一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法及试剂盒与流程

文档序号:19152683发布日期:2019-11-16 00:16阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争elisa检测方法,其特征在于,以保藏编号为cctccno:c201966的抗传染性法氏囊病毒vp2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1h6单克隆抗体为竞争抗体。

2.根据权利要求1所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争elisa检测方法,其特征在于:

以rvp2重组vp2蛋白为包被抗原,其制备方法为:将ibdvvp2基因优化设计,根据genbank已登录的ibdvvp2序列eu417824.1和大肠杆菌密码子的偏爱性优化设计vp2基因,将vp2基因的atg去掉,全基因合成,定向克隆入原核表达载体pet-28a(+)中,构建原核表达质粒pet28+vp2,转化大肠杆菌rosetta(de3);经iptg诱导后,离心收集细菌,然后按照histraphp说明书纯化rvp2。

3.根据权利要求2所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争elisa检测方法,其特征在于:该检测方法的具体步骤为,将纯化的rvp2重组蛋白用ph9.6的碳酸盐缓冲液稀释至5μg/l,加入到酶标板,每孔100μl,4℃包被过夜,用含10%fbs的pbst封闭液满孔封闭,37℃,2h,pbst洗涤3次,每次3min,拍干;加入1:500稀释的临床样本50μl/孔96份,同时加入hrp-vp2单抗50μl/孔,hrp-vp2单抗1:20000稀释,37℃,1h,pbst洗涤5次,每次3min,拍干;加入tmb显色剂100μl/孔,暗盒显色;2mh2so4终止,测a450值,判定结果。判定标准:pi=100-样品od值/阴性平均od值x100,当pi>50时,判为阳性;当pi≤50时,判为阴性。

4.权利要求1-3之一所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争elisa检测方法的应用。

5.用权利要求1-3之一所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争elisa检测方法构建的试剂盒。


技术总结
本发明涉及一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法及试剂盒,属于生物技术领域。将IBDV VP2基因优化设计,构建原核表达质粒pET28+VP2,转化大肠杆菌,重组VP2蛋白的分子量约为50kDa。用纯化的rVP2蛋白作为筛选抗原,筛选IBDV VP2单抗。用rVP2蛋白作为包被抗原,HRP‑标记的其中一株VP2单抗为竞争抗体,建立了IBDV抗体竞争ELISA检测方法(rVP2‑cELISA)。与现有的商品化的IBDV抗体检测试剂盒相比,本发明传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法,耗时更短、特异性更好、检测样品范围更广、成本更低廉和生产更方便等优势,具有巨大的生产应用价值。

技术研发人员:欧阳伟;王永山;王晓丽;夏兴霞;钱晶;诸玉梅;王晶宇;马孙婷
受保护的技术使用者:江苏省农业科学院
技术研发日:2019.09.09
技术公布日:2019.11.15
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1