ug/ml，杂质E的浓度为1ug/ml～10ug/ml。优选的，步骤(1)中，系统适应性溶液4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的浓度约为0.3mg/ml～0.7mg/ml，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的浓度为3ug/ml～7ug/ml。优选的，步骤(1)中，系统适应性溶液4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的浓度约为0.3mg/ml～0.7mg/ml，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的浓度为3ug/ml～7ug/ml。优选的，步骤(1)中，系统适应性溶液4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的浓度约1.0mg/ml，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的浓度为5ug/ml。所述步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为0.5mg/ml～1.5mg/ml。优选的，步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为0.8mg/ml～1.2mg/ml。优选的，步骤(2)中，供试品溶液的浓度约为1.0mg/ml。所述步骤(1)、(2)中的有机溶剂为乙腈。优选的，步骤(3)中，色谱柱为WelchC18(4.6*250mm，5μm)柱，规格为长度250mm、内径4.6mm、粒径5um。所述步骤(4)中，A相为水，B相为有机相。所述步骤(4)中，B相有机相为甲醇或乙腈。优选的，步骤(5)中，有机相为乙腈。所述步骤(5)中，流速为0.5～1.5ml/min.优选的，所述步骤(5)中，流速为0.8～1.2ml/min。优选的，步骤(5)中，流速为1.0ml/min。所述步骤(5)中，检测波长为200～300nm。优选的，步骤(5)中，检测波长为230～260nm。优选的，步骤(5)中，检测波长为245nm。所述步骤(5)中，柱温为10℃～60℃。优选的，步骤(5)中，柱温为20℃～50℃。优选的，步骤(5)中，柱温为40℃。所述步骤(6)中，进样量为10ul。所述步骤(7)中，按峰面积归一化法计算4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。(1)本发明在流动相上采取梯度洗脱，可以使4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟以内，分离度在2.0以上，理论塔板数高，色谱峰的峰型尖锐，同时具有分离度高，分析时间短等优点。(2)本发明采用乙腈溶解样品，其溶解度大，溶解速度较快，可以有效地避免检测过程中析出固体从而导致色谱柱以及色谱系统的堵塞，使得检测结果准确可靠，其操作简便。本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度在2.0以上，理论塔板数高，有效地避免各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测方法具有检测结果准确可靠、分析时间短、成本低、操作简便等优点，且符合检测方法的方法验证要求。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本思路的前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本思路的前提下，做出的任何形式的修改、替换或变更，均在本发明范围内。以下通过实例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。附图说明下面结合附图对本发明技术方案进一步说明：图1为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图2为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图3为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图4为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图5为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图6为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图7为实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果图；图8本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的线性关系；图9本发明检测方法杂质A的线性关系；图10本发明检测方法杂质B的线性关系；图11本发明检测方法杂质C的线性关系；图12本发明检测方法杂质D的线性关系；图13本发明检测方法杂质E的线性关系。具体实施方式实施例1本发明中具体实施方式中使用的供试品、设备均为已知产品。4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E，可以购买或自制合成获得，所有杂质均经过检测确证其结构。高效液相色谱仪：Agilent1290液相色谱仪DAD检测器；色谱柱：WelchC18(4.6*250mm，5μm)柱高效液相色谱的检测条件：(4)色谱柱：WelchC18(4.6*250mm，5μm)柱；(5)流动相，即A相为水，B相为乙腈，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表：时间(分钟)A(％)B(％)0406054060153565303565351090451090464060554060(6)流速：1.0ml/min，检测波长：245nm，柱温：40℃按照上述检测条件，精密量取系统适应性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1和表1；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积规一划化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B的含量为0.069％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.113％，杂质E的含量为0.086％。表1、实施例1条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果表1色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.5959555.27N/A2杂质B7.3978266.5623.063杂质C14.044125204.111.964杂质D20.37614744210.095供试品21.897190879.142.216杂质E37.193251006.775.51结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均为2.0以上，理论塔板数均大于120000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例2一种瑞舒伐他汀钙起始物料的高效液相色谱检测方法：(1)制备系统适用性溶液：精密称取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶及杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E适量，用乙腈稀释成含4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶0.5mg/ml，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E均为5ug/ml。(2)制备供试品溶液：精密称取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶25mg置50ml量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，制成一种4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的浓度为0.5mg/ml，作为供试品溶液；高效液相色谱的检测条件：(4)色谱柱：WelchC18(4.6*250mm，5μm)柱；(5)流动相，即A相为水，B相为乙腈，设置液相色谱仪的梯度洗脱，方法见下表：时间(分钟)A(％)B(％)0406054060153565303565351090451090464060554060(6)流速：0.9ml/min，检测波长：245nm，柱温：40℃按照上述检测条件，精密量取系统适应性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2和表2；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积规一划化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B的含量为0.063％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.117％，杂质E的含量为0.086％。表2、实施例2条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果。表2色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.5959555.27N/A2杂质B7.3978266.5623.493杂质C14.044125204.111.974杂质D20.37614744210.435供试品21.897190879.142.196杂质E37.19325100.775.46结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均为2.0以上，理论塔板数均大于120000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例3除检测条件中改变流速为1.1ml/min外，其他步骤、条件均与实施例1相同。按照上述检测条件，精密量取系统适用性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图3和表3；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B含量为0.066％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.113％，杂质E的含量为0.085％。表3、实施例3条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果。表3色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.27257827.63N/A2杂质B6.7173970.7922.473杂质C12.898114796.1318.254杂质D18.841147504.6810.085供试品20.225140907.633.356杂质E36.402384045.415.22结果标明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均为2.0以上，理论塔板数均大于120000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例4除检测条件改变柱温为38℃外，其他步骤、条件均与实施例1相同。按照上述检测条件，精密量取系统适用性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图4和表4；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B含量为0.068％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.116％，杂质E的含量为0.084％。表4、实施例4条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果表4色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.60312734.67N/A2杂质B7.48618456.1423.463杂质C14.25931617.4311.824杂质D20.73338133.6710.225供试品22.30136988.392.146杂质E37.351914459.265.51结果标明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均为2.0以上，理论塔板数均大于12000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例5除检测条件改变柱温为42℃外，其他步骤、条件均与实施例1相同。按照上述检测条件，精密量取系统适用性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图5和表5；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B含量为0.081，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.121％，杂质E的含量为0.087％。表5、实施例5条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.57513553.44N/A2杂质B7.273191156.4822.663杂质C13.7931617.4618.364杂质D19.97439110.669.855供试品21.44437198.563.326杂质E36.998921974.384.85结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均为2.0以上，理论塔板数均大于12000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例6除检测条件中改变波长为243nm外，其他步骤、条件均与实施例1相同。按照上述检测条件，精密量取系统适用性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图6和表6；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B含量为0.084％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.127％，杂质E的含量为0.093％。表6、实施例6条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果。表6色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.58713274.52N/A2杂质B7.36819198.1123.003杂质C14.00331973.2618.424杂质D20.32439130.3910.055供试品21.84037451.113.376杂质E37.170928984.484.77结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均在2.0以上，理论塔板数均大于12000，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。实施例7除检测条件中改变波长为247nm外，其他步骤、条件均与实施例1相同。按照上述检测条件，精密量取系统适用性溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，见图7和表7；精密量取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算供试品中杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的含量。杂质A的含量为未检出，杂质B含量为0.067％，杂质C的含量为未检出，杂质D的含量为0.111％，杂质E的含量为0.079％。表7、实施例7条件下4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离效果表7色谱峰名称保留时间(min)理论塔板数分离度1杂质A3.58713563.42N/A2杂质B7.3719496.7323.003杂质C14.00632887.2711.594杂质D20.32339220.479.995供试品21.83937408.212.166杂质E37.169932884.665.26结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度均在2.0以上，理论塔板数均大于2.0，远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效地避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的保留时间均在40分钟之内，具有分析时间短、成本低等优点。综上所述，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的分离度在2.0以上，理论塔板数均大于2.0,远高于现有技术的分离度和理论塔板数，有效的避免了各组分之间的干扰影响检测结果的准确性；同时，本发明检测方法具有检测结果准确可靠、分析时间短、成本低、操作简便等优点。上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例：试验例11、定量限和检测限试验精密称取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E各适量制成1mg/ml的溶液，逐级稀释至S/N≈10，作为定量限溶液。稀释至S/N≈3，作为检测限溶液。精密量取定量限溶液、检测限溶液各10ul，按照实施例1的检测条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。定量限：4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶为0.1004，杂质A为0.09920，杂质B为0.10568，杂质C为0.10088，杂质D为0.09840，杂质E为0.09888检测限：4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的检测限为0.03001ug/ml，杂质A的检测限为0.02976ug/ml，杂质B的检测限为0.03170ug/ml，杂质C的检测限为0.03026ug/ml，杂质D的检测限为0.02952ug/ml，杂质E为检测限为0.02966ug/ml。试验结果标明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的定量限和检测限低。取定量限溶液，按照实施例1的检测条件，分别连续进样6次，记录色谱图，结果见表8.定量限精密度试验结果表8试验结果表明，本发明检测方法4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的定量限的精密度好。2、线性关系(1)分别取杂质贮备液(与实施例1相同)适量，加乙腈制成含4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶浓度为0.1011ug/ml～10.1120ug/ml、杂质A浓度为0.1033ug/ml～10.3280ug/ml、杂质B浓度为0.1009ug/ml～10.0920ug/ml、杂质C浓度为0.1029ug/ml～10.2880ug/ml、杂质D浓度为0.1038ug/ml～10.3840ug/ml、杂质E浓度为0.1018ug/ml～10.1840ug/ml的线性溶液；(2)按照实施例1的检测条件对上述线性溶液进行检测，记录色谱图，以4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的浓度相对应的峰面积进行线性回归，4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶的线性方程为y＝30.9492x-2.9761，相关系数r＝0.999，如图8所示；杂质A的线性方程为y＝20.9507x+0.6293，r＝0.999；杂质B的线性方程为y＝23.5137x+1.2105r＝0.999；杂质C的线性方程为y＝32.1995x+1.0038，r＝1；杂质D的线性方程为y＝35.2787x+2.3673，r＝0.999；杂质E的线性方程为y＝34.1827x+0.4845，r＝0.999；试验结果表明，本发明检测方法的条件下，4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶和杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E的浓度与峰面积线性回归关系良好。3.稳定性试验供试品溶液取浓度为取4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液。分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h进样，记录色谱图，以各杂质量的变化情况衡量供试品溶液稳定性情况。结果见表8表9、供试品的稳定性试验结果试验结果标明，本发明检测方法在检测过程中供试品溶液的稳定性良好。4.精密度试验重复性制备供试品溶液：精密称取6份4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶，每份12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，平行配制6份，作为供试品溶液。检测：精密量取上述溶液各10ul，按照实施1的检测条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一法计算供试品中各杂质的峰面积，结果见表9表10、重复性试验结果试验结果表明，本发明检测方法重复性好，符合检测方法的验证要求。5.准确度试验回收率在4-(4-氟苯基)-5-溴甲基-6-异丙基-2-[(N-甲基-N-甲磺酰胺基)]-嘧啶中分别加入限度量的80％、100％、120％的杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E，通过外标法计算所得的杂质量，用测得量与理论量的比值作为回收值。实验结果见表10～表14表11、杂质A回收率试验结果表12、杂质B回收率结果表13、杂质C回收率结果表14、杂质D回收率结果表15、杂质E回收率结果本发明检测方法的定量限低、检测限低、线性关系良好、稳定性好、精密度良好，重复性好检测结果准确可靠；同时，具有易操作、省时节能等优点。当前第1页1 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