一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法与流程

本发明属于质量检测技术领域，具体涉及一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法。

背景技术：

过氧化苯甲酰作为面粉添加剂，超过一定剂量，对人的皮肤、上呼吸道有确切的刺激性和致敏性。目前对面粉中过氧化苯甲酰含量的检测方法，主要有化学定性法、氧化还原滴定法、分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法等。化学定性法在大量的酸性介质中灵敏度低，氧化还原滴定法存在的主要缺点是分析结果重现性差，精确度和准确度低，而且检出限很高，所以只适用于要求不高的高含量组分测定。分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法等虽然准确度有所提高，但由于前处理繁琐,仪器本身价格昂贵，操作难度高等原因，不适合于现今日益增多的快速检测需求及现场结果判断目标。

申请号201110084232.6公开了一种面粉违禁添加剂过氧化苯甲酰快速检测试剂盒，该试剂盒由反应试剂、显色剂、阳性对照试剂储备液和标准比色卡组成，简化了操作过程，缩短了分析时间。但该试剂盒的试剂均以液体形式储存，试剂溶液配置完成后的存储阶段中可能由于存在少量还原剂及具有还原性的物质而氧化变质，对实际使用中的实验结果造成影响，使用效率大大降低，增加了误检概率。另外，该方法采用标准比色卡判读结果，而比色卡的制作选用的为标准bpo溶液，该标准溶液不存在提取效率低的情况但实际检测样品却无法忽略此问题，这就导致了与实际样品测量结果差异较大，精确度和准确度均无法满足需要。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法，该方法通过反应试剂的优化以及对配制过程的控制，在除去干扰物质的同时提高了反应灵敏度，使检测结果更加准确，并通过目视定性判读和分光光度计半定量判读相结合的方式，保证了结果的准确度和精确度。

本发明是通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法，包括如下步骤：

（1）前处理：将水蒸煮10-20min，作为配制用水备用；

（2）提取：取待测面粉加入试剂a，振摇，静置，过滤，收集滤液；

（3）反应：取收集的滤液加入试剂b粉末，振摇，静置，再加入试剂c，振摇；

（4）检测：立即观察颜色并用分光光度计法进行定量；

其中，所述试剂a为乙醇与配制用水的混合溶液；

所述试剂b为固体硫酸亚铁；

所述试剂c为硫氰酸钾溶液。

因nano2或其他还原剂及具有还原性的物质可能存在于样品本身、提取溶剂中、配置试剂使用溶剂（含水）中等，由于过氧化苯甲酰bpo具有氧化性，可使亚硝酸根氧化为硝酸根，no^2-与scn^-生成硫氰亚硝酰noscn，会显红色反应，干扰反应结果，同时no^2-与bpo反应，会消耗一部分bpo，从而使检测结果偏低。另外，溶液中如存在其他氧化剂或氧化性物质则会使fe²⁺氧化为fe³⁺，干扰实验结果。故在反应前，应进行多步检测确认干扰物质的存在及去除干扰物质，抗干扰实验步骤如下：

将配制用水（如去离子水、蒸馏水或纯净水）蒸煮10-20分钟，去除氧气及二氧化碳，备用；

将蒸煮后的配制用水分为3等份：1份加入过量硫酸亚铁粉末，均匀搅动1分钟无其他颜色变化后加入硫氰酸钾溶液，观察颜色变化，检测是否有碳酸根离子；1份加入少量低浓度高锰酸钾溶液，均匀搅动1分钟后观察颜色变化，分光光度计读数差值辅助判读，去除亚硝酸根；若前两份均无颜色变化，则第3份作为配制用水进行配置使用，密封保存，备用。

因无水乙醇有一定安全风险且消耗量比较大，对于使用方（自行采购）或试剂盒生产方（额外配送）均有较大压力，不利于现实使用，因此，本发明采用乙醇与水的混合溶液作为作为提取溶剂，即有利于试剂盒配置后相应试剂的储存（不易挥发），又利于环境保护。

另外，本发明对乙醇与水的体积比进行了优化，以过氧化苯甲酰的回收率为指标，比较了乙醇与水不同体积比的回收率，结果显示，乙醇：水=2：8的回收率为75%，乙醇：水=8：2的回收率为78%，乙醇：水=5：5的回收率为76%，因此，作为本发明优选的一个技术方案，优选乙醇：水=8：2的混合溶液作为提取剂。

作为反应试剂的试剂b，本发明选择二价铁试剂，如氯化亚铁（fecl2）、硫酸亚铁（feso4）等，试剂存储形式有液体形式和固体形式。本发明进一步对二价铁试剂的选择进行了优化，以回收率为指标，结果如图1所示，由结果可知，fecl2、feso4以液体形式配制，则在存储过程中不稳定，回收率逐渐降低。另外固体fecl2也很不稳定，极易吸潮和氧化，不易保存，而固体feso4性质稳定，回收率几乎无太大变化，便于运输和贮存。因此，本发明优选固体硫酸亚铁，并加入干燥剂，用铝箔袋密封保存，作为试剂b。

作为优选，本发明试剂c的配制方法为：将硫氰酸钾溶于配制用水中，超声10-20min，

即得硫氰酸钾溶液，所述硫氰酸钾溶液的质量浓度为1%-2%，优选质量浓度为1%。

作为优选，步骤（2）中，所述待测面粉与试剂a的质量体积比为1：3-7。

作为优选，步骤（3）中，所述滤液与试剂b粉末的质量体积比为1ml：5-10g。

作为优选，步骤（4）中，所述分光光度计法的检测波长为620nm。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

（1）本发明通过反应试剂的优化以及对配制过程的控制，在除去干扰物质的同时提高了反应灵敏度，使检测结果更加准确；

（2）本发明通过目视定性判读和分光光度计半定量判读相结合的方式，保证了结果的准确性，通过风光光度计与标准曲线的结合，得出的结果误差不超过5%，可以满足一般实验室需求；

（3）本方法可以快速的定量测试面粉中bpo的含量，即适合现场检测也适合实验室快速定量出具结果。

附图说明

图1为氯化亚铁（fecl2）和硫酸亚铁（feso4）固体及液体形式的回收率考察结果图；

图2为标准曲线图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

定性结果判定：

阴性(-)：溶液未变色或无明显红色产生，表示样品中不含过氧化苯甲酰化学成分或其浓度低于检出限。

阳性(+)：溶液变为明显的红色或血红色，表示样品中过氧化苯甲酰化学成分浓度高于检出限。

定量结果判定：

标准溶液的配制：取过氧化苯甲酰对照品适量，梯度稀释，得到的标准品溶液；

标准曲线的绘制：将标准品溶液在620nm波长下测定吸光度，结果如图2所示，绘制的标准曲线为y=-0.3355x²+37.37x+0.2148，检测限为5ppm。

计算：根据检测到的待测面粉和标准品的od差值计算待测面粉中过氧化苯甲酰含量。

实施例1：

一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法，包括如下步骤：

（1）前处理：将去离子水蒸煮10分钟；将蒸煮后的去离子水分为3等份：1份加入过量硫酸亚铁粉末，均匀搅动1分钟无其他颜色变化后加入硫氰酸钾溶液，观察颜色变化，检测是否有碳酸根离子；1份加入少量低浓度高锰酸钾溶液，均匀搅动1分钟后观察颜色变化，分光光度计读数差值辅助判读，去除亚硝酸根；若前两份均无颜色变化，则已排除了干扰，将第3份作为配制用水进行配置使用，密封保存，备用；

（2）提取：取待测面粉1加入乙醇和配制用水体积比为8：2的混合溶液，振摇1min，静置3min，取上清液过滤，收集滤液；

（3）反应：向上述收集的滤液加入固体硫酸亚铁粉末，振摇2min，静置3min；再加入质量浓度为1%的硫氰酸钾溶液，振摇5s；所述硫氰酸钾溶液的配制过程为：称取10克硫氰酸钾溶于200ml配制用水，倒入容量瓶中稀释至1l，超声10min后即得到1%硫氰酸钾溶液；

（4）检测：立即观察颜色，并将上述反应后的试液倒入比色皿中，用分光光度计在波长为620nm下观察od值变化情况。

定性结果：本实施例溶液变为明显的红色或血红色，表示样品中过氧化苯甲酰化学成分浓度高于检出限。

定量结果：本实施例测得的样品溶液的od值为1.076（对照值0.069）根据标准曲线公式计算得到样品中过氧化苯甲酰含量为37.5ppm。

实施例2：

一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法，包括如下步骤：

（1）前处理：同实施例1；

（2）提取：取待测面粉2加入乙醇和配制用水体积比为5：5的混合溶液，振摇2min，静置3min，取上清液过滤，收集滤液；

（3）反应：向上述收集的滤液加入固体硫酸亚铁粉末，振摇3min，静置3min；再加入质量浓度为1%的硫氰酸钾溶液，振摇5s；所述硫氰酸钾溶液的配制过程为：称取10克硫氰酸钾溶于200ml配制用水，倒入容量瓶中稀释至1l，超声10min后即得到1%硫氰酸钾溶液；

（4）检测：立即观察颜色，并将上述反应后的试液倒入比色皿中，用分光光度计在波长为620nm下观察od值变化情况。

定性结果：本实施例溶液未变色或无明显红色产生，表示样品中不含过氧化苯甲酰化学成分或其浓度低于检出限。

定量结果：本实施例测得的样品溶液的od值为0.069（对照值0.069）因此，本实施例样品不含有超过检测限的过氧化苯甲酰。

对比例1：

一种面粉中过氧化苯甲酰的检测方法，包括如下步骤：

（1）提取：取与同实施例1相同的待测面粉1加入乙醇和水体积比为8：2的混合溶液，振摇1min，静置3min，取上清液过滤，收集滤液；

（2）反应：向上述收集的滤液加入固体硫酸亚铁粉末，振摇2min，静置3min；再加入质量浓度为1%的硫氰酸钾溶液，振摇5s；所述硫氰酸钾溶液的配制过程为：称取10克硫氰酸钾溶于200ml水，倒入容量瓶中稀释至1l，超声10min后即得到1%硫氰酸钾溶液；

（3）检测：立即观察颜色，并将上述反应后的试液倒入比色皿中，用分光光度计在波长为620nm下观察od值变化情况。

定性结果：本实施例溶液变为明显的红色或血红色，表示样品中过氧化苯甲酰化学成分浓度高于检出限。

定量结果：本实施例测得的样品溶液的od值为0.318（对照值0.069）根据标准曲线公式计算得到样品中过氧化苯甲酰含量为9.499ppm。

由实施例和对比例1结果可知，对比例1的检测结果明显偏低，实施例1的检测结果更准确，更接近实际值。本方法对于bpo的检测主要为通过bpo的强氧化性而实现，但由于非对目标物质本身进行检测，有一定的产率损失而导致误差，且溶剂载体（如配置用水等）存在具有氧化性或氧化性物质等诸多情况，可能对反应造成影响而导致结果偏低。因此，本方法通过对每一步反应进行控制，除去干扰物质的同时提高反应灵敏度，可以测量出更接近实际含量的检测结果。