离子液体结合PB设计和BBD响应面法优化提取补骨脂中7个活性成分的方法与流程

本发明属于医药领域，具体涉及一种离子液体结合pb设计和bbd响应面法优化提取补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚的方法。

背景技术：

补骨脂为豆科植物补骨脂psoraleacorylifolial.的干燥成熟果实，具有温肾助阳，纳气平喘，温脾止泻的功效；外用消风祛斑，常用来治疗银屑病、斑秃、白癜风等皮肤类疾病。目前，已经从补骨脂中分离鉴定出90多个化合物，主要包括香豆素、黄酮类、单萜酚类化合物、苯并呋喃类和类脂化合物等，各成分之间相互作用，形成多样的药理活性，如抗菌、抗炎、抗氧化、抗抑郁活性、抗肿瘤和细胞毒性、保肝活性和雌激素样活性等。

呋喃香豆素类化合物是补骨脂中重要的活性成分，是一类天然植物的光敏剂。补骨脂素和异补骨脂素具有光敏性，在阳光的照射下，能够促进黑色素的合成，治疗白癜风、银屑病等皮肤顽疾。文献报道，补骨脂定和新补骨脂异黄酮具有治疗骨质疏松和抗肿瘤作用。补骨脂二氢黄酮甲醚和补骨脂乙素是一类典型的异戊烯基黄酮类化合物，对多种癌细胞具有抗增殖作用，同时对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用。补骨脂甲素也是补骨脂中重要的活性成分，具有雌激素样作用，临床上常用来防治骨质疏松。

离子液体是一大类绿色溶剂，具有性质稳定、溶解能力强和结构可修饰等独特的性能，同时具有优于传统有机溶剂绿色环保等特点，在天然植物活性成分的提取分离方面的应用成为研究的热点。离子液体-超声辅助提取技术的有机结合，能够最大限度提取活性成分，弥补了有机提取剂污染、耗能大的缺点。因此，本文运用离子液体－超声辅助技术，通过pb设计和bbd响应面试验优化了中药补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚7种活性成分的提取，提供补骨脂活性成分分析的新方法。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种离子液体结合pb设计和bbd响应面试验法优化提取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚7种活性成分的方法，在单因素和pb设计实验的基础上筛选出影响显著的因素，采用design-expert8.0.6设计bbd响应曲面试验，最后得到补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚7种活性成分的最佳提取工艺。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

离子液体结合pb设计和bbd响应面法优化提取补骨脂中7个活性成分的方法，所述7个活性成分为：补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚，具体优化过程如下：

(1)以7个化合物的总提取量为指标，首先选择合适的溶剂来溶解离子液体以及确定最佳的萃取剂类型；

(2)在(1)的基础上，通过单因素试验确定提取条件的因素水平，以单因素试验得到的因素水平为基础，根据pb试验原则进行试验设计筛选显著性因素；

(3)根据步骤(2)的试验结果，确定乙醇体积、固液比、粉碎目数和离心转速为显著性因素，选取乙醇体积x1、固液比x2、粉碎目数x3和离心转速x4为响应面模型的自变量，固定离子液体浓度、超声时间、超声功率分别为0.6m/l、20min和400w，利用design-expert8.0.6软件根据bbd试验原则进行试验设计；并根据试验数据进行多元回归分析，建立二次多元回归方程：y＝13.82-0.59x1+0.76x2-1.41x3-0.077x4-0.61x1x2+0.51x1x3+0.25x1x4-1.18x2x3+0.30x2x4+0.020x3x4-1.00x1²-0.54x2²+1.80x3²+0.16x4²，x1的单位为v％，x2的单位为g/ml，x3的单位为目，x4的单位为r/min；

(4)对二次多元回归模拟方程进行方差分析和显著性分析，根据对回归模拟方程失拟的p值检验失拟是否显著，确定二次回归模方程是否适当，根据显著性检验，确定回归方程是否显著，根据r²，确定模型的预测价值；

(5)利用design-expert8.0.6软件根据二次多元回归方程进行绘图，分析自变量和响应值的关系，得到回归方程的响应面图，从而得到补骨脂中7个活性成分的最佳提取条件。

进一步地，所述步骤(1)中，分别以水、甲醇、乙腈和70％乙醇作为溶剂对补骨脂进行提取，筛选出70％乙醇对目标分析物的提取率最好，以70％乙醇作为溶剂，比较[bmim]bf4/70％乙醇，[bmim]br/70％乙醇，[bmim]pf6/70％乙醇，[hmim]pf6/70％乙醇4种离子液体对目标分析物的萃取率，最终确定[hmim]pf6/70％乙醇为最佳萃取剂。

进一步地，所述步骤(2)中，以萃取剂浓度a、乙醇体积b、固液比c、粉碎目数d、超声时间e、离心转速f、超声功率g7个因子进行单因素试验，并利用design-expert8.0.6软件根据pb实验原则进行实验设计，根据实验数据进行回归分析，获得多元一次回归方程为：y＝15.53+1.54a-0.99b-1.03c-2.67d-0.35e-0.59f-0.57g，对该方程进行方差分析和显著性分析，筛选出影响显著的因子乙醇体积、固液比、粉碎目数和离心转速。

进一步地，补骨脂的提取过程为：精密称取20目补骨脂粉末，精密称定，精密加入最佳萃取剂，超声萃取，离心后，吸取上层清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；将供试品溶液用高效液相色谱仪在254nm处检测峰面积，与补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚标准曲线比较，计算补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚的萃取量；萃取剂浓度、超声功率、粉碎目数、乙醇体积、固液比、超声时间、离心转速根据因子设计水平确定。

进一步地，所述步骤(5)中得到补骨脂的最佳提取条件是：离子液体浓度0.6m/l、乙醇体积75％、固液比1:40、粉碎目数20目、超声时间20min、离心转速3000r/min、超声功率300w。

一种提取补骨脂中7个活性成分的方法，所述7个活性成分为：补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚，具体提取过程如下：

将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末，加入萃取剂中，室温120～500w超声萃取10～60min，超声萃取结束后，3000～9000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂由离子液体与乙醇混合组成，所述离子液体为[bmim]bf4、[bmim]pf6、[hmim]pf6或[bmim]br，所述乙醇为40v％以上乙醇，萃取剂中离子液体的浓度为0.2～1.6mol/l，补骨脂与萃取剂按照固液比1g：(5－120)ml进行添加，补骨脂粉末目数为10～90目。

优选地，将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末，加入萃取剂中，室温200～300w超声萃取10～30min，超声萃取结束后，3000～5000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂由离子液体与乙醇混合组成，所述离子液体为[hmim]pf6，所述乙醇为70～100v％乙醇，萃取剂中离子液体的浓度为0.2～1.0mol/l，补骨脂与萃取剂按照固液比1g：(40～120)ml进行添加，补骨脂粉末目数为20～50目。

本发明利用离子液体结合pb设计和bbd响应面法优化中药有效成分提取工艺的应用将为中药研究者们提供新的思路和途径。本实验建立的最佳提取条件是科学可行的，可用于优化选取合适工业扩大化生产的提取技术，改善陈旧工艺，提高效率，为补骨脂的综合利用提供实验依据。

附图说明

图1补骨脂供试品溶液(1)、混合对照品(2)与空白溶剂(3)的hplc图：a.补骨脂素，b.异补骨脂素，c.新补骨脂异黄酮，d.补骨脂甲素，e.补骨脂定f.补骨脂乙素g.补骨脂二氢黄酮甲醚；

图2不同提取溶剂对香豆素和黄酮类化合物萃取率的影响(n＝3)；

图3离子液体浓度(a)、乙醇体积(b)、固液比(c)、粉碎目数(d)、超声时间(e)、离心转速(f)和超声功率(g)对补骨脂中香豆素和黄酮类等7种成分萃取率的影响(n＝3)

图4各因素交互作用对提取量综合评分影响的响应面图。

具体实施方式

以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案做进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。

1.仪器与试剂

补骨脂药材于2017年7月购于张仲景大药房，经河南大学药学院李昌勤教授鉴定为豆科植物补骨脂psoraleacorylifolial.的干燥成熟果实，标本存于国家食用菌加工技术研发专业中心。

补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚为实验室自制，纯度大于98％。1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[hmim]pf6(赛默飞世尔科技公司，美国)、溴化1-丁基-3-甲基咪唑[bmim]br(默克股份两合公司，德国)、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐[bmim]bf4(默克股份两合公司，德国)、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐[bmim]pf6(默克股份两合公司，德国)。乙腈、甲醇(hplc级，西陇科学)。

岛津lc-20at系列高效液相色谱仪(日本岛津)：lc-20at液相色谱输液泵、cto-10as柱温箱、spd-20a紫外检测器、lc-solution色谱数据处理系统；kq-500db型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，江苏)；tgl-16型高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂)；ab135-s型十万级电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司，瑞士)。

2.实验方法与结果

2.1补骨脂中7个活性成分含量测定方法的建立

2.1.1对照品溶液的制备

取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚适量，精密移取至5ml容量瓶中，加甲醇定容，制得浓度分别为107.5、111.9、34.42、15.36、51.52、18.84和69.60μg/ml的混合标准品溶液。

2.1.2供试品溶液的制备

精密称取补骨脂样品粉末20.00mg，加入适量的萃取剂，超声萃取后离心，吸取上层清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液(试验中依次改变单一变量萃取剂浓度、超声功率、粉碎目数、乙醇体积、固液比、超声时间、离心转速，各试验均平行3次)。

2.1.3色谱条件和系统适用性实验

表1补骨脂的含量测定色谱条件

按照以上色谱条件，分别进样即得补骨脂对照品及供试品的hplc图(图1)。如图1可知，在此色谱条件下，样品中补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚色谱峰的保留时间与对照品一致，7种成分的色谱峰分离度良好，与其它成分无干扰，理论塔板数不低于5000。

2.1.4线性关系考察

精密吸取混合对照品溶液，用甲醇进行稀释5个浓度，按上述色谱条件进样测定，记录各组分峰面积。以峰面积(y)为纵坐标，进样质量(x，μg)为横坐标，作图得回归方程，见表2。

表2补骨脂中7种成分的回归方程和线性范围

精密吸取各供试品溶液10μl，按上述色谱条件依次进样分析，测定峰面积，计算香豆素和黄酮类等7个化合物的含量。7个化合物的总含量为香豆素(补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂定)和黄酮(新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚)等7个化合物的总和，且权重系数分别为0.6和0.4。香豆素和黄酮类等7种化合物的总提取量的计算见公式1：

式1

2.1.5精密度试验

在最佳的色谱条件下，取混合对照品溶液连续进样6次，每次10μl，分别记录各峰面积，计算rsd分别为0.15％、0.10％、1.20％、0.25％、2.67％、3.44％和0.35％。结果表明仪器的精密度良好。

2.2萃取剂的选择

离子液体类型以及合适的分散剂的选择对目标分析物的萃取率影响很大。离子液体的结构和理化性质对于目标分析物的高选择性是关键因素。本实验选择了水溶性和脂溶性的4种离子液体：[bmim]bf4、[bmim]pf6、[hmim]pf6和[bmim]br，通过对补骨脂进行离子液体微萃取快速分析方法研究，考察并选择了用于萃取补骨脂中香豆素和黄酮类化合物的最佳离子液体类型。并比较了水、甲醇、乙腈和70％乙醇4种不同分散溶剂对目标分析物的萃取效果。

结果如图2所示：70％(体积比)乙醇对目标分析物的萃取含量最高，故选择70％乙醇为提取溶剂。不同类型离子液体萃取剂对补骨脂中香豆素和黄酮类提取效果不同，[hmim]pf6对目标分析物的萃取效果最好，可能是因为[hmimpf6与目标分析物之间形成较强π-π，n-π和氢键相互作作用，这些作用力有利于补骨脂中香豆素和黄酮类成分的提取。因此，[hmim]pf6/70％乙醇作为合适的萃取剂。

2.3单因素试验

2.3.1萃取剂浓度的选择

离子液体的浓度是影响萃取率的重要因素，它可以在一定程度上影响溶剂的极性，从而改变提取效果。结果如图3(a)所示，随着萃取剂浓度的增加，目标分析物的萃取率先增大后减小，萃取剂浓度为0.6mol/l时，目标分析物的萃取率最大。这可能是因为由于离子液体在通常情况下具有很大的粘度，而随着浓度的增加，导致溶液的粘度增大，进而导致溶剂的扩散力降低，难于进入样品组织结构中，使得成分的提取不够充分，最终导致萃取率下降。因此，离子液体浓度为0.6mol/l时，萃取率最大。

2.3.2乙醇体积的选择

乙醇作为离子液体的最佳分散剂，其体积浓度对目标分析物的影响也是至关重要的。有研究报道，高浓度的乙醇体积更有利于目标分析物的提取。按照上述实验方法，在上述萃取剂浓度下，对最佳乙醇体积进行了筛选。结果如图3(b)所示，随着乙醇体积的增加，萃取量有随之增大的趋势，而当乙醇体积为80％时，对目标分析物的萃取率达到最大。

2.3.3固液比的选择

在上述萃取剂的浓度下，筛选最佳的固液比，以最大限度萃取目标分析物。结果如图3(c)所示：随着液体的比重增大，目标分析物的萃取率先升高后降低，其中固液比为1:80时，分析物的萃取率最高。这可能是由于料液比增加，提高了细胞内外的浓度差，浓度差成为补骨脂中香豆素和黄酮类成分提取过程驱动力；当固液比增加过大时，离子液体溶解目标分析物已达到饱和，提取率趋于水平。因此，固液比为1:80(g/ml)进行补骨脂香豆素和黄酮类成分的提取。

2.3.4粉碎目数的选择

在上述优化条件上，筛选最佳的粉碎目数，以最大限度萃取目标分析物。结果如图3(d)所示：随着粉碎目数的增加，萃取量有随之增大的趋势，而当粉碎目数为50目时，对目标分析物的萃取率达到最大。这可能是因为离子液体具有黏性，而随着粉末粒度的增大，超过一定限度后，使得样品在离子液体的作用下汇集成团，导致成分的提取受到了阻碍。

2.3.5超声时间的选择

按照上述试验方法筛选的最佳条件，筛选最佳的超声时间。结果如图3(e)所示：随着超声时间的延长，目标分析物的萃取量逐步增加。在起始时间(10～20min)，目标分析物的萃取率增加较快，20～90min目标分析物的萃取率增加较慢。这可能是因为超声时间的增加影响着样品内部的浓度差，时间过长后会使得样品内部之间的浓度差趋于平衡，萃取量增加缓慢。另外，有文献报道超声时间的过长有可能导致离子液体的结构发生改变，故实验选择20min作为最佳超声时间。

2.3.6离心转速的选择

适宜的离心转速既可以省时减少能耗，又可以确保提取过程的充分进行。结果如图3(f)所示，随着离心转速的增加，目标分析物的萃取率有增大趋势，当离心转速为4000r/min时，目标分析物的萃取率最大。

2.3.6超声功率的选择

结果如图3(g)所示，当超声功率为300w时，目标分析物的萃取率最大。由于随着超声功率的提高，超声波对植物细胞的破碎作用逐渐增大，加速有效成分的溶解，但超声功率增大到一定程度后，对细胞的破碎作用过大，溶解杂质也增加，萃取率没有明显增加反而呈下降趋势。

2.4pb(plackett-burman)试验设计筛选显著性因素

在单因素试验基础上运用design-expert8.0.6件设计12次的pb试验，对离子液体浓度(a)、乙醇体积(b)、固液比(c)、粉碎目数(d)、超声时间(e)、离心转速(f)、超声功率(g)进行对7种化合物总提取量(y)的显著性考察，每个因素设计高、低2种水平(+1，-1)。pb试验设计及相应值见表3。

表3pb试验设计及相应值

利用design-expert8.0.6软件对pb试验结果进行分析，因素影响效果、回归模型方差分析见表4和表5。

表4pb试验因素显著性表

注:*p＜0.05，显著；**p＜0.01，极显著。下同。

由表4可知，所得的回归方程达到显著，说明该模型可用于补骨脂中7个成分提取显著性因素的分析；决定系数r²＝0.9999，r²值与ragj²值接近，说明该模型具有较好的解释力。通过回归分析获得多元一次回归方程为：y＝15.53+1.54a-0.99b-1.03c-2.67d-0.35e-0.59f-0.57g。实验回归方程系数显著性检验表见表5。结果表明，离子液体超声辅助提取补骨脂中7种成分，影响显著的因素有b(乙醇体积)、c(固液比)、d(粉碎目数)和f(离心转速)。

表5pb试验设计的因素、水平及影响结果

2.5bbd(box-behnken)设计试验结果

综合单因素实验和pb试验结果，选取乙醇体积(x1)、固液比(x2)、粉碎目数(x3)和离心转速(x4)为响应面模型的自变量，固定离子液体浓度、超声时间、超声功率分别为0.6m/l、20min和400w。以补骨脂中7种化合物总提取量为评价指标，运用design-expert8.0.6软件设计，每个因素共涉及高、低、中三个水平分别用1、0、-1表示，变量水平见表5，试验结果见表6。

表5响应面试验因素水平

表6响应面试验方案和结果

利用design-eepert8.6.0软件对试验数据进行二次多项式逐步回归拟合，建立二次多元回归方程：y＝13.82-0.59x1+0.76x2-1.41x3-0.077x4-0.61x1x2+0.51x1x3+0.25x1x4-1.18x2x3+0.30x2x4+0.020x3x4-1.00x1²-0.54x2²+1.80x3²+0.16x4²。回归模型方差分析见表7。由表7可知，回归模型具有显著性(p＜0.01)，失拟项显著(p＜0.05)，r²＝0.8283，说明模型可以解释实验数据82.83％的响应值的变化，进一步反映了试验模型拟合度较好。x1(乙醇体积)一次项和x1²二次项显著；x2(固液比)一次项和x3²二次项极其显著；x2x3交互项显著。表7中单因素的p值大小也反映了各因素对目标成分提取效率的影响程度大小。从结果来看，对目标成分提取效率影响最大的因素是粉碎目数(x1)，与pb试验筛选结果一致。

利用design-exper软件绘制响应面图，纵坐标表示综合评分，横坐标表示任意两个变量，由此反映两因素相互作用对响应值的影响。结果如图4所示，响应面图形状越陡，其相互作用越明显；响应面图走势反映了响应值随着各因素变化而变化的趋势。从响应面图陡度可以看出来，x1x2因素相互作用最强烈，x2x4因素相互作用最弱。由图4(a)乙醇体积(x1)和固液比(x2)中可以看出，随着乙醇体积的增加，对目标分析物的提取效率先增加后降低，此变化趋势与单因素结果一致；随着固液比(x2)的增加，对目标分析物的提取效率先增加后降低，此变化趋势与单因素结果一致。由图4(b)(d)和(f)结果知，随着粉碎目数(x3)的增加，样品粒径增大，其对目标分析物的提取效率呈现下降的趋势，这可能是因为过细的样品粉末在离子液体的作用下易聚集成团，阻碍了目标成分的溶出。

通过design-exper软件对回归方程进一步分析，取整数调整得出最佳工艺参数为:离子液体浓度0.6mol/l、乙醇体积浓度75％、固液比1:40、粉碎目数20目、超声时间20min、离心转速3000r/min、超声功率300w。在此最佳工艺条件下，补骨脂中7个目标成分的萃取量最大理论预测值为19.34mg/g，与实际值(18.90mg/g，n＝3)相近，说明响应面分析法所得补骨脂7个目标成分的最优工艺参数准确可靠。

表7响应面模型方差分析

2.6稳定性试验

精密称取补骨脂样品1份，按照上述最佳工艺参数制备样品和2.1.3的色谱条件在0、6、9、12、24h进样10μl，记录各峰面积值。结果表明，补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚的rsd分别为1.77％、2.19％、2.48％、4.52％、2.61％、4.49％和2.73％，表明供试品中7个化合物在24h内基本稳定。

2.7重复性试验

精密称取供试品各6份，按照上述最佳工艺参数制备样品，2.1.3的色谱条件进行hplc分析。结果表明，补骨脂中7个化合物的rsd分别为2.07％、3.88％、3.80％、3.82％、3.51％、2.10％和2.91％，表明本试验方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

称取已知补骨脂中7个化合物含量的样品6份，加入不同浓度的标准品，测定各峰面积值，代入回归方程计算，并求得补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素和补骨脂二氢黄酮甲醚平均加样回收率值86.72％、91.40％、103.71％、94.25％、99.12％、97.92％和91.89％，其rsd分别为3.11％、2.73％、1.15％、3.11％、2.74％、3.81％和1.09％。

对比例

将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末，加入萃取剂中，室温300w超声萃取20min，超声萃取结束后，3000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂为75v％乙醇，补骨脂与萃取剂按照固液比1g：40ml进行添加，补骨脂粉末目数为20目。

经检测可知：上清液中7中成分的总提取量为14.72mg/g(n＝3)。

实施例1

将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末20.00mg，加入0.8ml萃取剂中，室温300w超声萃取20min，超声萃取结束后，3000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂由离子液体与乙醇混合组成，所述离子液体为[hmim]pf6，所述乙醇为75v％乙醇，萃取剂中离子液体的浓度为0.6mol/l，补骨脂粉末目数为20目。

经检测可知：上清液中补骨脂中7个目标成分的总萃取量为18.90mg/g(n＝3)。

实施例2

将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末20.00mg，加入2.4ml萃取剂中，室温200w超声萃取10min，超声萃取结束后，5000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂由离子液体与乙醇混合组成，所述离子液体为[hmim]pf6，所述乙醇为无水乙醇(100v％乙醇)，萃取剂中离子液体的浓度为1mol/l，补骨脂粉末目数为20目。

经检测可知：上清液中补骨脂中7个目标成分的总萃取量为21.78mg/g(n＝3)。

实施例3

将干燥的补骨脂粉碎得到补骨脂粉末20.00mg，加入1ml萃取剂中，室温200w超声萃取30min，超声萃取结束后，5000r/min离心，取上清液即得；所述萃取剂由离子液体与乙醇混合组成，所述离子液体为[hmim]pf6，所述乙醇为80v％乙醇，萃取剂中离子液体的浓度为0.2mol/l，补骨脂粉末目数为20目。

经检测可知：上清液中补骨脂中7个目标成分的总萃取量为19.87mg/g(n＝3)。

由对比例和实施例1可知，补骨脂中7个目标成分的总萃取量提高了28.40％。结果表明，离子液体-超声辅助是一种有效的提取方法，结合pb和响应面试验设计筛选最佳提取工艺，对补骨脂的开发应用提供了科学依据。

结论：离子液体-超声辅助提取对中药中黄酮类、香豆素类、皂苷及萜类等化学成分的萃取效果明显优于传统溶剂的提取。本试验采用[hmim]pf6/75％乙醇溶液为萃取剂，结合超声辅助对补骨脂中黄酮和香豆素等7个化合物进行有效提取，并通过pb设计和bbd响应面试验优化了提取工艺参数。与传统提取方法对比，离子液体-超声辅助提取是一种环境友好、效率较高的方法，为补骨脂的深层次开发提供了理论依据。