一种静脉血中LEP/APN比值的测得方法与流程

本发明属于医学临床检验技术领域，具体涉及一种静脉血中lep/apn比值的测得方法。本发明提供的方法，仅为了获得中间结果lep/apn比值，不是用于疾病的诊断。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholicfattyliverdisease，nafld）已被确定为这种原发性肝癌的危险因素之一。由于缺乏统一的监测管理机制，有些nafld患者经常在晚期才被诊断为肝细胞癌。因而早期预防和早期治疗，降低nafld的发病率，是世界各国基础医学和临床医学面临的新挑战。中国非酒精性脂肪肝的综合分析发现，北京、上海、香港等城市化地区nafld的患病率较高分别为39.5%、43.5%和42.0%，台湾老年人（平均年龄70.3岁）其nalfd的患病率高达54.4%。多数nafld起病隐匿，早期常缺乏特异的临床表现及典型症状。

目前研究表明nafld发病机制与胰岛素抵抗存在相关性。胰岛素抵抗和过度肥胖使新增加的脂质涌入肝脏，导致肝脏tg的积累，引起脂肪肝。脂质代谢紊乱状态下，肝内脂肪的动态平衡受到破坏。常见生化指标中高密度脂蛋白胆固醇（high-densitylipoproteincholesterol，hdl-c）具有降脂保护性作用，其含量在bmi>25时显著低于正常水平。随着bmi的增高，体脂肪增加，nafld患者血游离脂肪酸（freefattyacid，ffa）和肝合成甘油三酯增加，肝脏合成tg增加，同时清除tg能力均减低；当进入肝脏的ffa和肝脏自身合成的ffa超过肝脏的氧化能力时，肝脏合成的内源性tg不能进行代谢，从而导致脂质在肝细胞内的蓄积。血ffa增加反向抑制胰岛素信号传递，促进nafld发生与发展。

脂肪因子瘦素（leptin,lep）与脂联素（adiponectin，apn）在非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholicfattyliverdisease，nafld）发生、发展过程中起着非常重要的作用，是目前新型的nafld的分子标志物。lep是一种由脂肪组织分泌的蛋白质类激素。其前体由167个氨基酸残基组成，n末端有21个氨基酸残基信号肽，该前体的信号肽在血液中被切掉而成为146氨基酸，分子量为16kda。lep具有广泛的生物学效应，其中较重要的是与下丘脑的lep受体结合后，发挥抑制食欲，增加能量消耗，抑制脂肪合成的作用，从而达到维持机体代谢平衡的目的。apn是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，由244个氨基酸组成，因其相对分子量为30kda，又被称作acrp30。apn作为一种胰岛素超敏化激素，其水平可随着脂肪含量的增大而减少。且apn具有一定的抗炎作用，因而对肝细胞损伤起到一定的保护作用。

lep是由脂肪细胞合成的分泌型蛋白，因其在肝脏内通过抑制肝细胞的磷酸烯醇丙酮酸羧酶（phosphoenolpyruvatecarboxykinase,pepck）的基因表达，引起tg合成增加致使脂质在肝脏的沉积增加而在nafld发生、发展中具有重要意义，故将lep作为肝脂肪变性严重程度的独立预测指标。已有研究显示血浆lep水平与sp患nalfd的严重程度成正相关。

已有研究证实apn水平的降低减少了骨骼肌细胞的脂肪酸氧化、葡萄糖吸收及胰岛素抑制糖原异生作用，同时由于其与肝细胞膜上g蛋白偶联受体的特异性地结合减少，导致其抑制肝糖原生成的能力减弱。同时随着apn水平的降低，其原本抗炎作用也相应减少，对肝细胞损伤无法起到一定的保护作用，增加了患者罹患nafld的可能性。

lep和apn是脂肪因子，其在胰岛素抵抗和mets的发展中具有相反的作用。已经有研究表明lep/apn值是一般人群中mets的良好生物标志物，在对sp的研究中，发现除葡萄糖水平外，apn水平与大多数代谢参数呈负相关。除glu和hdl水平外，lep/apn值与大多数代谢参数呈正相关，且lep、apn水平和lep/apn值存在显着的性别差异，mets的lep/apn值的辨别力在男性中比在女性中更好。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种静脉血中lep/apn比值的测得方法，采用血液标本检测，样本采集简单方便，可以最大程度的降低患者不配合情况的发生。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种静脉血中lep/apn比值的测得方法，包括如下步骤：

（1）试剂准备：lep、apn检测elisa试剂盒；

（2）仪器准备

（2-1）酶标分析仪；

（2-2）超低温冰箱；

（2-3）台式离心机；

（3）实验操作

（3-1）标本收集

真空负压管收集入选受试者的清晨空腹静脉血，静置30min后，利用台式离心机以3000rpm的速度离心10min后分离血清，置于-80℃超低温冰箱保存，待检lep、apn；

（3-2）应用elisa法测定血清apn及lep水平

准备：提前20分钟将试剂从超低温冰箱取出，平衡室温；

配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水1:20稀释，备用；

标准品的溶解：

lep标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀；浓度为2000pg/ml，然后依次稀释成1000pg/ml、500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62.5pg/ml、31.25pg/ml和0pg/ml；

apn标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀，浓度为10ng/ml，然后依次稀释成5ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml、0.31ng/ml、0.15ng/ml和0ng/ml；

编号：将样本对应微孔按序编号；

加样：检测apn时，血清用1:2500试剂配套通用稀释液稀释待用，lep直接加样，分别在相应的孔中加入空白、标准品和待测样本100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃温育90分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

加生物化素抗体：提前20分钟用生物化抗体稀释液1:30稀释浓缩生物化素抗体配置生物素化抗体工作液，每孔加生物化素抗体100μl，用封板膜封板后置37℃温育60分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

加酶：提前20分钟用酶结合物稀释液1:30稀释浓缩酶结合物配置酶结合物工作液；每孔加入酶结合物100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃，温育30分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

显色：每孔加入显色液a、b液各100μl轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；

测定：每孔加终止液100μl，轻拍混匀，设定酶标分析仪波长450nm，用空白孔调零后测定各孔od值；

数据处理：使用多项式线性拟和方式进行数据处理，以各校准品扣除本底的od值为纵坐标，各校准品的浓度为横坐标作图，得到标准曲线，样本中的lep、apn的浓度根据标准曲线计算得出；

（3-3）根据结果计算lep/apn比值。

本发明的上述技术方案的有益效果如下：

本发明采用血液标本检测，样本采集简单方便，可以最大程度的降低患者不配合情况的发生。

附图说明

图1为本发明中绘制的lep标准曲线图；

图2为本发明中绘制的apn标准曲线；

图3为为本发明中sp组与对照组合并nafld发生率的比较表；

图4为本发明中sp组与对照组合并nafld发生率的比较图；

图5为本发明中sp组与对照组生化指标的异常率（%）比较表；

图6为本发明中sp组与对照组生化指标的定量分析表（均值±sd）；

图7为本发明中sp组与对照组组内指标的定量分析表（均值±sd）；

图8为本发明中sp组与对照组组内生化指标的定量分析图；

图9为本发明中sp组中精神症状panss量表的比较表；

图10为本发明中sp组内nafld组与无脂肪肝组用药情况比较表；

图11为本发明中sp组内nafld组与无脂肪肝组用药情况比较图；

图12为本发明中sp组内用药情况对伴发nafld的影响表；

图13为本发明中aas药物不同用药方式对sp伴发nafld的影响表；

图14为本发明中nafld人群t2dm、高血压发生率及bmi分型差异率比较表；

图15为本发明中nafld人群各组间生化指标的定量分析表（均值±sd）；

图16为本发明中logistic回归分析影响sp合并nafld的风险因素表。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

本发明提供一种静脉血中lep/apn比值的测得方法，包括如下步骤：

（1）试剂准备：lep、apn检测elisa试剂盒（欣博盛生物科技有限公司，中国）；

（2）仪器准备

（2-1）酶标分析仪（雷诺公司）；

（2-2）超低温冰箱（中科美菱）；

（2-3）台式离心机（上海医疗器械有限公司）；

（3）实验操作

（3-1）标本收集

真空负压管收集入选受试者的清晨空腹静脉血，静置30min后，利用台式离心机以3000rpm的速度离心10min后分离血清，置于-80℃超低温冰箱保存，待检lep、apn；

（3-2）应用elisa法测定血清apn及lep水平

准备：提前20分钟将试剂从超低温冰箱取出，平衡室温；

配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水1:20稀释，备用；

标准品的溶解：

lep标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀；浓度为2000pg/ml，然后依次稀释成1000pg/ml、500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62.5pg/ml、31.25pg/ml和0pg/ml，绘制lep标准曲线，如图1所示；

apn标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀，浓度为10ng/ml，然后依次稀释成5ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml、0.31ng/ml、0.15ng/ml和0ng/ml，绘制apn标准曲线，如图2所示。

编号：将样本对应微孔按序编号；

加样：检测apn时，血清用1:2500试剂配套通用稀释液稀释待用，lep直接加样，分别在相应的孔中加入空白、标准品和待测样本100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃温育90分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

加生物化素抗体：提前20分钟用生物化抗体稀释液1:30稀释浓缩生物化素抗体配置生物素化抗体工作液，每孔加生物化素抗体100μl，用封板膜封板后置37℃温育60分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

加酶：提前20分钟用酶结合物稀释液1:30稀释浓缩酶结合物配置酶结合物工作液；每孔加入酶结合物100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃，温育30分钟；

洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；

显色：每孔加入显色液a、b液各100μl轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；

测定：每孔加终止液100μl，轻拍混匀，设定酶标分析仪波长450nm，用空白孔调零后测定各孔od值；

数据处理：使用多项式线性拟和方式进行数据处理，以各校准品扣除本底的od值为纵坐标，各校准品的浓度为横坐标作图，得到标准曲线，样本中的lep、apn的浓度根据标准曲线计算得出；

（3-3）根据结果计算lep/apn比值。

精神分裂症（schizophrenia，sz）是一种严重影响人类身心健康和生活质量的疾病，常伴有特殊的思维、知觉、情感和行为等方面的障碍。患者病情多不稳定，易反复发作，长期的住院治疗给家庭和社会带来了巨大的经济负担。2013年我国通过电子数据库大数据的研究调查显示大陆地区精神分裂症患者（schizophreniapatiant，sp）的终生患病率估计为4.62‰，其中，男性发病率为4.63‰，女性发病率为4.95‰，男性和女性的患病率无统计学差异；但城市人口发病率为5.15‰，农村人口发病率4.44，；城市居民患病率高于农村居民。2016年研究数据显示我国慢性sp合并超重及肥胖的体征有明显的性别差异。女性患者肥胖的患病率约为男性患者的2倍，女性有着更为明显的脂质代谢障碍。

sp由于其病情的特殊性暂不能准确表达肝脏不适症状，一经发现，sp往往已并发nafld，加之sp病情的特殊性，临床上通过增强体育锻炼，减少或更换抗精神病药物来缓解和治愈脂肪肝症状困难重重。此外，考虑到患者经济原因、实用性、操作性，目前我国诊断nafld多采用超声诊断技术。sp病情发作和治疗期间时常有精神症状不稳定，进行超声检查时间较长，常有患者不合作情况的发生。

sp诊断nafld的金标准是病理报告。但是由于病理检测损伤性大，在我国临床中多不采用。sp合并nafld的影像学诊断中，（1）超声诊断：sp肝脏体内异常影像表现为肝区以“脂肪带”、“明亮肝”、肝内血管明显减少，纹理不清等为表现的弥漫性脂肪肝，以及在灰阶超声上呈高或稍高回声区，边缘尚清楚但不规则，类似血管瘤表现，高回声区与肝实质同步增强或同步减弱的弥漫性非均匀脂肪肝。年龄增长，用药时间延长，联合用药等因素均可增加b超的阳性率。（2）x线：脂肪肝时，x线检查不能发现异常，临床价值有限。ct：是有价值的影像学检查技术。平扫显示肝的密度降低，弥漫性脂肪浸润表现为全肝密度降低。局灶性浸润则出现肝叶、肝段或亚段的肝局部密度降低。mri：由于脂肪与水中氢质子共振频率不同，进行化学位移成像的同相和反相未成像，可以显示肝脂肪浸润。在反相位图像上，脂肪浸润的信号比同相位图像的信号强度明显下降，为其特征。在查阅文献中，可能是由于mri较ct、b超检查费用较高，而诊断价值反而不及ct。故而国内关于sp合并nafld的ct检测相关文献更少。nafld在基因诊断方面尚处于科学研究阶段，临床上常规检查难以推广。

研究发现，中老年女性sp的nafld患病率（55.65%）远高于同年龄段女性无sz的一般人群对照组（26.32%）（图3，图4），并且高于中国成人nafld总体流行。可见中老年女性sp是nafld的高发人群。sp中代谢综合征（metabolicsyndrome，mets）的患病率越来越高，受到越来越多的关注。既往研究表明尿酸（uricacid，ua）在一般人群中与mets相关，且具有性别差异。作为选择性抗氧化剂，在sp中也发现ua减少，并且在男性中更为显著。sp中，ua浓度增高与高甘油三酯（triglyceride，tg）血症、低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein，ldl）水平、男性高血压及女性高tg血症有关。ua与mets风险相关性分析结果显示，在男性患者中显著，即ua浓度越低mets风险越低，而在女性中则无。

在对于青年男性sp合并nafld的患病率及风险因素的既往研究中显示，青年男性sp合并nafld的患病率高于普通青年男性。且反映肝功能的指标中alt与ast在组间差异显著。

bmi是国际上常用的衡量人体肥胖程度和是否健康的重要标准，通过人体体重和身高两个相对客观的参数，以体重/身高²计算出结果。参照《中国成人超重/肥胖症预防控制指南》标准：bmi＜18.5kg/m²为低体质量、bmi在18.5～23.9kg/m²为正常体质量、bmi≥24kg/m²为超重，bmi≥28kg/m²为肥胖，对bmi进行分型。2009年中国sp大样本的研究数据显示与正常人群相比，sp超重和肥胖的患者较高。与男性sp相比，女性肥胖症患者几乎是男性的两倍。

nafld的存在一方面导致内皮功能障碍的风险增加，进一步增加心血管疾病和脑血管疾病的风险，另一方面nafld原发性肝脏病理改变致使肝脏的结构和功能发生变化，增加肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌的发生率和死亡率。而抗精神病药物治疗后可出现代谢综合征，如体重增加、肥胖以及糖、脂代谢紊乱等。随着病程的延长，长期使用非典型抗精神病药物（atypicalantipsychotic，aas）在不同程度上与体重增加、以及因其引起的mets及nafld导致的转氨酶轻度升高有关。有学者认为sp接受抗精神病药物治疗是导致其并发nafld的风险因素。

在精神科临床康复诊疗时，医生在入院初期和抗sp治疗过程中对患者常规生化项目检验以及lep、apn等脂肪因子的水平以及该患者身高、体重、bmi、血压、心率、精神症状等一般临床信息数据进行定期监测，并且做出合理的风险评估，可以有效地降低sp合并nafld的发生率，提高此类人群的生存质量。

在本发明提供的技术方案基础上，对收集的样本同时进行生化检测，可为sp是否合并nafld的发生提供中间数据，具体操作步骤如下：

一、试剂准备

一般生化试剂包括：总胆红素（totalbilirubin，tbil）、直接胆红素（directbilirubin，dbil）、总蛋白（totalprotein，tp）、白蛋白（albumin，alb）、丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferas，alt）、天门冬氨酸转移酶（aspartateaminotransferase，ast）、γ-谷氨酰基转移酶（γ-glutamyltransferase，ggt）、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，alp）、尿酸（uricacid，ua）、尿素（bloodureanitrogen，bun）、肌酐（creatinine，cre）、β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2mg）、空腹glu、总胆固醇（totalcholesterol，chol）、甘油三酯（triglyceride，tg）、高密度脂蛋白（high-densitylipoprotein，hdl）、低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein，ldl）、载脂蛋白a1（apolipoproteina-1，apoa1）、载脂蛋白b（apolipoproteinb，apob）等检测试剂盒，均购自宁波瑞源生物技术有限公司（中国）。

二、仪器准备：au1000全自动生化仪（贝克曼）、酶标分析仪（雷诺公司）、超低温冰箱（中科美菱）、台式离心机（上海医疗器械有限公司）、超声仪器（西门子oxana1）。

三、病案资料统计

3.1、中老年女性精神分裂症115例，通过b超诊断分组：nafld组64例，非nafld组51例；中老年女性健康对照95例，nafld组25例，非nafld组70例；统计上述患者的年龄、病程、身高、体重、血压、心率、服用药物、合并高血压、t2dm疾病情况；

3.2、bmi计算公式：bmi=体重÷身高²（kg/m²）；

3.3、精神症状量表：panss量表（阳性症状量表、阴性症状量表、一般精神。

四、实验操作

4.1、真空负压管收集2管所入选受试者的清晨空腹静脉血5ml，静置30分钟后，以3000rpm的速度离心10分钟后分离血清，一管直接进行生化检测，一管用于本发明技术方案的lep和apn检测。

4.2、一般生化项目检测

血清生化检测项目在au1000全自动生化仪上定量检测，操作步骤严格按照仪器标准规程进行。临床标本与两个批次的质控品同时上机检测，严格室内质量控制。

肝功能检测项目：tbil、dbil、tp、alb、alt、ast、ggt和alp。

肾功能检测项目：ua、bun、cre和β2mg。

空腹葡萄糖：glu。

血脂检测项目：chol、tg、hdl、ldl、apoa1和apob。

其中，图8a为年龄与病程，图8b为空腹血糖，图8c为肝功能指标，图8d为肾功能指标，图8e为血脂指标，图8f为脂肪因子。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001。

本研究中，中老年女性肾功能的生化指标检测结果显示：sp组其结果呈阳性增加的项目有bun、ua、β2mg，其中ua在sp组明显高于正常对照组（图5、图6），在sp组中nafld组亦明显高于无脂肪肝组（图8d）。ua在中老年女性sp合并nafld的风险分析中无显著相关性，可能与性别差异有关。

在本研究中，中老年女性sp组与同龄一般对照组相比，肝功能生化检测结果显示dbil有明显增高（图8c），提示胆红素代谢异常；tp与alb则有明显低于对照组（图8c），表明sp肝脏合成蛋白功能降低。在sp中，ggt与alp在nafld组较无脂肪肝组升高（图8c），提示胆红素代谢障碍；alt在nafld组中显著增高（图8c），说明sp合并nafld患者肝实质损害严重，并且alt是中老年女性sp合并nafld的重要相关危险因素（图16）。从而我们认为，肝功能检测在中老年女性sp合并nafld辅助诊疗中具有重要的提示意义，尤其alt意义显著。

本研究中，bmi数据显示，中老年女性sp组高于无sp的对照组（图6），sp组中及对照组中nafld组均高于无脂肪肝组（图7），nafld人群中sp组亦高于对照组（图15）且sp组超重、肥胖异常率均高于对照组（图14）；风险相关性分析结果中显示bmi分型是中老年女性sp合并nafld的高危险因素（图16）。sp较易出现超重、肥胖的临床体征，这与subramaniamm等人研究结果一致。因而，支持肥胖、超重可能是导致sp合并nafld患病率增加的危险因素之一的观点。

本次研究中，通过对panss精神症状量表各个分值的统计，发现sp组内nafld组阳性量表总分、一般精神病理量表中焦虑项分值以及panss总分值均显著低于无脂肪肝组，而阴性量表中情绪退缩，被动/淡漠社交退缩，一般精神病理量表中运动迟缓三项明显高与无脂肪肝组（图9）。说明sp组中nafld组与无脂肪肝组间存在精神症状的差异。无脂肪肝组患者其阳性症状较nafld组患者更为明显，且易表现为焦虑、坐立不安的精神症状。而nafld组患者其社交被动，对社会活动淡漠的精神症状，以及运动迟缓、久坐不动的生活方式更易增加sp罹患nafld的风险。

本次研究中lep各组标本离散性差异较大，导致最终各组之间统计学意义降低。但在相关性分析中，发现lep是中老年女性sp合并nafld的危险因素（图16）。

本研究中，apn水平虽在中老年女性sp组与对照组间无差异，但在sp组中nafld组明显低于无脂肪肝组（图8f），表明apn水平与中老年女性sp合并nafld呈负相关。与sp合并nafld的独立风险因素分析结果一致（图16），提示apn是中老年女性sp合并nafld的保护性因素。

本研究结果显示，lep/apn值在中老年女性sp组中，虽nafld组高于无脂肪肝组，但差异不明显，与lep值的离散程度太大有关（图8f）。lep/apn值在sp组与对照组间（图4），以及nafld人群的sp组与对照组间（图15）均无统计学差异。

根据对各项指标t检验的结果选择可能风险因素作为自变量，最终以是否并发nafld为应变量，通过logistic回归分析影响sp合并nafld的风险因素。结果显示年龄、alt、tg、ldl、lep、apn及bmi分型与中老年女性sp合并nafld具有明显相关性，其中年龄、alt、tg、ldl、lep及bmi分型为危险因素，其中tg、ldl及bmi分型为高危因素。而apn则是保护性因素（图16），与apn的生理作用相一致。

临床治疗sp常用aas与典型抗精神病药（typicalantipsychotics，as），本研究中，中老年女性sp用药多为aas，且常有aas联合用药（图11）。但无论是按是否用药（图10）、或按aas与as分类分析还是按具体药物分组分析（图11），乃至是否联合用药（图12），结果均提示用药因素对中老年女性sp伴发nafld并无影响，且常见的aas不同用药方式间也无明显差异（图12）。另外因鉴于sp的治疗常为数种药物不同剂量联合使用的特殊性，且部分患者在入院规范治疗前服用药物依从性较差，服用剂量多不规律，故本次研究未将用药情况纳入影响sp合并nafld的风险因素进行分析。

血清学检测方法其标本采集仅需3-5分钟，sp容易配合。肝功能、肾功能、血糖、血脂是sp常规血清学检测项目，各市、县级医院乃至基层卫生院均能检测，且价格低廉，定期监测可行性高。lep、apn项目实验操作较为简单，可利于临床推广。

综上所述，中老年sp合并nafld的发病率较高，nafld严重影响中老年女性sp的生活质量。中老年sp与正常对照组比较存在众多有差异的指标。年龄、alt、tg、ldl、lep、apn与bmi分型是中老年女性sp并发nafld的风险因素，其中年龄、alt、tg、ldl、lep与bmi分型是其危险因素，tg、ldl及bmi分型为高危因素；apn则是其保护性因素。因此，本发明提供的一种静脉血中lep/apn比值的测得方法只能为判断sp是否并发nafld提供中间结果，不能用于直接得出疾病的诊断结果，不属于疾病的诊断方法。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。