1.以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,包括:
fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;
aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物。
2.根据权利要求1所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物由fe3o4、食源性病原菌特异性核酸适配体、pbs缓冲液、氯化钙溶液制成;所述fe3o4的体积为40μl、浓度为50mg/ml;所述食源性病原菌特异性核酸适配体的体积为8μl、浓度为10μm;所述pbs的体积为800μl、浓度为10mm、ph7.4;所述氯化钙溶液的体积为20μl、浓度为100mm。
3.根据权利要求2所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物由乙醛脱氢酶、食源性病原菌特异性核酸适配体、pbs缓冲液、氯化钙溶液制成;所述乙醛脱氢酶的体积为80μl、浓度为5mg/ml;所述食源性病原菌特异性核酸适配体的体积为20μl、浓度为10μm;所述pbs的体积为800μl、浓度为10mm、ph8.5;所述氯化钙溶液的体积为20μl、浓度为100mm。
4.根据权利要求3所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器,其特征在于,所述fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物中的食源性病原菌特异性核酸适配体与aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物中的食源性病原菌特异性核酸适配体相同。
5.如权利要求4所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、合成fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物:
(1)将fe3o4和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到pbs缓冲液中;
(2)加入氯化钙溶液,用超纯水定容,震荡混匀,室温下孵育15~21h;
(3)用磁铁吸附黑色产物,pbs洗涤,去除上清,即得fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;
步骤二、合成aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物:
(1)将kcl和β-巯基乙醇加入到pbs缓冲液中;
(2)将乙醛脱氢酶和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到步骤(1)所得溶液中;
(3)加入氯化钙溶液,用超纯水定,混合均匀,室温下孵育9~15h;
(4)经离心后产生白色沉淀物,纯水洗涤,去除上清,即得aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤二(1)中,所述kcl的体积为50μl、浓度为100mm;所述β-巯基乙醇的体积为10μl、浓度为1m。
7.如权利要求4所述的以乙醛脱氢酶作为信号转导系统检测食源性病原菌的生物传感器的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、合成fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物:
(1)将fe3o4和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到pbs缓冲液中;
(2)加入氯化钙溶液,用超纯水定容,震荡混匀,室温下孵育15~21h;
(3)用磁铁吸附黑色产物,pbs洗涤,去除上清,即得fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物;
步骤二、合成aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物:
(1)将kcl和β-巯基乙醇加入到pbs缓冲液中;
(2)将乙醛脱氢酶和食源性病原菌特异性核酸适配体加入到步骤(1)所得溶液中;
(3)加入氯化钙溶液,用超纯水定,混合均匀,室温下孵育9~15h;
(4)经离心后产生白色沉淀物,纯水洗涤,去除上清,即得aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物;
步骤三、将待测样品加入pbs缓冲液中,加入fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物和aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物混合均匀,经孵育后形成三明治夹心免疫复合物;用pbs洗涤,磁铁分离以除去未结合的靶标;加入100μl的反应底物进行反应,测量反应液上清的ph,计算ph变化量对应的食源性病原菌的浓度,所述反应底物包括2mm的乙醛、10mm的β-巯基乙醇、500mm的氯化钾、10mm的nadh。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤三中,所述待测样品、fe3o4@aptamer磷酸钙纳米复合物和aldh@aptamer磷酸钙纳米复合物的体积比为10:1:4。
9.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,步骤三中,所述反应底物中,乙醛浓度为2mm,β-巯基乙醇浓度为10mm,氯化钾浓度为100mm。