一种分离与测定1-氟萘及相关杂质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离与测定1-氟萘及相关杂质的方法。
背景技术：
盐酸度洛西汀（duloxetinehydrochloride）化学名称为(s)-(+)-n-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩基)丙胺盐酸盐，是一种对5-羟色胺和去甲肾上腺素的再吸收有双重抑制作用的抗抑郁药，具有化学稳定性好、安全有效、副作用少、对其他神经系统亲和力低等特点，成为现代临床研究中优先选用的抗抑郁药物。盐酸达泊西汀（dapoxetinehydrochloride）化学名称为(s)-(+)-n,n-二甲基-1-苯基-3-(1-萘氧基)-丙胺盐酸盐，是一种选择性5-羟色胺再吸收抑制剂，具有药效快、半衰期短、副作用低等特点，成为首个被批准用于治疗男性早泄（pe）的即需型的口服药。1-氟萘是一种无色至淡黄色透明的液体，常作为医药中间体，是抗抑郁药盐酸度洛西汀、治疗男性早泄（pe）药盐酸达泊西汀合成用到的关键起始物料。在1-氟萘的合成过程中，会产生杂质萘、2-氟萘和1-氯萘。1-氟萘和相关杂质的结构式如下：1-氟萘在合成过程中产生的上述杂质如果除去不完全，会影响以1-氟萘为原料合成的药物纯度和质量。因此，实现1-氟萘及相关杂质的分离和测定对1-氟萘质量控制显得非常重要。目前1-氟萘的国家标准尚未建立，也没有分离1-氟萘及相关杂质的方法和测定1-氟萘及相关杂质含量的方法。由于1-氟萘、萘、2-氟萘沸点相近（1-氟萘215℃、萘218℃、2-氟萘226℃），通过常规的气相色谱法不能有效分离杂质，更不能准确测定1-氟萘及相关杂质含量。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种分离1-氟萘及相关杂质的方法，该方法能够实现1-氟萘及相关杂质的有效分离；本发明的目的之二在于提供一种高效液相色谱法分离测定1-氟萘及相关杂质的方法，利用高效液相色谱法，不仅能够实现1-氟萘及相关杂质的有效分离，而且能够准确测定1-氟萘及相关杂质的含量。为实现上述目的，本发明的技术方案为：一种分离1-氟萘及相关杂质的方法，所述的方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和碱性缓冲盐溶液为流动相进行分离。本发明所述的方法适用于上述的1-氟萘及相关杂质的分离，可用于单独分离某一种物质，也可同时分离1-氟萘及相关杂质，与现有技术相比，本发明的方法更全面，更快捷，提高了准确度，提高了效率，具有显著的进步性。本发明所述的一种分离1-氟萘及相关杂质的方法，优选的，所述相关杂质为萘、2-氟萘和1-氯萘中的一种或多种。一种测定1-氟萘及相关杂质的方法，具体步骤如下：取供试品加稀释剂制成供试品溶液，再取供试品溶液加稀释剂按一定倍数稀释得自身对照溶液，分别取供试品溶液及自身对照溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按加校正因子的自身对照法计算供试品中1-氟萘及相关杂质的含量；所述高效液相色谱分析采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和碱性缓冲盐溶液为流动相进行分析。本发明所述的方法适用于上述的1-氟萘及相关杂质的分离，可用于单独检测某一种物质，也可同时分离和检测1-氟萘及相关杂质，与现有技术相比，本发明的方法更全面，更快捷，提高了准确度，提高了效率，具有显著的进步性。上述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法，还包括如下步骤：分别取1-氟萘及各相关杂质对照品，用稀释剂溶剂制成1-氟萘定位溶液及相关杂质定位溶液，分别取1-氟萘定位溶液及各相关杂质定位溶液进样，进行高效液相色谱分析，确定1-氟萘及各相关杂质的保留时间。进一步，所述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述稀释剂为乙腈或乙腈水溶液。优选的，所述稀释剂为70%乙腈水溶液。进一步，所述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述流动相流速为0.5-1.5ml/min。优选的，所述流动相流速为0.8ml/min。进一步，所述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述流动相为乙腈和碱性缓冲盐溶液。优选的，所述流动相采用梯度洗脱分离，梯度洗脱条件为：0min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：35-45:55-65；20min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：60-70:30-40；21min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：75-85:15-25；26min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：75-85:15-25；27min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：35-45:55-65；45min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：35-45:55-65。更优选的，梯度洗脱条件为：0min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：40:60；20min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：65:35；21min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：80:20；26min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：80:20；27min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：40:60；45min：乙腈与碱性缓冲盐溶液的体积比为：40:60。进一步，所述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述高效液相色谱分析检测波长为230nm±5nm。优选的，所述分析检测波长为230nm。进一步，所述的一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述柱温范围为30-40℃。优选的，所述柱温范围为35℃。一种测定1-氟萘及相关杂质的方法中，所述相关杂质为萘、2-氟萘和1-氯萘，具体包括如下步骤：（1）分别取1-氟萘及各相关杂质对照品，用稀释剂溶剂制成1-氟萘定位溶液及相关杂质定位溶液，分别取1-氟萘定位溶液及各相关杂质定位溶液进样，进行高效液相色谱分析，确定1-氟萘及各相关杂质的保留时间；所述高效液相色谱分析采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和碱性缓冲盐溶液为流动相进行分析；所述稀释剂为70%乙腈水溶液。（2）取供试品加稀释剂制成供试品溶液，再取供试品溶液加稀释剂按一定倍数稀释得自身对照溶液，分别取供试品溶液及自身对照溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，按加校正因子的自身对照法计算供试品中1-氟萘及相关杂质的含量，具体地，计算式如下：单个杂质含量（%）=总杂质=σ单个杂质含量；式中：at—供试品溶液中各杂质的峰面积；式中：ar—自身对照溶液中主成分的峰面积；式中：f—已知杂质的校正因子。在本发明一个具体实施例中，精密称取供试品30mg加稀释剂70%乙腈水溶液制成0.6mg/ml供试品溶液，精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml容量瓶中，加稀释剂70%乙腈水溶液溶解制成0.006mg/ml自身对照溶液，稀释倍数为100倍，分别取供试品溶液及自身对照溶液20µl进样，记录色谱图，按加校正因子的自身对照法计算供试品中1-氟萘及相关杂质的含量，具体地，计算式如下：单个杂质含量（%）=总杂质=σ单个杂质含量；式中：at—供试品溶液中各杂质的峰面积；式中：ar—自身对照溶液中主成分的峰面积；式中：f—已知杂质的校正因子。本发明的有益效果在于：（1）本发明的一种分离与测定1-氟萘及相关杂质的方法，该方法能够实现1-氟萘及相关杂质的有效分离，实现了杂质有效控制，从根本上确保了产品质量，具有简便，快速，准确度高等优点。（2）本发明的一种分离与测定1-氟萘及相关杂质的方法，不仅能够实现1-氟萘及相关杂质的有效分离，而且能够准确测定1-氟萘及相关杂质的含量，同时采用高效液相色谱法，操作简单，准确度高。（3）本发明所述的方法适用于1-氟萘及相关杂质的分离和/或测定，可用于单独分离和/或测定某一种物质，也可同时分离和/或测定1-氟萘及相关杂质，与现有技术相比，本发明的方法更全面，更快捷，提高了准确度，提高了效率，具有显著的进步性。附图说明图1为实施例1中稀释剂hplc图。图2为实施例1中杂质萘对照品hplc图，图中的色谱峰为杂质萘的色谱峰，其保留时间在22.0min左右。图3为实施例1中杂质2-氟萘对照品hplc图，图中的色谱峰为杂质2-氟萘的色谱峰，其保留时间在22.5min左右。图4为实施例1中杂质1-氯萘对照品hplc图，图中的色谱峰为杂质1-氯萘的色谱峰，其保留时间在27.2min左右。图5为实施例1中1-氟萘对照品hplc图，图中的色谱峰为1-氟萘的色谱峰，其保留时间在23.5min左右。图6为实施例2中1-氟萘及各相关杂质混合溶液hplc图。图7为实施例3中自身对照溶液hplc图。图8为实施例3中供试品溶液hplc图。具体实施方式所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。以下实施例中，本发明的方法中，采用的仪器及色谱柱条件如下：高效液相色谱仪：岛津lc-16；色谱柱：watersxterramsc18（4.6mm×250mm，5µm）流动相a：乙腈；流动相b：10mmo/l碳酸氢铵+6mmol/l二乙胺溶液；流动相按表1所示进行梯度洗脱；表1梯度洗脱表时间（分钟）流动相a（%）流动相b（%）04060206535218020268020274060454060检测波长：230nm；柱温：35℃；流速：0.8ml/min进样体积：20µl；稀释剂：70%乙腈水溶液。以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：1-氟萘供试品：山东海韵医药科技有限公司，批号20170914，94.4%；1-氟萘对照品：supelco公司，批号lc13392v，99.9%；萘对照品：阿拉丁试剂有限公司，批号k1623081，99.9%；2-氟萘对照品：百灵威科技有限公司，批号l7c0p16，99.3%；1-氯萘对照品：tci化成工业发展有限公司，批号nzsfb-cj，98.3%。实施例11-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的定位（1）1-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的定位溶液的配制1-氟萘定位溶液的配制：精密称定1-氟萘对照品30.79mg，置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1-氟萘定位溶液，浓度为0.6152mg/ml。萘定位溶液的配制：精密称定萘对照品30.12mg，置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得萘定位溶液，浓度为0.6108mg/ml。2-氟萘定位溶液的配制：精密称定2-氟萘对照品30.60mg，置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得2-氟萘定位溶液，浓度为0.6078mg/ml。1-氯萘定位溶液的配制：精密称定1-氯萘对照品31.34mg，置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1-氯萘定位溶液，浓度为0.6162mg/ml。（2）1-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的定位取上述的各定位溶液按照上述的色谱条件进样分析，如图1至图5所示，稀释剂不干扰样品的测定，1-氟萘的保留时间在23.5min左右，萘的保留时间在22.0min左右，2-氟萘的保留时间在22.5min左右，1-氯萘的保留时间在27.2min左右。实施例21-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的分离（1）1-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘混合溶液的配制萘储备溶液的配制：同实施例1中萘定位溶液，浓度为0.6108mg/ml。2-氟萘储备溶液的配制：精密移取实施例1中2-氟萘定位溶液1.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得2-氟萘储备溶液，浓度为0.0304mg/ml。1-氯萘储备溶液的配制：同实施例1中1-氯萘定位溶液，浓度为0.6162mg/ml。混合溶液的配制：精密称定1-氟萘对照品30.24mg，精密移取萘储备溶液5.0ml，2-氟萘和1-氯萘储备溶液各1.0ml置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合溶液。（2）取上述的混合溶液按照上述的色谱条件进样分析，记录色谱图如图6所示，可见采用本发明的方法1-氟萘相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的分离均能有效分离，最小分离度为萘与2-氟萘分离度等于1.6，其中图谱中19.954min的杂质是由萘对照品引入、26.879min的杂质是由1-氯萘对照品引入，与1-氟萘无关，因此无需考察。实施例3供试品中1-氟萘及相关杂质萘、2-氟萘和1-氯萘的分离检测供试品溶液配制：精密称取供试品约30mg，置于50ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，浓度为0.6mg/ml。自身对照溶液配制：精密移取供试品溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，浓度为0.006mg/ml。分别取上述的供试品溶液及自身对照溶液按照上述的色谱条件进样分析，记录色谱图如图7、图8所示，按加校正因子的自身对照法计算供试品中1-氟萘及相关杂质的含量，计算式如下：单个杂质含量（%）=总杂质=σ单个杂质含量；式中：at—供试品溶液中各杂质的峰面积；式中：ar—自身对照溶液中主成分的峰面积；式中：f—已知杂质的校正因子。由图7、图8可以看出，在该条件下1-氟萘与杂质完全分离，其中最小分离度为萘与2-氟萘分离度等于1.6。1-氟萘的保留时间在23.463min，按照上述的公式计算1-氟萘的含量为94.431%，萘含量为5.356%，2-氟萘含量为0.037%，1-氯萘含量为0.165%，其他未知杂质含量为0.011%，（含量低于0.01%的未知杂质忽略不计），总杂质含量为5.569%。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。当前第1页12