一种酒石酸匹莫范色林及其杂质的检测方法与流程

本发明涉及药物分析领域，尤其涉及一种酒石酸匹莫范色林及其杂质的检测方法。

背景技术：

目前全世界帕金森氏病患者约700万到1000万，中国就有260万，居世界第一，每年还要增加10万新发病患者。50％以上的帕金森氏病患者曾有过精神症状(pdp)。这些精神症状主要表现为幻觉和妄想，给帕金森氏病患者的治疗和护理带来更大挑战。帕金森病精神症是帕金森病患者进入老年看护公寓的一个主要原因。目前，帕金森病精神症除了低剂量氯氮平(clozapine，clozaril)之外没有批准其他药物，而氯氮平有严重的副作用，会导致白细胞数量下降及嗜睡。

阿卡迪亚公司研发的酒石酸匹莫范色林(pimavanserin，nuolazid)用于治疗帕金森氏病精神症状，为非多巴胺神经递质类似物，可以选择性阻断5-羟色胺2a受体而不影响多巴胺的作用。

目前，未见酒石酸匹莫范色林及其杂质分析方法的相关专利文献报道，随着国内对该产品的研究深入，为了加强酒石酸匹莫范色林的质量控制，有必要提供一种灵敏稳定的检测方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种酒石酸匹莫范色林及其杂质的检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的目的在于提供一种酒石酸匹莫范色林及其杂质的检测方法，包括如下步骤：

1)配制酒石酸匹莫范色林及其杂质的标准对照品溶液；

2)配制供试样品溶液；

3)使用反相高效液相色谱仪测定标准对照品溶液中的酒石酸匹莫范色林及其杂质的色谱图，使得任意相邻物质间的分离度≥1.5；

4)使用反相高效液相色谱仪测定供试样品溶液的色谱图；

5)依据标准对照品溶液的色谱图和供试样品溶液的色谱图，利用外标法确定供试样品溶液中酒石酸匹莫范色林及其杂质的含量；

其中，步骤3)和步骤4)利用乙腈：磷酸二氢钾溶液＝44：56(v/v)进行等梯度洗脱，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.02mol/l，ph＝5～6。

优选地，上述杂质选自4-异丁氧基苯甲腈、4-异丁氧基苄胺、4-(4-氟苄基氨基)-1-甲基哌啶、1,3-二(4-异丁氧基苄基)脲、1-(4-氟苄基)-3-(4-异丁氧基苄基)脲中的至少一种。

优选地，在上述标准对照品溶液和供试样品溶液加入前还包括对其进行过滤处理；优选地，过0.2μm的滤膜。

优选地，上述供试样品的浓度为0.8～1.5mg/ml。

优选地，上述反相高效液相色谱中的流速为0.8～1.0ml/min。

更优选地，上述反相高效液相色谱中的流速为0.8ml/min。

优选地，上述反相高效液相色谱中的色谱柱温为20～30℃；

更优选地，上述反相高效液相色谱中的色谱柱温为25℃。

优选地，上述反相高效液相色谱中的进样量为8～15μl。

更优选地，上述反相高效液相色谱中的进样量为10μl。

优选地，上述标准对照品溶液和供试样品溶液的溶剂均为乙腈和水的混合溶液。

优选地，上述乙腈和水的体积比为(6～7)：(3～4)。

优选地，上述乙腈和水的体积比为6：4或7：3。

优选地，上述反相高效液相色谱的色谱柱为xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm。

优选地，上述反相高效液相色谱的检测波长为210～220nm。

更优选地，上述反相高效液相色谱的检测波长为215nm。

本发明的有益效果是：

本发明采用高效液相色谱法检测酒石酸匹莫范色林及其杂质，该方法能使酒石酸匹莫范色林与其杂质及杂质与杂质之间实现有效分离，因而该方法能准确测定酒石酸匹莫范色林及各杂质的含量，且该方法操作简便、快速、重复性、准确性及稳定性高，为酒石酸匹莫范色林工业化生产提供可靠的检测方法。

附图说明

图1为标准品溶液的色谱图；

图2为实施例1中酒石酸匹莫范色林供试样品溶液的色谱图；

图3为实施例2中酒石酸匹莫范色林供试样品溶液的色谱图；

图4为实施例3中酒石酸匹莫范色林供试样品溶液的色谱图；

图5为对比例1中酒石酸匹莫范色林供试样品溶液的色谱图。

具体实施方式

下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。

下述实施例和对比例中所称的杂质a为4-异丁氧基苯甲腈，杂质b为4-异丁氧基苄胺，杂质c为4-(4-氟苄基氨基)-1-甲基哌啶，杂质d为1,3-二(4-异丁氧基苄基)脲，杂质e为1-(4-氟苄基)-3-(4-异丁氧基苄基)脲。

实施例1

1)标准对照品溶液的配制：准确称取酒石酸匹莫范色林标准品、杂质a、b、c、d和e，加入乙腈和水的混合溶液(体积比7：3，下简称乙腈水溶液)溶解，配制成每ml含酒石酸匹莫范色林标准品1mg、杂质a、b、c、d和e各0.1mg的溶液，作为标准对照品溶液；

2)供试样品溶液的配制：准确称取20mg酒石酸匹莫范色林于20ml容量瓶中，加入乙腈水溶液溶解并稀释至刻度线，作为供试样品溶液；

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝5)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl；

将步骤1)中的标准对照品溶液(10μl)注入高效液相色谱仪中，记录色谱图(如图1)；

将步骤2)中的供试样品溶液(10μl)注入高效液相色谱仪中，记录色谱图(如图2)；

依据标准对照品溶液中各物质的峰面积与供试样品溶液中各物质的峰面积进行比对(外标法)，确定供试样品中的布瓦西坦及其杂质的含量；

由图1可知：酒石酸保留时间为2.737min，匹莫范色林保留时间9.488min，杂质a保留时间为12.740min，杂质b保留时间为5.570min，杂质c保留时间为4.165min，杂质d保留时间为20.771min，杂质e保留时间为13.542min，任意相邻峰之间分离度均大于2.0，这说明酒石酸匹莫范色林与杂质及杂质与杂质间实现了很好的分离，为准确测试酒石酸匹莫范色林及各杂质的含量提供了非常有利的前提条件；

由外标法计算得到酒石酸匹莫范色林的含量为99.3％，杂质a的含量为0.002％，杂质b的含量为0.01％，杂质c的含量为0.11％，杂质d的含量为0.02％，杂质e的含量为0.01％，各杂质含量均小于0.2％。

实施例2

实施例2和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤2)和步骤3)中的色谱条件：

2)供试样品溶液的配制：准确称取20mg酒石酸匹莫范色林于20ml容量瓶中，加入乙腈水溶液溶解并稀释至刻度线，作为供试样品溶液；

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝5.5)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，供试样品溶液的色谱图见图3；

由图3可知：酒石酸保留时间为2.748min，匹莫范色林保留时间9.367min，杂质a保留时间为12.570min，杂质b保留时间为5.518min，杂质c保留时间为4.140min，杂质d保留时间为20.473min，杂质e保留时间为13.367min，各峰之间分离度均大于2.0，这说明酒石酸匹莫范色林与杂质及杂质与杂质间实现了很好的分离，为准确测试酒石酸匹莫范色林及各杂质的含量提供了非常有利的前提条件；

由外标法计算得到酒石酸匹莫范色林的含量为99.1％，杂质a的含量为0.011％，杂质b的含量为0.01％，杂质c的含量为0.09％，杂质d的含量为0.01％，杂质e的含量为0.01％，各杂质含量均小于0.2％。

实施例3

实施例3和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤2)和步骤3)中的色谱条件：

2)供试样品溶液的配制：准确称取20mg酒石酸匹莫范色林于20ml容量瓶中，加入乙腈水溶液溶解并稀释至刻度线，作为供试样品溶液；

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，供试样品溶液的色谱图见图4；

由图4可知：酒石酸保留时间为2.726min，匹莫范色林保留时间9.830min，杂质a保留时间为12.617min，杂质b保留时间为5.754min，杂质c保留时间为4.392min，杂质d保留时间为20.567min，杂质e保留时间为13.434min，各峰之间分离度均大于2.0，这说明酒石酸匹莫范色林与杂质及杂质与杂质间实现了很好的分离，为准确测试酒石酸匹莫范色林及各杂质的含量提供了非常有利的前提条件；

由外标法计算得到酒石酸匹莫范色林的含量为99.2％，杂质a的含量为0.009％，杂质b的含量为0.01％，杂质c的含量为0.13％，杂质d的含量为0.03％，杂质e的含量为0.01％，各杂质含量均小于0.2％。

对比例1

对比例1和实施例1的检测方法相同，不同之处在于：步骤2)和步骤3)中的色谱条件：

2)供试样品溶液的配制：准确称取20mg酒石酸匹莫范色林于20ml容量瓶中，加入乙腈水溶液溶解并稀释至刻度线，作为供试样品溶液；

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝(45～70)：(55～30)(v/v)，进行梯度洗脱，梯度洗脱时间及流动相乙腈的体积比顺序为：0～15min45％运行，15～25min从45％～70％运行，25～30min从70％～45％运行；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，供试样品溶液的色谱图见图5；

由图5可知：酒石酸保留时间为2.742min，匹莫范色林保留时间9.524min(分离度为18.29)，杂质a未检出，可能与主峰重叠，杂质b保留时间为3.692min(分离度为0.66)，杂质c保留时间为3.581min(分离度为0.73)，杂质d保留时间为24.148min(分离度为45.73)，杂质e保留时间为10.612min(分离度为2.90)，本方法不能满足各峰之间分离度均大于或等于1.5，不能有效地分离酒石酸匹莫范色林及其杂质。

对比例2

对比例2和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：甲醇：kh2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：主峰峰形较差，杂质无法达到基线分离。

对比例3

对比例3和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝4)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：主峰峰形较差，拖尾明显，部分杂质无法检出，主峰与杂质无法分离。

对比例4

对比例4和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.5ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：主峰峰形较差，拖尾明显。

对比例5

对比例5和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：kh2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：35℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：部分杂质无法检出，峰形较差，无法达到基线分离。

对比例6

对比例6和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：nah2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：1.2ml/min；柱温：25℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：部分杂质无法检出，峰形较差，无法达到基线分离。

对比例7

对比例7和实施例1的检测方法相同，不同之处在于步骤3)中的色谱条件：

3)高效液相色谱测定：色谱试验条件如下：xdbcn色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；流动相：乙腈：nah2po4(0.02mol/l，ph＝6)＝44：56(v/v)，进行等梯度洗脱，洗脱时间30min；流速：0.8ml/min；柱温：15℃；紫外检测器检测波长：215nm；进样量：10μl，

试验结果：柱温过低，压力偏大，影响基线稳定性；部分杂质无法检出，峰形较差，无法达到基线分离。