本发明涉及分析和检测
技术领域：
，具体涉及一种同时测定化妆品中19种防晒剂的方法。
背景技术：
工业污染造成大气臭氧层被严重破坏，使得阳光中射入地面的紫外线量不断增加，过量的紫外线辐射会对人体皮肤造成严重损伤。中波紫外线uvb(280～320nm)使皮肤在短时间内晒伤、晒红；长波紫外线uva(320～400nm)穿透能力较强，可以深入真皮以下组织，破坏胶原蛋白，加速黑色素形成，严重时会引起皮肤癌。防晒剂可以保护皮肤免受紫外线的伤害，常被添加进化妆品中制成防晒化妆品，防晒剂可以分为物理防晒剂和化学防晒剂。物理防晒剂是靠反射或散射作用阻挡紫外线从而达到防晒目的，主要有二氧化钛和氧化锌；化学防晒剂又称紫外线吸收剂，其作用机理是借助其他成膜性物质在肌肤表面形成一道紫外线吞噬屏障将其吸收，这个过程发生在皮肤内部，并由人体代谢而清除。这类化学防晒剂对皮肤有一定的刺激性，容易引起各种皮肤不适症状，例如使皮肤产生红斑、使皮肤角质老化及各种灼烧疼痛感。2016年12月31日起新执行的《化妆品安全技术规范》(2015年版)明确规定了化妆品中准用防晒剂的使用种类与限度。根据《规范》规定，可在限量范围内使用的化学防晒剂有25种，但只有19种防晒剂列出了检测方法，且分别为5组不同的hplc方法，包括限用组分苯基苯并咪唑磺酸等15种组分的测定，二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮、亚苄基樟脑磺酸3种组分分别测定，及禁用组分二苯酮-2的检测方法，检测费时费力，可操作性欠佳。经试验研究，《规范》中苯基苯并咪唑磺酸等15种成分的测定方法在实际检验工作中存在一定的限制，不仅对反相液相色谱仪许多聚醚醚酮(peek)部件材料具有腐蚀性，大批量运行时保留时间的重复性也会下降，同时对实验人员有伤害而且对环境也有污染。技术实现要素：本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种方法简便、环保、准确度高、重现性和耐用性良好、且能同时测定化妆品中19种防晒剂的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种同时测定化妆品中19种防晒剂的方法，所述的19种防晒剂为：对甲氧基肉桂酸异戊酯、乙基己基三嗪酮、双-乙基己基苯酚甲氧苯基三嗪、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮、二苯酮-3、二苯酮-5、二苯酮-2、paba乙基己酯、亚苄基樟脑磺酸、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯、对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸、4-甲基苄亚基樟脑、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、奥克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯、胡莫柳酯和亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚；所述的方法包含：单标母液配制：精密称取苯基苯并咪唑磺酸用1mol/l氢氧化钠溶液完全溶解后用四氢呋喃定容；精密称取二苯酮-5用甲醇完全溶解后用四氢呋喃定容；分别精密称取其余17种防晒剂标准物质，用含20％甲醇的四氢呋喃溶解并定容；混合标准溶液配制：精密移取各单标母液于容量瓶，用甲醇稀释并定容，配制成混合标准溶液；系列混合标准溶液配制：用甲醇逐级稀释配制系列混合标准溶液；供试品溶液的配制：精密称取化妆品样品0.25g，置于25ml容量瓶中，加入甲醇和四氢呋喃混合液20ml，超声处理30min，取出静置至室温，摇匀，定容，过滤；取滤液1.0ml，用甲醇稀释至10.0ml，混匀，0.45μm滤膜过滤作为供试品溶液；供试品测定：分别将系列混合标准溶液及供试品溶液进行液相色谱测定。系列混合标准溶液及供试品溶液的响应值均应在仪器检测线型范围内，根据峰保留时间定性，根据峰面积定量。进一步的，单标母液的配置浓度为1mg/ml。进一步的，供试品测定的色谱条件为：色谱柱：c18柱；柱温：35℃；流动相：a为异丙醇:含0.1％甲酸的甲醇溶液＝1:4v/v，b为0.05％甲酸水溶液；流速：1.2ml/min；进样量：10μl；检测波长：300nm/350nm；梯度洗脱程序：0～5min，流动相a75％，流动相b25％；5～6min，流动相a75～85％，流动相b15～25％；6～10min，流动相a85％，流动相b15％；10～15min，流动相a85～90％，流动相b10～15％；15～17min，流动相a90％，流动相b10％；17～35min，流动相a100％，流动相b0％。优选的，色谱柱为phenomenexlunac18，4.6mm×250mm，5μm。进一步的，化妆品包括膏霜类、油状类和粉饼类。进一步的，供试品溶液配制时，甲醇和四氢呋喃混合液为甲醇:四氢呋喃＝1:4v/v。进一步的，精密称取为精确到0.0001g。进一步的，甲醇、异丙醇、四氢呋喃、甲酸和氢氧化钠均为色谱纯，其中甲酸、二甲基亚砜纯度≥99％。进一步的，甲酸纯度≥99％。19种防晒剂中，除苯基苯并咪唑磺酸和二苯酮-5外，均可溶于四氢呋喃，因此用四氢呋喃直接配制其余17种防晒剂单标母液。而苯基苯并咪唑磺酸在甲醇和水中的溶解度均较差，可采用少量氢氧化钠溶液使其完全溶解，再用四氢呋喃定容。二苯酮-5溶解时先加入少量甲醇，使其完全溶解后，再使用四氢呋喃定容。甲醇与四氢呋喃体积比为8:2时，防晒剂回收率均高于97％。因此本研究中采用甲醇与四氢呋喃体积比为8:2作为样品提取溶剂。本发明通过的方法中，采用0.05％甲酸作为酸性改性剂，强洗脱剂用20％异丙醇的甲醇溶液(含0.1％甲酸)，梯度洗脱分离19种防晒剂，19种组分能良好分离。19种防晒剂中二苯酮-2、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷在350nm处有最大紫外吸收峰，其于16种类防晒剂在300nm处有最大紫外吸收峰。因此采用300nm和350nm两个通道进行19种防晒剂的色谱图测定。与现有技术相比，本发明提供的同时测定化妆品中19种防晒剂的方法的优点：(1)样品处理方法简单、有效。(2)使用甲醇/异丙醇/水梯度洗脱系统，双波长检测，实现了在c18色谱柱上同时分离检测19种防晒剂。(3)不仅避免了使用四氢呋喃和高氯酸等高腐蚀性的溶剂作流动相，而且将5组方法优化为一组hplc测定方法，方法简便环保、准确度高。(4)重现性和耐用性良好，可用于化妆品中19种防晒剂同时测定。附图说明图1是phenomenonlunac18300nm吸收防晒剂色谱图。图2是phenomenonlunac18350nm吸收防晒剂色谱图。图中，对应峰号为：1.对氨基苯甲酸，2.苯基苯并咪唑磺酸，3.二苯酮-5，4.亚苄基樟脑磺酸，5.二苯酮-3，6.paba乙基己酯，7.对甲氧基二苯甲酰基甲烷，8.4-甲基苄亚基樟脑，9.奥克立林，10.甲氧基肉桂酸乙基己酯，11.胡莫柳酯异构体，12.水杨酸乙基己酯，13.胡莫柳酯，14.二乙基己氧丁酰氨基三嗪酮，15.乙基己基三嗪酮，16.亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚，17.双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪，18二苯酮-2，19.二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯，20.丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷。具体实施方式为使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，以下实施例对本发明的作进一步详细描述，以下实施例仅用于说明发明，但不用来限制本发明的范围。一种同时测定化妆品中19种防晒剂的方法，所述的19种防晒剂为：对甲氧基肉桂酸异戊酯、乙基己基三嗪酮、双-乙基己基苯酚甲氧苯基三嗪、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮、二苯酮-3、二苯酮-5、二苯酮-2、paba乙基己酯、亚苄基樟脑磺酸、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯、对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸、4-甲基苄亚基樟脑、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、奥克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯、胡莫柳酯和亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚；所述的方法包含：单标母液配制：精密称取苯基苯并咪唑磺酸用1mol/l氢氧化钠溶液完全溶解后用四氢呋喃定容；精密称取二苯酮-5用甲醇完全溶解后用四氢呋喃定容；分别精密称取其余17种防晒剂标准物质，用含20％甲醇的四氢呋喃溶解并定容；单标母液的配置浓度为1mg/ml。混合标准溶液配制：精密移取各单标母液于容量瓶，用甲醇稀释并定容，配制成混合标准溶液；系列混合标准溶液配制：用甲醇逐级稀释配制系列混合标准溶液；供试品溶液的配制：精密称取化妆品样品0.25g(精确到0.0001g)，置于25ml容量瓶中，加入甲醇:四氢呋喃＝1:4v/v混合液20ml，超声处理30min，取出静置至室温，摇匀，定容，过滤；取滤液1.0ml，用甲醇稀释至10.0ml，混匀，0.45μm滤膜过滤作为供试品溶液；供试品测定：分别将系列混合标准溶液及供试品溶液进行液相色谱测定。色谱柱为phenomenexlunac18，4.6mm×250mm，5μm。供试品测定的色谱条件为：色谱柱：c18柱；柱温：35℃；流动相：a为异丙醇:含0.1％甲酸的甲醇溶液＝1:4v/v，b为0.05％甲酸水溶液；流速：1.2ml/min；进样量：10μl；检测波长：300nm/350nm；梯度洗脱程序：0～5min，流动相a75％，流动相b25％；5～6min，流动相a75～85％，流动相b15～25％；6～10min，流动相a85％，流动相b15％；10～15min，流动相a85～90％，流动相b10～15％；15～17min，流动相a90％，流动相b10％；17～35min，流动相a100％，流动相b0％。系列混合标准溶液及供试品溶液的响应值均应在仪器检测线型范围内，根据峰保留时间定性，根据峰面积定量。甲醇、异丙醇、四氢呋喃、甲酸和氢氧化钠均为色谱纯，其中甲酸、二甲基亚砜纯度≥99％，甲酸纯度≥99％。19种防晒剂中，除苯基苯并咪唑磺酸和二苯酮-5外，均可溶于四氢呋喃，因此用四氢呋喃直接配制其余17种防晒剂单标母液。而苯基苯并咪唑磺酸在甲醇和水中的溶解度均较差，可采用少量氢氧化钠溶液使其完全溶解，再用四氢呋喃定容。二苯酮-5溶解时先加入少量甲醇，使其完全溶解后，再使用四氢呋喃定容。甲醇与四氢呋喃体积比为8:2时，防晒剂回收率均高于97％。因此本研究中采用甲醇与四氢呋喃体积比为8:2作为样品提取溶剂。本发明通过的方法中，采用0.05％甲酸作为酸性改性剂，强洗脱剂用20％异丙醇的甲醇溶液(含0.1％甲酸)，梯度洗脱分离19种防晒剂，19种组分能良好分离。19种防晒剂中二苯酮-2、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷在350nm处有最大紫外吸收峰，其于16种类防晒剂在300nm处有最大紫外吸收峰。因此采用300nm和350nm两个通道进行19种防晒剂的色谱图测定。实施例1一种同时测定化妆品中对甲氧基肉桂酸异戊酯、乙基己基三嗪酮、双-乙基己基苯酚甲氧苯基三嗪、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮、二苯酮-3、二苯酮-5、二苯酮-2、paba乙基己酯、亚苄基樟脑磺酸、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯、对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸、4-甲基苄亚基樟脑、丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷、奥克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯、胡莫柳酯和亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚等19种防晒剂的方法：所用甲醇、异丙醇、四氢呋喃、甲酸和氢氧化钠均为色谱纯，其中甲酸、二甲基亚砜纯度≥99％，甲酸纯度≥99％。单标母液配制：精密称取苯基苯并咪唑磺酸用1mol/l氢氧化钠溶液完全溶解后用四氢呋喃定容；精密称取二苯酮-5用甲醇完全溶解后用四氢呋喃定容；分别精密称取其余17种防晒剂标准物质，用含20％甲醇的四氢呋喃溶解并定容；单标母液的配置浓度为1mg/ml。混合标准溶液配制：精密移取各单标母液于容量瓶，用甲醇稀释并定容，配制成混合标准溶液。各标准物质称样量、定容体积及混合储备液浓度如表1所示。表1混合标准储备液浓度系列混合标准溶液配制：用甲醇逐级稀释配制系列混合标准溶液；供试品溶液的配制：精密称取化妆品样品(市售膏霜、油状和粉饼类各2种)0.25g，精确到0.0001g，置于25ml容量瓶中，加入甲醇:四氢呋喃＝1:4v/v混合液20ml，超声处理30min，取出静置至室温，摇匀，定容，过滤；取滤液1.0ml，用甲醇稀释至10.0ml，混匀，0.45μm滤膜过滤作为供试品溶液；供试品测定：分别将系列混合标准溶液及供试品溶液进行液相色谱测定。色谱柱为phenomenexlunac18，4.6mm×250mm，5μm。供试品测定的色谱条件为：色谱柱：c18柱；柱温：35℃；流动相：a为异丙醇:含0.1％甲酸的甲醇溶液＝1:4v/v，b为0.05％甲酸水溶液；流速：1.2ml/min；进样量：10μl；检测波长：300nm/350nm；梯度洗脱程序：0～5min，流动相a75％，流动相b25％；5～6min，流动相a75～85％，流动相b15～25％；6～10min，流动相a85％，流动相b15％；10～15min，流动相a85～90％，流动相b10～15％；15～17min，流动相a90％，流动相b10％；17～35min，流动相a100％，流动相b0％。梯度洗脱程序见表2。表2梯度洗脱程序时间(min)a(％)b(％)0～575255～675～8525～156～10851510～1585～9015～1015～17901017～351000系列混合标准溶液及供试品溶液的响应值均应在仪器检测线型范围内，根据峰保留时间定性，根据峰面积定量。实施例2线性范围及检出限(lod)、定量限(loq)：取系列标准溶液进行测定分析，以防晒剂浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归分析。以不含防晒剂的洗面奶产品制成19种防晒剂混合标准加基质溶液进行逐级稀释，测定本方法的检出限和定量限，以s/n＝3和s/n＝10时的进样量作为lod和loq。结果见表3。表319种防晒剂的线性结果及lod、loq测定结果显示，所有防晒剂在进样范围内，进样浓度与色谱峰面积均呈较好线性关系，相关系数均大于0.99。实施例3回收率与精密度测定：选择不含防晒剂的水、乳液、膏霜、洁面等四种不同基质化妆品各一种，每种取9份，分别加入低(60％)、中(100％)、高(140％)三个浓度的对照品，每份浓度梯度样品做3个平行样，依本研究建立的方法进行样品处理和测定，计算回收率及rsd，结果见表4。表4混合标准储备液浓度(n＝9)不同基质中各组分的加样回收率范围在96.3％～104.3％，rsd范围为0.82～2.45％，表明方法准确性良好，所选择的提取方法能适应水、乳液、膏霜和洁面四种基质化妆品。实施例4本发明提供的检测方法与《化妆品安全技术规范》(2015年版)规定的方法检测防晒剂的比较：初筛选取含防晒剂种类较多的一个样品，按照《规范》2015年版收载的苯基苯并咪唑磺酸等15种的测定方法进行含量测定，并与本发明提供的方法测定数据进行比较，所得2组数据均以均值±标准差(±s)表示，采用paswstatistics22.0版本统计软件对各组数据进行统计学处理：小样本采用shapiro-wilk检验，显示各组数据均呈正态分布。各组计量资料组间比较采用单因素方差分析，levene方差齐性检验。经分析，两组数据之间含量测定结果存在显著性差异组分有5个，分别为二苯酮-3、4-甲基苄亚基樟脑、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯与胡莫柳酯，均表现为新建立的方法测定结果高于原方法结果。结果见表5。表55种组分的2个方法测定结果比较(n＝2)本方法含量(％)标准方法含量(％)显著性二苯酮-31.04±0.060.90±0.0030.0034-甲基苄亚基樟脑0.27±0.020.25±0.0030.048甲氧基肉桂酸乙基己酯6.01±0.545.31±0.090.045水杨酸乙基己酯7.99±0.407.03±0.160.004胡莫柳酯11.10±0.047.43±0.090.000实施例5化妆品样品检测分析：用本发明提供的检测方法对70批次样品(市售)进行防晒剂的检验检测，计算防晒剂含量，并将测定的组分结果与产品标签和批件进行比对。结果现实70批次样品中防晒剂的使用种类和使用浓度均符合当前《规范》的要求，但有9批次样品中实际检出防晒剂组分与标签/批件信息不一致的情况。其中4批次样品中检出了标签标示以外的防晒剂(采用lc-ms方法进行了进一步验证)，提示有企业不按批件配方生产或者假冒产品的可能；另5批次为未检出部分标签标示的防晒剂，提示有产品稳定性不符合要求、不按批件配方生产或者假冒产品的可能。以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种变换，这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征和步骤，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。当前第1页12