本发明涉及的是一种快速测定盐酸沙拉沙星原料及其制剂中盐酸沙拉沙星含量的方法，特别是指用紫外分光光度法来定量测定盐酸沙拉沙星含量的方法，本发明设计分析化学领域。技术背景：盐酸沙拉沙星是一种新型的动物专用药物，本品为广谱抗菌药，对大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、变形杆菌、嗜血杆菌、溶血性巴氏杆菌、葡萄球菌(包括耐青霉素菌珠)，链球菌、支原体等均有较强的抑杀作用，同时还具有较多的抗菌后效应。药动学：本品内服和注射吸收迅速。体内分布广泛，表观分布容积大，内服生物利用度较高，消除半衰期适应症：抗菌药。对革兰氏阳性菌、阴性菌及支原体具有极强的杀灭作用。盐酸沙拉沙星原料在《兽药质量标准》2017版中采用的是高氯酸滴定法，该方法的局限性比较大，受温度的影响大，高氯酸的浓度也受外界的干扰大，导致盐酸沙拉沙星的含量的不确定度增加。本发明中提到的盐酸沙拉沙星制剂是指盐酸沙拉沙星可溶性粉、盐酸沙拉沙星溶液，目前其制剂使用的HPLC的一种专业性较强的测试方法，但是该测试方法时间较长，操作繁琐、分析成本高等缺点，不能很好的满足生产企业对产品中间控制的快速检测的需求。本发明采用的是在碱性条件下用紫外分光光度法测定盐酸沙拉沙星的含量，采用一定浓度的氢氧化钠试剂，它的吸光度值与其含量成正比。此方法具有快速检测、简单、高效和经济的优势。技术实现要素：本方法的目的在于克服现有方法中的不足和缺点，提供一种紫外分光光度法检测盐酸沙拉沙星原料及其制剂中盐酸沙拉沙星含量的方法。本发明的目的可以通过以下技术方案实现：一种快速测定盐酸沙拉沙星含量的方法，包括以下步骤：(1)确定检测波长：精密称取盐酸沙拉沙星对照品，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并按比例稀释后分别制成浓度为2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml和10μg/ml的盐酸沙拉沙星溶液，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白对照，采用紫外分光光度计在240～700nm波长范围内进行扫描，确定其吸收度最大且吸收度和溶液中盐酸沙拉沙星浓度呈正相关的吸收波长即为检测波长；(2)绘制标准曲线：以盐酸沙拉沙星对照品的质量浓度(C,μg/ml)为横坐标，以确定的检测波长下的吸收度(A)为纵坐标，进行线性回归分析，绘制标准曲线，建立标准曲线方程；(3)测定样品浓度：精密称取盐酸沙拉沙星原料或制剂，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并按比例稀释后制成待测溶液，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白溶液，在确定的检测波长处测定其吸收度，根据步骤(2)建立的标准曲线方程计算待测样品中盐酸沙拉沙星的含量。步骤(1)中所述盐酸沙拉沙星溶液的制备过程为：精密称取盐酸沙拉沙星对照品，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解，并稀释成浓度为50μg/ml的盐酸沙拉沙星对照贮备液，分别精密量取该对照贮备液的1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于25ml的容量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液定容，摇匀分别制成浓度为2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml和10μg/ml的盐酸沙拉沙星溶液。步骤(1)中采用紫外分光光度计在261±1nm、274±1nm、278±1nm、323±1nm和333±1nm波长下进行扫描。步骤(1)中确定的检测波长为274±1nm。步骤(3)中所述待测溶液的浓度范围为3～10μg/ml。与现有检测技术相比本发明的有益效果：本发明的方法相比HPLC法具有检测时间短，操作简单、分析成本低等优点，极大的满足生产企业对产品中间控制的快速检测的需求。附图说明图1为盐酸沙拉沙星紫外吸收光谱。图2为盐酸沙拉沙星标准曲线。具体实施方法实施例1本发明采用紫外分光光度法来定量测定制剂中盐酸沙拉沙星含量，包括以下步骤：(一)检测波长的确定常温常压下，精密称取盐酸沙拉沙星对照品5mg，精确至0.0001g，加入至100ml的容量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解，并稀释成每毫升含有50μg/ml的对照贮备液，分别精密量取该贮备液的1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于25ml的容量瓶中，制成样1、样2、样3、样4、样5，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液定容，摇匀，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白对照，采用紫外分光光度计在240～700nm波长范围内进行扫描，确定其最大吸收波长即为检测波长。根据图1中的盐酸沙拉沙星紫外吸收光谱选择具体的检测波长261nm、274nm、278nm、323nm和333nm。表1检测波长的确定结果从上述表1测定结果显示，只有4#波长(274±1nm)的吸收度和浓度呈正相关，由此确定的检测波长为274±1nm。(二)绘制标准曲线以质量浓度(C,μg/ml)为横坐标，以吸收度(A)为纵坐标，进行线性回归分析，绘制标准曲线(详见图2)，建立标准曲线方程。(三)测定样品浓度精密称取盐酸沙拉沙星可溶性粉(批号2018041501)，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并按比例稀释后制成浓度约为5μg/ml的待测溶液，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白溶液，在确定的检测波长(274±1nm)处测定其吸收度，根据步骤(2)建立的标准曲线方程计算待测样品中盐酸沙拉沙星的含量。实施例2本发明方法的稳定性、重复性、回收率等的验证(一)稳定性实验精密称取盐酸沙拉沙星可溶性粉(批号2018030101)50mg，精确至0.001g，加入至100ml容量瓶中，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并稀释成含盐酸沙拉沙星约5μg/ml的溶液，摇匀。分别在0、10、20、30、40、60min时，在274±1nm波长处测定其吸收度，稳定性实验结果详见表2。表2稳定性实验结果(二)重复性实验精密称取50mg盐酸沙拉沙星可溶性粉(批号2018041501)各5份，加入100毫升的容量瓶中，其次分别加0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解并稀释成含盐酸沙拉沙星约6μg/ml的溶液，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白溶液，在274±1nm吸收波长处测定其吸收度，另取盐酸沙拉沙星对照品，同法测定，根据两者的比值计算盐酸沙拉沙星的含量，重复性实验结果详见表3。表3重复性实验结果(三)回收率实验取已知质量浓度(2μg/ml)的盐酸沙拉沙星溶液(按沙拉沙星计算5％)(中牧南京动物药业有限公司批号：18030101)，分为5份，分别精密加入盐酸沙拉沙星对照品溶液(1.0μg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，制成待测溶液，在274±1nm波长处测定其吸收度，根据标准曲线方程计算实测值，加样回收率(％)＝(加样后测定值-已知的供试品液含量)/对照品含量×100％，计算回收率、平均回收率以及RSD值(相对标准偏差RSD，又称变异系数。RSD＝(S/(X平))*100％)。加样回收率结果详见表4：表4加样回收率实验结果通过RSD的计算，表明本方法检测数据的稳定性良好。(四)样品的测定取盐酸沙拉沙星可溶性粉50mg，精密称定，加入至100ml的容量瓶中，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液溶解，制成50μg/ml的溶液，精密吸取1ml，置于10ml的容量瓶中，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度，制成含盐酸沙拉沙星5μg/ml的溶液，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液为空白溶液，在274±1nm吸收波长处测定其吸收度。另取盐酸沙拉沙星对照品，同法测定，根据两者吸光度的比值计算盐酸沙拉沙星的含量，样品测定结果见表5。表5含量测定结果百分率比较样品批号HPLC法UV法20180115105.3％105.8％20180307103.8％103.2％20180316105.1％105.3％20180508106.0％105.2％20180509105.1％105.5％通过上面高效液相法与紫外检测的检测结果的对比，本检测方法与的结果与误差都在标准误差允许范围类，完全可以作为快速检测方法在企业内部使用，可节约成本，并快速判定结果，适合大生产中的质量控制。当前第1页1 2 3