本发明涉及生物制品，尤其是涉及一种抗缪勒管激素质控品的制备方法。
背景技术：
血清抗缪勒管激素（anti-mullerianhormone，amh）是由女性卵泡颗粒细胞和男性睾丸支持细胞分泌的二聚体糖蛋白，可抑制女性卵泡的募集和生长，调节男性睾丸间质细胞的功能。目前发表的文章多是阐述其在临床方面的应用，如检测血清amh的水平可用于评估卵巢储备，预测辅助生殖过程中的卵巢反应，评估肿瘤患者卵巢储备，辅助诊断多囊卵巢综合征、卵巢早衰及预测绝经等。
amh水平不受垂体促性腺激素的影响，在整个月经周期中数值变化不大，相对于目前常用的预测卵巢储备及卵巢反应性（年龄及afc，fsh和e2等）传统方法而言，血清amh可更早期、更准确地预测妇女卵巢储备的变化，在监测卵巢储备力、诊断卵巢相关疾病、预测体外受精成功率等方面具有其他指标不可比拟的优势，成为当下备受关注的生殖内分泌激素。
目前amh检测试剂市面上产品很多，各厂家产品质量参差不齐，如何提高检测结果的有效性，成为临床应用的迫切要求。而室内质控的目的就在于检测和控制本实验室常规工作的精密度及检测其准确度的改变，以提高本实验室常规工作中标本检测的一致性，从而保证检验报告的准确发出，因此室内质控品的品质是实验室质量管理的基础和关键环节。
目前cfda注册的抗缪勒管激素质控品厂家有罗氏、贝克曼、微点和迈瑞，但这些厂家的质控品多是与该厂家的试剂和仪器配套使用。具体来说，方法1：采用马血清，加入防腐剂进行防腐，添加两个浓度范围的牛抗缪勒管激素（amh）（雄性胎牛血清），制备成1ng/ml和5ng/ml两个浓度的抗缪勒管激素质控品，每瓶2ml，进行分装冻干；由于采用马血清，与人检测样本差别较大，可能含有基质效应；同时采用牛抗缪勒管激素（amh）作为活性物质，与人抗缪勒管激素差别较大，不一定适用于所有检测平台；且只有两个浓度水平，可供用户选择空间小，缺乏amh质控高值。方法2：采集小牛血清作为基质液，加入防腐剂防腐，分别添加amh重组抗原，制备出水平1、水平2、水平3三个浓度水平的抗缪勒管激素质控品，每瓶1.25ml，进行分装冻干；由于采用小牛血清作为基质液，与人检测样本类型差别较大，不适用所有amh检测平台进行使用。方法3：采用牛血清白蛋白缓冲基质作为基质液，加入防腐剂防腐，分别添加amh活性物质，制备水平1、水平2两个浓度水平的抗缪勒管激素质控品，每瓶2ml，进行分装冻干；由于采用牛血清白蛋白缓冲基质作为基质液，与人检测样本类型差别较大，不适用所有amh检测平台进行使用；只有两个浓度水平，可供用户选择空间小。方法4：使用处理过的人血浆作为基质液，加入0.5%proclin300作为防腐剂防腐，分别添加amh重组抗原，制备1ng/ml、5ng/ml、15ng/ml三个浓度水平的抗缪勒管激素质控品，每瓶2ml，进行分装冻干。由于采用处理过的人血浆作为基质液，虽与人检测样本类型较为接近，但血浆基质反复冻融容易产生沉淀，影响检测。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种适用范围更广的抗缪勒管激素质控品的制备方法，本发明制备的质控品采用正常人血清基质，与临床样本基质保持一致，可最大程度降低基质效应，稳定性良好，适用于主流厂家和试剂，具有非常好的临床实用性，同时可以大批量的生产，非常有利于临床的长期使用。
为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：
本发明所述的抗缪勒管激素质控品的制备方法包括下述步骤：
第一步，选用去激素血清，测定血清中hbsag、丙型肝炎抗体、梅毒抗体、hiv抗体均为阴性；
第二步，在符合要求的去激素血清中加入proclin300、硫酸庆大霉素、叠氮化钠、硫柳汞、海藻糖并混合均匀；
第三步，测定抗缪勒管激素的本底值，置于2～8℃暂存；
第四步，根据第三步测定结果，添加抗缪勒管激素阳性物质至设定值0.5-20.0ng/ml；
第五步，按1.0ml/瓶的规格将第四步所得物质分装于4ml棕色玻璃瓶进行真空冷冻干燥，得到抗缪勒管激素质控品，放置2～8℃保存。
为提高质控品的稳定性，第四步所得物质先将其放置于2～8℃温度下保存3~14天后再行分装。
所述第二步中，在符合要求的去激素血清中加入0.2%proclin300，0.2%硫酸庆大霉素，0.2%叠氮化钠，0.2%硫柳汞，5%海藻糖；其中除上述提到的proclin300、硫酸庆大霉素、叠氮化钠、硫柳汞以外，也可采用其他的防腐剂；除采用海藻糖起保护作用外，也可以采用其他的糖类。
所述第四步中，添加抗缪勒管激素阳性物质后配置的浓度分别为1.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml。
所述第五步中真空冷冻干燥的条件为真空度＜10pa，冷阱温度＜-55℃；20~26小时取出后加盖保存。
本发明的优点在于可体现在以下几点：
1、本发明质控品选用去激素血清，由于与正常人样本一致性高，可最大程度的降低基质效应，适用于各主流厂家的仪器和试剂。
2、本发明选用去激素血清为原料，可商业化的生产。
3、本发明添加各项目阳性物质后于2～8℃放置3-14天，可使各项目在溶液中充分平衡，保证产品的稳定性更好。
4、本发明制备的质控品为冻干态质控品，稳定性良好，不受运输、温度等因素影响，性能稳定。
5、本发明制备的质控品可用于抗缪勒管激素的室内质控使用，同时也可用于室间质量评价组织者开展的抗缪勒管激素室间质评活动。本发明制备的质控品还适用于各临床实验室、第三方体检中心、各省市临检中心等开展有抗缪勒管激素项目进行样本检测时的室内质量控制和室间质量评价。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明做更加详细的说明，以便于本领域技术人员的理解。
实施例1制备抗缪勒管激素质控品
第一步，采用商业化的去激素血清，分别测定血清中的hbsag、丙型肝炎抗体、梅毒抗体、hiv抗体；
第二步，选用hbsag、丙型肝炎抗体、梅毒抗体、hiv抗体检测阴性的去激素血清，依次加入0.2%的叠氮化钠，0.2%的proclin300，0.2%硫酸庆大霉素，0.2%硫柳汞，5%海藻糖，并混合均匀；
第三步，测定抗缪勒管激素的本底值，置于2～8℃暂存；
第四步，根据第三步测定的本底值结果，添加抗缪勒管激素阳性物质，其配置浓度分别为1.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml；
第五步，将第四步所得物质先放置于2～8℃温度下保存3~14天，使各成分在溶液中充分平衡，以提高产品的稳定性；然后按1.0ml/瓶的规格将第四步所得物质分装于4ml棕色玻璃瓶（仅加胶塞）进行真空冷冻干燥（真空度<10pa、冷阱温度<-55℃），20~26小时取出得到三水平（水平1：1.0ng/ml，水平2：5.0ng/ml，水平3：15.0ng/ml）抗缪勒管激素质控品，加盖置于2～8℃保存。
实施例2实施例1制备的质控品的性能测定
1、稳定性
将三水平（1.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml）质控品依次对复溶后2-8℃保存、冻干态37℃加速，复融后反复冻融次数进行测试，其测试数据见下表1：
表1
从表中数据可以看出：抗缪勒管激素质控品开瓶复溶后2～8℃保存14天，37℃热加速14天，反复冻融5次后，降幅均小于5%，其稳定性符合要求。
2、检测平台间一致性
将三水平（1.0ng/ml、5.0ng/ml、15.0ng/ml）质控品分别在主流平台（罗氏、贝克曼）上进行测定，罗氏和贝克曼检测平台的测试数据见下表2：
表2
从表中数据可以看出：该抗缪勒管激素质控品在罗氏和贝克曼平台上检测结果基本一致，在主流检测平台的检测结果一致性符合要求。