一种硫氰酸根的检测方法与流程

本申请涉及乳制品的定量检测。具体而言，本申请涉及乳与乳制品中硫氰酸根的定量检测方法。
背景技术：
：硫氰酸盐是硫氰酸根离子scn-所成的盐，常见的包括无色的硫氰酸钾、硫氰酸钠、硫氰酸铵和硫氰酸汞，主要作为化工原料用于农药、医药、印染、电镀等行业。除此之外，硫氰酸盐(一般是硫氰酸钠)还可与过氧化氢合用，作为保鲜剂用于生鲜乳品的保鲜，有抑制霉菌作用。所以，欧盟将硫氰酸钾列于其食品安全标准的豁免物质名录之中。我国也曾将硫氰酸钠用于乳品保鲜，但鉴于硫氰酸钠的毒性作用及其滥用的情况，后来取消了硫氰酸钠的保鲜用途，并明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于食品非法添加物质。鉴于硫氰酸盐属于有毒有害物质，但目前国内没有国标方法，公司内部硫氰酸根的检测方法有紫外分光光度计法，液相色谱法，但是这些方法重现性较差，检出限和定量限达不到要求。因此，需要能够克服上述缺点的检测方法。技术实现要素：本申请提供了如下项目定义的实施方案而接近了本领域的技术问题。项目1.一种定量检测样品，例如乳制品样品中硫氰酸根的方法，该方法包括以下步骤：1)将系列硫氰酸根标准溶液进行离子色谱，得到色谱图，以硫氰酸根离子的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，通过线性拟合得到标准曲线方程；2)用物理分离方法，如沉淀、超声、过滤、萃取对样品进行前处理，去除样品中的杂质，如脂肪和蛋白质；3)将所述经过前处理的样品进行离子色谱，通过将保留时间与步骤1)中的硫氰酸根标准溶液色谱图比较，确定硫氰酸根峰，并定量峰面积；4)根据以下公式计算样品中硫氰酸根含量：其中：x—样品中硫氰酸根的含量，mg/kg；c—用标准曲线方程计算得到硫氰酸根的浓度，μg/ml；v—样品定容体积，ml；d—样品稀释倍数；m—样品质量，g。项目2.项目1所述的方法，其中所述前处理包括通过固相萃取小柱如onguardrp柱或c18柱对所述样品进行固相萃取。项目3.项目2所述的方法，其中所述前处理还包括用滤膜，如0.45μm滤膜对所述经固相萃取的样品进行过滤。项目4.项目1-3任一项的方法，其中在经过前处理的样品浓度超过标准曲线的线性范围时，将所述样品进行稀释后再进行所述离子色谱。项目5.项目1-3任一项的方法，其中用阴离子保护柱如ionpacag16(50mm×4mm)和阴离子分析柱如ionpacag16(250mm×4mm)进行离子色谱项目6.项目1-3任一项的方法，其中用电导检测器检测所述离子色谱的洗出液。附图说明图1是本发明的一个示例性技术路线图。图2是示例性的标准溶液的色谱图以及标准曲线。具体实施方式以下将提供本发明的实施例。但是应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。在下面的详细描述中，为便于解释，阐述了许多具体的细节以提供对本发明实施例的全面理解。然而，明显地，一个或多个实施例在没有这些具体细节的情况下也可以被实施。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。以下通过具体实施例详细说明本发明的技术及特点，但这些实施例并非用以限定本发明的保护范围。实施例所用的试剂和仪器设备实验配制所用水均为超纯水。乙腈为色谱纯。固相萃取小柱：onguardrp柱(2.5cc)(thermo，货号057083)，或相当者(如c18)，使用前依次用5ml甲醇和10ml水活化。硫氰酸钾或硫氰酸钠标准品为优级纯。硫氰酸根标准储备液：准确称取干燥后的硫氰酸钾0.1694g于100ml容量瓶中，用超纯水定容，混匀。即得1.0124mg/ml硫氰酸根标准储备液。保存在0℃～8℃的冰箱中，有效期为3个月。硫氰酸根标准中间液：准确移取10ml硫氰酸根储备液，用超纯水定容到100ml容量瓶中，配制成浓度为101.24μg/ml的工作液，现用现配。硫氰酸根标准工作液：分别准确移取0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml的硫氰酸根的中间液于不同的100ml容量瓶中，用水分别定容于100ml容量瓶中，浓度分别为0.5062μg/ml、1.0124μg/ml、2.0248μg/ml、5.062μg/ml、10.124μg/ml，现用现配。可根据实际情况(如样品浓度)做具体调整。离子色谱仪:配备电导检测器(thermo)。阴离子保护柱ionpacag16(50mm×4mm)和阴离子分析柱ionpacag16(250mm×4mm)。电子天平：精度万分之一。实施例1标准曲线的绘制：将系列标准溶液，从低到高浓度依次进样，进行离子色谱层析。色谱条件如下：1.离子色谱柱参数：阴离子保护柱ionpacag16(50mm×4mm)或相当者，阴离子分析柱ionpacag16(250mm×4mm)或相当者。2.柱温箱：30℃。3.流速：1.0ml/min。4.电导检测器：30℃，配4mm的阴离子抑制器，外接水抑制模式。5.进样量：50μl。6.淋洗液(使用thermo厂家的淋洗液碱罐)表1.淋洗液梯度参考程序硫氰酸根浓度和标样峰面积如下表2得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以硫氰酸根离子的浓度(μg/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线线性相关性满足：y＝0.7524x-0.0148r2＝0.9999(见图2)。样品准备：将固体乳与乳制品溶解为液体，混匀。液体样品充分混匀。样品前处理：称取10.0g液体乳于25ml比色管中，再加入乙腈定容至25ml，超声萃取20min后，于4℃冰箱中静置20min以沉淀蛋白。用滤纸过滤后，滤液经过：onguardrp柱和0.45μm滤膜过滤后，滤液待用于如下测定。试样测定：将经过上述前处理的样品用安装阴离子保护柱ionpacag16(50mm×4mm)和阴离子分析柱ionpacag16(250mm×4mm)的离子色谱仪进行色谱。柱温为30℃，流速：1.0ml/min，进样量：100μl，4mm的阴离子抑制器，外接水抑制模式，电导检测器，检测池温度30℃。表3.淋洗液梯度程序：时间/min(mmol)0.004516.004516.017021.007021.0145根据保留时间定性，峰面积定量。超过线性范围则应将样品滤液稀释后再进行分析。结果计算:根据以下公式计算硫氰酸根含量其中：x—样品中硫氰酸根的含量，mg/kg；c—用标准曲线方程计算得到硫氰酸根的浓度，μg/ml；v—样品定容体积，ml；d—样品稀释倍数；m—样品质量，g；计算结果保留三位有效数字。在重复性条件下，获得的硫氰酸根的两次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的10％。检出限和定量限：本方法检出限为2mg/kg样品，定量限为6mg/kg样品(见下表)。表4：加标回收率硫氰酸根加标回收率均符合要求。1倍检出限的峰高是：1.152噪声峰高：0.001信噪比1152；信噪比大于3。符合方法检出限2.0mg/kg。本文硫氰酸盐的离子色谱法检测方法可以检测含量大于2mg/kg的硫氰酸根。牛奶中硫氰酸根含量测量结果由2份试样的平均值给出为x＝2.1mg/kg±0.1mg/kg包含因子k(x)＝2给出，提供p≈95％的包含概率。以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12