一种化学品发育毒性检测方法与流程

本发明涉及化学品毒性检测领域，特别是涉及一种化学品发育毒性检测方法。
背景技术：
：目前，化学品的毒性数据多在实验动物中获得，如急性毒性试验，亚急性毒性试验，慢性毒性试验等。但是，开展动物实验存在几个不容忽视的问题：1.需要大量的财力，2.实验周期长，3.需要大量的实验动物，4.因体内影响因素较多，难以进行代谢和机制研究。出于动物保护而大力提倡“3r”原则，即减少(reduction)，优化(refinement)和替代(replacement)，无论是从科学角度还是从经济角度，毒理学替代法对外源性化学物的危害评价及管理都有非常重要的意义。据市场调研数据估计，接下来的15年中将会有30000种化学品需要进行安全性测试，根据现有的测试指南，将牺牲7百万只动物，其中约64％是用于化学品的生殖和发育毒性评价；每检测2000种新化合物的发育毒性，约需耗资6亿欧元。而新化合物的数目以每年1000种递增，其中90％以上缺乏毒性数据。在这一过程中，无论是动物的使用情况，还是测试过程中人力、物力、财力的消耗，如此巨大的数字，让人触目惊心。我国幅员辽阔，人口众多，因此在面临评价化合物暴露导致的健康问题时情况将比其他国家更为复杂。并且由于各地化合物种类、比例不同，在开展流行病学调查的时候重点也不相同，加上工业快速发展、城市化进程加快的同时也带来了新型污染物及其快速扩散的问题。毒理学替代法的应用与推广同样适用于我国的国情。受医学伦理学的约束，目前，国际上的安全性评价测试方法仍以动物、细胞为主，除了新开发的、安全性有前临床实验结果保障的、具有极大治疗潜能的药物外，几乎没有化学物质可获得“人体试验”的允许。因此，从毒理学替代法的角度出发，如何建立可准确反映人类生物学特征的安全性评价体系和方法，对保障人类的健康具有非常重大的意义。技术实现要素：鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种化学品发育毒性检测方法。为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种化学品发育毒性检测方法，所述检测方法至少包括以下步骤：(1)分别在有待测化学品和无待测化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞；(2)分别测定在有待测化学品和无待测化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量；得到与无待测化学品的培养条件相比，在有待测化学品培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量变化，即id；(3)根据id的值，结合fisher判别函数方程，判断待测化学品的发育毒性。本发明第二方面提供一种化学品发育毒性检测模型，所述化学品发育毒性检测模型包括：i)-1.104+0.686×log10id0+0.641×log10id20；ii)-12.023+36.626×log10id0+29.189×log10id20；iii)-1.252+5.331×log10id0+2.537×log10id20；若i)＞ii)且i)＞iii)，则判断化合物无发育毒性；若ii)＞i)且ii)＞iii)，则判断化合物弱发育毒性；若iii)＞i)且iii)＞ii)，则判断化合物强发育毒性；其中，其中，id20为待测化学品浓度为ic20时对应的myl4的表达量变化，id0为待测化学品浓度为ic0时对应的myl4的表达量变化；ic20为待测化学品对20％人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度；ic0＝ic20/100。本发明第三方面提供一种化学品发育毒性检测模型的建立方法，包括以下步骤：(1)分别在含有各建模用化学品和无所述建模用化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞，所述建模用化学品的发育毒性分类已知；(2)分别测定含有各建模用化学品和无所述建模用化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量；得到与无所述建模用化学品的培养条件相比，在有各建模用化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量变化，即id；(3)根据id的值，构建典则判别函数方程；(4)根据所述典则判别函数方程，获得fisher判别函数方程。本发明第四方面提供一种化学品发育毒性检测装置，能够实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明第五方面提供一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该程序被处理器执行时实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明第六方面提供一种计算机处理设备，包括处理器及前述的计算机可读存储介质，所述处理器执行所述计算机可读存储介质上的计算机程序，能够实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明第七方面提供一种电子终端，包括：处理器、存储器、及通信器；所述存储器用于存储计算机程序，所述通信器用于与外部设备进行通信连接，所述处理器用于执行所述存储器存储的计算机程序，以使所述终端执行前述化学品发育毒性检测模型。如上所述，本发明的化学品发育毒性检测方法，具有以下有益效果：本发明首次利用人胚胎干细胞细胞建立发育毒性测试模型，可在较短的时间内通过体外试验获取化合物的发育毒性信息；本发明首次引入了分子指标myl4作为发育毒性测试指标，并进一步验证了这一指标的有效性和可靠性。本发明首次通过数学建模的方法表征化学品是否具有针对人的发育毒性信息；本发明可快速检测并提示某化学品是否具有针对人的发育毒性信息。附图说明图1显示为人胚胎干细胞的培养及诱导分化。hes和其诱导分化的心肌细胞鉴定。(a)光镜下的未分化状态的hes；(b)hes中高表达的多能性指标sox-2的免疫荧光染色；(c)hes诱导分化的心肌细胞；(d)hes诱导分化的心肌细胞中高表达的心脏特异性指标肌钙蛋白ctnt的免疫荧光染色。标尺＝100μm。图2显示为实施例8中线性判别函数对化合物发育毒性识别能力的决策边界。n表示无发育毒性化合物，w表示弱发育毒性化合物，s表示强发育毒性化合物。具体实施方式本发明提供的化学品发育毒性检测方法，至少包括以下步骤：(1)分别在有待测化学品和无待测化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞；(2)分别测定在有待测化学品和无待测化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量；得到与无待测化学品的培养条件相比，在有待测化学品培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量变化，即id；(3)根据id的值，结合fisher判别函数方程，判断待测化学品的发育毒性。发育毒性(developmentaltoxicity)是指出生前经父体和(或)母体接触外源性理化因素引起的在子代到达成体之前内出现的有害作用，包括：结构畸形、生长迟缓、功能障碍及死亡。在一种实施方式中，所述发育毒性选自胚胎毒性。胚胎毒性(embryotoxicity)指外源性理化因素造成的孕体在着床前后直到器官形成期结束的所有的毒性，具体表现为胚胎期染毒而出现器官畸形、生长迟缓、着床数减少等。本发明中利用胚胎干细胞分化为心肌细胞，模拟胚胎早期心脏的发育，又因心脏结构和功能正常与否，不仅可体现“畸形”，还可间接体现“胚胎死亡”风险。在一种实施方式中，所述无待测化学品的培养条件是指有待测化学品的培养条件的空白对照。在一种实施方式中，步骤(1)中，分别在待测化学品浓度为ic20、待测化学品浓度为ic0及无待测化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞，其中，ic20为待测化学品对20％人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度；ic0＝ic20/100。在一种实施方式中，所述ic20的确定方法为：在不同浓度的待测化学品的培养条件下，培养未分化的人胚胎干细胞，确定待测化学品对20％的未分化的人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度，即ic20。在一种实施方式中，步骤(2)中，所述id包括id20和id0，其中，id20为待测化学品浓度为ic20时对应的myl4的表达量变化，id0为待测化学品浓度为ic0时对应的myl4的表达量变化。所述化学品选自单质、化合物或混合物。在一种实施方式中，所述待测化学品的发育毒性分类包括无发育毒性，弱发育毒性，强发育毒性。在一种实施方式中，所述fisher判别函数方程为：i)-1.104+0.686×log10id0+0.641×log10id20；ii)-12.023+36.626×log10id0+29.189×log10id20；iii)-1.252+5.331×log10id0+2.537×log10id20；在一种实施方式中，所述待测化学品的发育毒性的判断方法为：若i)＞ii)且i)＞iii)，则判断化合物无发育毒性；若ii)＞i)且ii)＞iii)，则判断化合物弱发育毒性；若iii)＞i)且iii)＞ii)，则判断化合物强发育毒性。本发明提供的化学品发育毒性检测模型，所述化学品发育毒性检测模型包括：i)-1.104+0.686×log10id0+0.641×log10id20；ii)-12.023+36.626×log10id0+29.189×log10id20；iii)-1.252+5.331×log10id0+2.537×log10id20；若i)＞ii)且i)＞iii)，则判断化合物无发育毒性；若ii)＞i)且ii)＞iii)，则判断化合物弱发育毒性；若iii)＞i)且iii)＞ii)，则判断化合物强发育毒性；其中，id20为待测化学品浓度为ic20时对应的myl4的表达量变化，id0为待测化学品浓度为ic0时对应的myl4的表达量变化；ic20为待测化学品对20％人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度；ic0＝ic20/100。本发明提供的化学品发育毒性检测模型的建立方法，包括以下步骤：(1)分别在含有各建模用化学品和无所述建模用化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞，所述建模用化学品的发育毒性分类已知；(2)分别测定含有各建模用化学品和无所述建模用化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量；得到与无所述建模用化学品的培养条件相比，在有各建模用化学品的培养条件下，心肌细胞中的myl4的表达量变化，即id；(3)根据id的值，构建典则判别函数方程；(4)根据所述典则判别函数方程，获得fisher判别函数方程。在一种实施方式中，所述无所述建模用化学品的培养条件为含有各建模用化学品的培养条件的空白对照。在一种实施方式中，步骤(1)中，分别在建模用化学品浓度为ic20、建模用化学品浓度为ic0及无建模用化学品的培养条件下，诱导未分化的人胚胎干细胞分化为心肌细胞，其中，ic20为建模用化学品对20％人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度；ic0＝ic20/100。所述ic20的确定方法为：在不同浓度的建模用化学品的培养条件下，培养未分化的人胚胎干细胞，确定建模用化学品对20％的未分化的人胚胎干细胞的细胞活力抑制时的浓度，即ic20。在一种实施方式中，步骤(2)中，所述id包括id20和id0，其中，id20为建模用化学品浓度为ic20时对应的myl4的表达量变化，id0为建模用化学品浓度为ic0时对应的myl4的表达量变化。在一种实施方式中，所述建模用化学品选自青霉素g、6-氨基烟酰胺、羟基脲、5-氟尿嘧啶、糖精钠、金雀黄素、阿司匹林、全反式维甲酸、地塞米松、地高辛、丙咪嗪、多柔比星、氯化锂和咖啡因中的一种或多种。本发明提供的化学品发育毒性检测装置，能够实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明提供的计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该程序被处理器执行时实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明提供的计算机处理设备，包括处理器及前述的计算机可读存储介质，所述处理器执行所述计算机可读存储介质上的计算机程序，能够实现前述化学品发育毒性检测模型。本发明提供的电子终端，包括：处理器、存储器、及通信器；所述存储器用于存储计算机程序，所述通信器用于与外部设备进行通信连接，所述处理器用于执行所述存储器存储的计算机程序，以使所述终端执行前述化学品发育毒性检测模型。以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本
技术领域：
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
技术领域：
的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
技术领域：
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组dna技术及相关领域的常规技术。本发明所用细胞材料和试剂说明如下：1.人胚胎干细胞(humanembryonicstemcell,hes)本发明中所使用的hes细胞系h1(wa01)购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。2.培养液及试剂本发明中所使用的培养液为dmem/f12(dubecco’smodifiedeagle’smedium)，kodmem(knockoutdubecco’smodifiedeagle’smedium)，这些培养基的配方是本领域公知的，不仅在普通教科书和试验手册中有详细描述，而且还可直接以成品的形式从公司商购获得(如美国thermofisher公司等)。作为补充物的成分是任何维持或促进细胞生长的成分，例如，它们可包括但不限于：氨基酸、维生素、蛋白、微量元素、糖、脂类等等。用于hes培养和诱导分化的细胞因子bmp-4重组人蛋白，activina重组人蛋白和bfgf重组人蛋白均购自美国thermofisher公司。本发明中所用细胞培养液如下：1)细胞分离液a：10mg/mliv型胶原酶+0.01％胰酶。2)培养液#1：用于hes的常规培养，成分如下。83％dmem/f12培养液+10％胎牛血清(fetalbovineserum,fbs)+1％neaa+1％l-谷氨酰胺+50ng/ml碱性成纤维生长因子bfgf。3)培养液#2：用于hes的第一阶段诱导分化，成分如下。87％dmem培养基+10％fbs+2％b27补充剂+1％非必须氨基酸+40ng/ml激活素a+250μg/ml抗坏血酸。4)培养液#3：用于hes的第二阶段诱导分化，成分如下。87％rpmi1640培养基+10％fbs+2％b27补充剂+1％非必须氨基酸+50ng/ml人胰岛素+60ng/ml骨形态蛋白4。5)培养液#4：用于hes的第三阶段诱导分化，成分如下。82％rpmi1640培养基+15％fbs+2％b27补充剂+1％非必须氨基酸+10ng/ml人胰岛素+20ng/ml骨形态蛋白4。实施例1人胚胎干细胞的培养hes将以复苏后正常生长的状态提供，待细胞密度达到70％以上时，将细胞以团块的形式接种至matrigel预包被(自备，1:20稀释)的培养皿中。(1)hes的传代：使用细胞分离液a对细胞进行传代。hes接种后第4-5天，干细胞的增殖达到一定程度，培养皿中可观察到直径较大、密度较高的克隆形成(70％左右)，此时可进行传代。吸出拟传代的hes培养基，用d-pbs清洗2遍。向培养皿中加入2ml细胞分离液a，置于37℃，5％co2培养箱中孵育，20-25分钟左右取出，可观察到克隆结构明显松散，克隆外缘出现卷曲时，加入6ml培养液#1终止消化，将所获得的细胞团块移液至离心管中，800转/min，室温离心5分钟。吸除上清液，根据细胞量以1:4-1:8的比例传代至预包被matrigel的培养皿中，用适量hes培养液进行培养。实施例2人胚胎干细胞多能性的鉴定本实施例中人胚胎干细胞多能性的鉴定利用快速碱性磷酸酶(akp)染色法实现(试剂盒需另行购买)。(1)配置5ml100mmol/l的tris·hcl，调ph至8.2，按照试剂盒说明书，向其中加入染色试剂后混匀备用；吸除es细胞培养皿中的培养液，用高温高压灭菌的pbs清洗，5分钟/次，共3次，以去除培养液对染色效果的影响；(3)将适量染色试剂加入培养皿中，避光于37℃培养箱中孵育20分钟；(4)用pbs清洗后，加入4％的多聚甲醛，2分钟后用tbst清洗，即可上镜观察。实施例3人胚胎干细胞诱导分化为心肌细胞经细胞分离液a传代的细胞生长至70％时，按每个10cm皿使用10ml培养液#2的量，置于37℃，5％co2培养箱中继续培养细胞。更换培养液#2时记录为分化第1天。在分化第3天，按每个10cm皿使用10ml培养液#3的量继续培养细胞。在分化第6天，按每个10cm皿使用10ml培养液#4的量继续培养细胞，并分别在分化第9天、第11天、第15天分别更换一次培养液。分化第15天至第20天的细胞用于化合物发育毒性的测试。实施例4人胚胎干细胞来源的心肌细胞的鉴定本实施例中所使用的细胞来源于实施例3。(1)细胞培养完成后，加入4％多聚甲醛，室温放置20分钟，pbs清洗3次，每次5分钟。(2)清洗完成后加入鉴定用抗体(fitc标记的荧光抗体myl4)，37℃孵育2小时后，用pbs清洗3次，每次5分钟，最后置于荧光显微镜下观察。绿色荧光标记的细胞即为心肌细胞。实施例5.发育毒性参照化合物的选择本实施例的发育毒性参照化合物的选择参考了美国食品药品监督管理局发布的妊娠期用药安全性分级。妊娠期用药安全性分级为5类，其中a类和b类对应实施例5中发育毒性等级为无，c类和d类对应实施例5中发育毒性等级为弱，x类对应实施例5中发育毒性等级为弱。各化合物随机分为建模组和验证组。所述建模组用于构建典则判别函数方程，所述验证组用于内部验证典则判别函数的稳定性。具体信息见表1：表1实施例6发育毒性参照化合物对hes的细胞毒性的检测(1)未分化的hes细胞接种到96孔板的各孔中，每孔1-5个克隆，分别加入不同浓度的各发育毒性参照化合物(见实施例5)，同时设置阴性对照组，各孔分别设置5个复孔。(2)培养第3天，用pbs清洗细胞后，加入不含血清和参照化合物的培养液，并按1：10比例加入alamarblue试剂，在37℃，5％co2培养箱中孵育2h。(3)取出96孔板后，置于酶标仪上用570nm/600nm双波长测量各孔的吸光度。根据alamarblue试剂说明书计算各孔中细胞活力。(4)吸出96孔板中的培养液，用pbs清洗3次，每次5分钟。(5)向每个孔中加入80μlripa蛋白裂解液，置于冰上裂解10分钟，并利用bca法蛋白测试试剂盒测定各孔中的蛋白含量。(6)根据蛋白含量校正细胞活力，并绘制剂量-反应曲线。(7)选择各参照化合物的20％细胞活力抑制剂量(ic20)作为后续hes分化为心肌细胞过程中的参照化合物剂量。实施例7发育毒性参照化合物作用于hes来源的心肌细胞时myl4指标的检测(1)hes体外诱导分化为心肌细胞的方法参见实施例3。在培养过程中分别将分化中的细胞暴露于等同于实施例7中化合物ic20浓度的毒性测试培养液中。(2)在分化第20天，用37℃预热的胰酶(0.25％，含4u/mldna酶)消化细胞5min，用含血清培养液终止消化后，离心机设置1000转/分的速度，离心5分钟，弃上清。(3)各管中分别加入1ml2％多聚甲醛固定液，室温固定30min后，用pbs清洗3次，每次5分钟。(4)用含0.2％皂甙的pbs破膜10min,后用pbs清洗3次，每次5分钟。(5)用含0.2％皂甙，1％bsa和10％山羊血清的封闭液孵育封闭，以减少非特异性结合。(6)用封闭液按1:400的比例稀释fitc标记的荧光抗体myl4，冰上避光孵育2小时。(7)用预冷的pbs清洗3次，每次5分钟，离心后弃上清。(8)用50μl预冷的pbs重悬细胞后上流式细胞仪检测，获取等同于实施例7中化合物ic20浓度的化合物作用下myl4标记的细胞比例，并与对照组相比，获得化合物对心肌细胞分化过程的影响的相对比值，即反映分化抑制程度指标id(inhibitionofdifferentiation)。检测所得id0和id20时myl4的表达水平如表2：表2化合物id0id20pg1.041.026am0.961.49hu1.290.95as1.942.85ra1.210.43dex0.707.55dg1.014.86im2.222.67dox0.871.99sa0.961.05fu1.510.74ge1.081.23lc1.352.12cf1.654.78实施例8基于发育毒性参照化合物和myl4检测指标的数理模型的建立和验证本实施例中建立数理模型所用数据来源于实施例7。分类依据参见实施例5。通过线性判别分析对三类发育毒性的化合物(无发育毒性，弱发育毒性，强发育毒性)进行分类，并构建3个fisher判别函数方程。为了实现判别结果的可视化，将所获得的线性判别函数方程以2个典则判别函数的形式展示，分别作为横纵坐标，绘制散点图和决策边界(见附图2)。基于线性判别分析构建的发育毒性预测模型的分类结果用模型自识别法进行验证，采用留一法交叉验证(loocv)对2个典则判别函数的稳定性进行验证。本实施例中的数学建模和图表绘制在开源软件r语言环境下完成，通过mass程序包的lda算法实现。完整的程序代码见附录。本实施例所构建的线性判别函数方程典则判别函数ld形式为：ld1＝1.061×log10id0+1.334×log10id20ld2＝0.838×log10id0–0.221×log10id20判别函数的特征值(eigenvalue)用于反映所建立函数的区别能力，其值越大，判别函数的区别力越强。上述ld1和ld2的特征值分别为5.787和0.15，提示该判别函数具备区别3类受试化合物的能力；ld1和ld2典型相关系数(canonicalcorrelation)分别为0.923和0.121，提示判别函数ld1的线性相关程度较高，ld2的线性相关程度较低。以2个典则判别函数式的值分别作为横纵坐标，绘制散点图和决策边界，见附图2。可见，ld1主要贡献于无发育毒性、弱发育毒性和强发育毒性的化合物的区分，特征值高，区别力强；ld2主要贡献于无发育毒性化合物和有发育毒性化合物的区分，特征值较低，区别力较弱，其原因为无发育毒性化合物数目远少于有发育毒性化合物数目。wilks'lambda值是用于检验所建立的判别模型是否显著的指标，反映组内平方和与总平方和之比，其值介于0和1之间；当wilks'lambda值为1时，表示所有组别的均值相等，当wilks'lambda值为0时，表示组别间的均值不相等。本实施例中构建的ld1和ld2的wilks'lambda值分别为0.145和0.985，p值均小于0.05，提示所构建的典则判别函数式对不同的3组化合物有贡献，可有效区分无发育毒性、弱发育毒性和强发育毒性的化合物效应。基于线性判别分析构建的发育毒性预测数学模型的分类结果首先用模型自识别法进行验证，采用loocv法对2个典则判别函数的稳定性进行验证，结果显示，所建立的判别函数对无发育毒性、弱发育毒性和强发育毒性的化合物进行区别的平均错误率为14.29％，低于20％的标准，即可认为所构建的数理模型稳定性优秀。为便于使用，本实施例所构建的ld函数以fisher判别函数方程陈列并应用：i)-1.104+0.686×log10id0+0.641×log10id20；ii)-12.023+36.626×log10id0+29.189×log10id20；iii)-1.252+5.331×log10id0+2.537×log10id20。对化合物发育毒性的判断标准为：若i)＞ii)且i)＞iii)，则判断化合物无发育毒性；若ii)＞i)且ii)＞iii)，则判断化合物弱发育毒性；若iii)＞i)且iii)＞ii)，则判断化合物强发育毒性。数理模型建立后，利用验证组的化合物对模型的总准确性进行分析。首先通过本实施例中建立的fisher判别函数方程计算各化合物的数据，结果如表2：表3分组iiiiii预测分类实际分类pg建模组-1.09-11.18-1.14无无6am建模组-1.01-7.61-0.90强强hu建模组-1.04-8.64-0.72强强as建模组-0.6211.791.44弱弱ra建模组-1.28-19.73-1.75无强dex建模组-0.657.830.14弱弱dg建模组-0.668.140.51弱弱im建模组-0.5913.141.68弱弱dox建模组-0.95-5.53-0.82强强sa建模组-1.10-11.94-1.28无无fu验证组-1.07-9.28-0.63强强ge建模组-1.02-8.17-0.85强强lc验证组-0.812.280.27弱弱cf验证组-0.5215.771.63弱弱基于本实施例所构建的fisher判别函数，分别计算参照化合物的三个函数值，并比较预测分类结果和实际分类结果的准确性，结果如表4：表4在上述实施例中，实施例1至实施例7为化合物测试时所需实验步骤。而实施例8为获取发育毒性预测方程所需，实际操作和使用中无需重复，直接使用发育毒性预测方程计算即可。以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。当前第1页12