本发明涉及电分析化学技术领域，具体涉及一种用于测定苯乙胺电极的制备方法。
背景技术：
生物胺是一类含氮小分子量化合物的总称。根据生物胺的结构特征可分成3大类：(1)脂肪族，如尸胺、腐胺、亚精胺、精胺等；(2)芳香族，如苯乙胺、酪胺等；(3)杂环族，如色胺、组胺等。生物胺存在于各种动植物的组织中，它是生物有机体内正常的活性成分，在动植物机体中有着重要的生理作用。例如，精胺、亚精胺、腐胺和尸胺等都是生物活性细胞中不可缺少的一部分，在调节蛋白质和核酸的合成以及生物膜的稳定性方面起着关键作用。此外，生物胺也广泛地存在于多种食品中，尤其是发酵食品和蛋白质丰富的食品。如：肉制品、水产品、奶酪、香肠、啤酒、葡萄酒等。食品中主要的生物胺包括：组胺、酪胺、β-苯乙胺、尸胺、腐胺、色胺、精胺和亚精胺等多种单胺和多胺物质。在肉制品、水产品等蛋白含量较为丰富的食品中，由于相关微生物产生的酶能催化脱去游离氨基酸的羧基而产生生物胺，所以生物胺含量的高低与其质量密切相关。
苯乙胺又称2-苯乙胺或β-苯乙胺，分子式为c8h11n，其化学结构较简单，它属于芳香族胺类物质。广泛存在于巧克力、牛奶、肉和葡萄酒等食品中，尤其是经微生物发酵之后的食品。在人体内，苯乙胺是一种生物碱与单胺类神经递质，能够提升细胞外液中多巴胺的水平，同时抑制多巴胺神经活化，用于治疗抑郁症。在人脑中，β-苯乙胺具有神经调节物质、神经递质与示踪胺的作用。苯乙胺作为重要的医药和染料中间体，在医药上主要用于合成以下药物：兴奋药、抗抑郁药、迷幻剂、神入感激发剂、降食欲剂、支气管扩张药等。苯乙胺类物质在药理学上可作为重要药物使用，但是，苯乙胺若过量存在于食品中，则会对身体造成一定的伤害。因此，检测发酵类食品、动物源食品和葡萄酒等食品中生物胺的含量尤为重要。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种操作简单、检测准确、灵敏度高的用于测定苯乙胺电极的制备方法。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种用于测定苯乙胺电极的制备方法，包括以下步骤：
(1)柔性石墨的改性：将柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10-30min，然后加入钛酸酯偶联剂和链增长剂，继续回流搅拌0.5-2h；
(2)ceo2的制备：将柠檬酸加入到去离子水中，搅拌均匀后加入ce(no3)3·6h2o，35℃搅拌10-30min，然后转移到反应釜中，密封于140-150℃反应8-10h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于320-340℃煅烧1-2h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入ceo2，回流搅拌0.5-4h，降温至70-75℃加入蓖麻油和活性助剂，继续搅拌20-40min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散1-2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极。
检测苯乙胺的电化学传感器，包括工作电极、参比电极、对电极；其特征在于：所述的工作电极为表面滴涂有柔性石墨修饰的ceo2薄膜的玻碳电极。
所述柠檬酸、去离子水、ce(no3)3·6h2o的质量比为5-10：50-80：5-10。
所述柔性石墨、钛酸酯偶联剂、链增长剂、ceo2、蓖麻油、活性助剂的质量为20-30：6-10：0.1-0.2：6-8：0.1-0.5：1-2。
所述活性助剂的制备方法为：将肌氨酸加入到去离子水中，40℃搅拌10min，然后添加山梨糖醇和钛酸四乙酯，加热至回流状态保温搅拌0.5-4h，接着加入玉米油，70-80℃搅拌30-40min，过滤，所得固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重。
所述肌氨酸、山梨糖醇、钛酸四乙酯、玉米油的质量比为6-8：10-15：0.05：0.5-2。
柔性石墨作为一种新型功能性碳素材料，是由天然石墨鳞片经插层、水洗、干燥、高温膨化得到的一种疏松多孔的蠕虫状物质。柔性石墨除了具备天然石墨本身的耐冷热、耐腐蚀、自润滑等优良性能以外，还具有天然石墨所没有的柔软、压缩回弹性、吸附性、生态环境协调性、生物相容性、耐辐射性等特性。
ceo2是一种重要的稀土氧化物，因其具有特殊结构和形貌，越来越引起人们极大地研究兴趣，被广泛应用于医学、材料、化学、生物和环境工程等领域。
本发明的有益效果是：
(1)本发明采用改性柔性石墨修饰的ceo2作为传感器敏感材料，制备简便，成本低廉，检测准确，具有比表面积大、导电性好和富集能力强的优点；
(2)以肌氨酸、山梨糖醇为原料通过酯化反应合成的活性助剂，可以提高传感器电极的活性，能够显著提高苯乙胺的电化学响应信号，分析灵敏度高，分析速度快。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
(1)柔性石墨的改性：将20g柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10min，然后加入6g钛酸酯偶联剂和0.1g链增长剂，继续回流搅拌2h；
(2)ceo2的制备：将6g柠檬酸加入到60g去离子水中，搅拌均匀后加入6gce(no3)3·6h2o，35℃搅拌20min，然后转移到反应釜中，密封于140℃反应8h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于320℃煅烧1h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入6gceo2，回流搅拌3h，降温至70℃加入0.2g蓖麻油和1g活性助剂，继续搅拌30min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极；
活性助剂的制备：将7g肌氨酸加入到去离子水中，40℃搅拌10min，然后添加12g山梨糖醇和0.05g钛酸四乙酯，加热至回流状态保温搅拌4h，接着加入1g玉米油，75℃搅拌40min，过滤，所得固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重。
实施例2
(1)柔性石墨的改性：将25g柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10min，然后加入7g钛酸酯偶联剂和0.2g链增长剂，继续回流搅拌2h；
(2)ceo2的制备：将8g柠檬酸加入到80g去离子水中，搅拌均匀后加入8gce(no3)3·6h2o，35℃搅拌20min，然后转移到反应釜中，密封于150℃反应8h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于340℃煅烧1h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入6gceo2，回流搅拌3h，降温至70℃加入0.3g蓖麻油和1g活性助剂，继续搅拌30min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极；
活性助剂的制备：将7g肌氨酸加入到去离子水中，40℃搅拌10min，然后添加12g山梨糖醇和0.05g钛酸四乙酯，加热至回流状态保温搅拌4h，接着加入1g玉米油，75℃搅拌40min，过滤，所得固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重。
对照例1
(1)柔性石墨的改性：将20g柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10min，然后继续回流搅拌2h；
(2)ceo2的制备：将6g柠檬酸加入到60g去离子水中，搅拌均匀后加入6gce(no3)3·6h2o，35℃搅拌20min，然后转移到反应釜中，密封于140℃反应8h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于320℃煅烧1h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入6gceo2，回流搅拌3h，降温至70℃加入0.2g蓖麻油和1g活性助剂，继续搅拌30min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极；
活性助剂的制备：将7g肌氨酸加入到去离子水中，40℃搅拌10min，然后添加12g山梨糖醇和0.05g钛酸四乙酯，加热至回流状态保温搅拌4h，接着加入1g玉米油，75℃搅拌40min，过滤，所得固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重。
对照例2
(1)柔性石墨的改性：将20g柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10min，然后加入6g钛酸酯偶联剂和0.1g链增长剂，继续回流搅拌2h；
(2)ceo2的制备：将6g柠檬酸加入到60g去离子水中，搅拌均匀后加入6gce(no3)3·6h2o，35℃搅拌20min，然后转移到反应釜中，密封于140℃反应8h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于320℃煅烧1h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入6gceo2，回流搅拌3h，降温至70℃加入1g活性助剂，继续搅拌30min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极；
活性助剂的制备：将7g肌氨酸加入到去离子水中，40℃搅拌10min，然后添加12g山梨糖醇和0.05g钛酸四乙酯，加热至回流状态保温搅拌4h，接着加入1g玉米油，75℃搅拌40min，过滤，所得固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重。
对照例3
(1)柔性石墨的改性：将20g柔性石墨加入到去离子水中，回流搅拌10min，然后加入6g钛酸酯偶联剂和0.1g链增长剂，继续回流搅拌2h；
(2)ceo2的制备：将6g柠檬酸加入到60g去离子水中，搅拌均匀后加入6gce(no3)3·6h2o，35℃搅拌20min，然后转移到反应釜中，密封于140℃反应8h，过滤，所得产物用去离子水和无水乙醇洗去杂质，60℃真空干燥至恒重，然后将干燥后的固体于320℃煅烧1h，即可；
(3)负载：向步骤1中溶液加入6gceo2，回流搅拌3h，降温至70℃加入0.2g蓖麻油，继续搅拌30min，趁热过滤，固体用去离子水洗去杂质，50℃真空干燥至恒重；
(4)分散：将步骤3中固体加入到无水乙醇中，超声分散2h，得到分散液；
(5)制备：将步骤4中得到的分散液滴涂到玻碳电极表面，蒸发干燥后得到用于测定苯乙胺的电极；
实施例3
以实施例1为基础，设置不添加钛酸酯偶联剂和链增长剂的对照例1、不添加蓖麻油的对照例2、不添加活性助剂的对照例3。
利用实施例1-2、对照例1-3进行电极的制备，并将其用于鱼露中苯乙胺的检测，检测结果如表1所示。
表1鱼露中苯乙胺的检测结果
样品处理：取鱼露样品，用滤膜过滤，加入氯化钠使溶液饱和，量取10ml饱和溶液，用naoh溶液调节ph至12.5，再加入5ml体积比为1:1的正丁醇-三氯甲烷混合液，震荡、离心，取上层有机相，重复2次，合并有机相、干燥后加入ph值为12.5的naoh溶液溶解，即得待测溶液。
具体检测条件为：检测电位：1.1v；富集电位：0.8v；微分脉冲条件：振幅为0.05v，脉冲周期为0.5s，脉冲宽度为0.05s。
用高效液相色谱法(hplc)测定了同样的样品并进行对照，检测结果与该电极所得结果非常吻合，表明该传感器能够用于实际样品的测定，检测结果快速、准确。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。