一种可快速判断头孢菌类抗生素中聚合物含量的方法与流程

[0001]
本发明属于化合物的检测技术领域，具体涉及一种可快速判断头孢菌类抗生素中聚合物含量的方法。


背景技术：

[0002]
头孢菌素类抗生素是目前使用较为广泛的抗感染药物，其最严重的不良反应是过敏反应，已有大量的临床研究证明引发该过敏反应的过敏原不是抗生素本身，而是其中的高分子聚合物杂质，有时会引发毒性反应，严重危害患者的生命安全，因此聚合物的含量控制尤其重要。
[0003]
目前聚合物含量控制标准最为严格是注射用抗生素，需明确聚合物杂质信息(包括分子量低于主成分及分子量介于主成分与二聚体之间的聚合杂质、二聚体、三聚体或多聚体等)，同时采用二维色谱柱切换法考察聚合物检查杂质峰在有关物质检查条件下的色谱行为，聚合物检查方法应检查和控制有关物质检查方法未控制的杂质(作为聚合物检查项或有关物质ii)。整个方法开发耗时较长、操作复杂，基于上述情况，急需提供一种操作简单，可快速初步判断头孢菌素类抗生素的聚合物含量的方法，供前期产品在研发阶段的质量判断。


技术实现要素：

[0004]
针对现有技术中在判断抗生素中聚合物的含量存在操作复杂、耗时长的问题，本发明提供一种操作简便、可快速判断头孢菌类抗生素中聚合物含量的方法，所述方法为：通过薄层色谱法对头孢菌类抗生素进行检测，根据待测头孢菌类抗生素与其标准品所形成的斑点的颜色深浅判断待测样品中聚合物的含量；
[0005]
检测的过程中以乙酸乙酯、醚类、二氯甲烷和有机酸的复合体系作为展开剂；所述醚类为小分子醚，所述有机酸为小分子有机酸。
[0006]
优选的，所述乙酸乙酯、醚类、二氯甲烷和有机酸的体积比为(4～6):(3～5):(4～6):(5～7)。
[0007]
优选的，所述醚类为甲基叔丁基醚、乙醚或异丙醚。
[0008]
优选的，所述有机酸为甲酸或乙酸。
[0009]
优选的，所述头孢菌类抗生素为头孢唑林钠、头孢吡肟、头孢米诺钠或头孢硫脒。
[0010]
优选的，以乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和甲酸的混合液作为展开剂或以乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和甲酸的混合液作为展开剂。
[0011]
优选的，通过薄层色谱法进行检测的过程中，选择硅胶g板作为薄层板。
[0012]
优选的，所述硅胶g薄层板的厚度范围为0.20～0.50mm，进一步优选的，所述硅胶g薄层板的厚度范围为0.20～0.25mm。
[0013]
作为优选的操作方式，本发明的方法包括如下步骤：
[0014]
1)将待测头孢菌类抗生素及其标准品分别点样至薄层板上，置于层析缸内进行展
开；
[0015]
2)展开完成后将所述薄层取出，保温、放冷、再置于碘饱和容器中显色，根据待测样品与其标准品所形成的斑点的颜色的深浅判断待测样品中聚合物的含量。
[0016]
优选的，所述保温的温度为30～70℃，时间为5～30min；优选的，所述保温的温度为45～55℃，时间为18～22min。
[0017]
本发明具有如下有益效果：
[0018]
本发明通过薄层色谱法对物料进行检测，可通过与标准品形成的斑点的颜色深浅来判断待测产品中的聚合物是否符合规范，以此来指导研发。如标准品可选择注射用抗生素，若形成的斑点的颜色比注射用抗生素的颜色浅，则说明待测样品中聚合物的含量比注射用抗生素的聚合物的含量低，若形成的斑点的颜色比注射用抗生素的颜色深，则说明待测样品中聚合物的含量比注射用抗生素的聚合物的含量高。上述方法可快速地判断待测抗生素中聚合物的含量，方便药品研发过程中对药品的制备方法进行及时地调整。
具体实施方式
[0019]
下面通过附加技术特征对本发明进行详细论述。
[0020]
本发明的方法包括如下步骤：通过薄层色谱法对头孢菌类抗生素进行检测，根据待测头孢菌类抗生素与其标准品所形成的斑点的颜色深浅判断待测样品中聚合物的含量；
[0021]
检测的过程中以乙酸乙酯、醚类、二氯甲烷和有机酸的复合体系作为展开剂；所述醚类为小分子醚，所述有机酸为小分子有机酸。
[0022]
头孢类抗生素可制备成多种形式的药物，如口服制剂或注射剂，注射剂对于安全性地要求最高，如需要明确聚合物杂质信息(包括分子量低于主成分及分子量介于主成分与二聚体之间的聚合杂质、二聚体、三聚体或多聚体等)，因此通常采用二维色谱柱切换法进行研究并确定其分子结构，同时开发反向色谱条件对其进行控制。但是在药品的研发阶段，通常不需要对其中的聚合物进行上述明确的分析，聚合物的含量是否合规即可对研发提供有效地指导，因此本申请提出了上述的薄层色谱检测法，可简单、快速地判断抗生素中聚合物的含量是否合规。
[0023]
本发明所述的小分子醚为常用的碳链较短的醚，如碳原子数为2～5的醚类，所述的小分子有机酸为碳原子数为1～3的有机酸。
[0024]
根据一些优选的实施例，所述乙酸乙酯、醚类、二氯甲烷和有机酸的体积比为(4～6):(3～5):(4～6):(5～7)。所述乙酸乙酯、醚类、二氯甲烷和有机酸的体积比为在上述范围内，形成的复合体系对头孢菌类抗生素及其聚合物的溶解性差别较大，可理想地将抗生素与抗生素形成的聚合物进行分离。
[0025]
根据一些优选的实施例，所述醚类为甲基叔丁基醚、乙醚或异丙醚。上述醚类可以改善聚合物和其他杂质的分离效果。在对头孢类抗生素进行检测的过程中，除了头孢类化合物及其聚合物外，通常还有其他种类的杂质，这些杂质的出现也会对头孢类物质及其聚合物的分离起到一定的影响，本发明选择上述醚类有利于将杂质与聚合物进行分离。
[0026]
根据一些优选的实施例，所述有机酸为甲酸或乙酸。上述酸可以调节展开剂的酸碱度，从而改善斑点的圆润度。
[0027]
根据一些优选的实施例，所述头孢菌类抗生素为头孢唑林钠、头孢吡肟、头孢米诺
钠或头孢硫脒。
[0028]
根据一些优选的实施例，以乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和甲酸的混合液作为展开剂或以乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和甲酸的混合液作为展开剂。
[0029]
作为优选的操作方式，乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为5:4:5:6；
[0030]
作为优选的操作方式，乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为4:5:5:6。
[0031]
作为优选的操作方式，选择乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为5:4:5:6的混合体系作为展开剂，或选择乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为4:5:5:6的混合体系作为展开剂，所述头孢菌素类抗生素为头孢唑林钠、头孢吡肟或头孢米诺钠。
[0032]
作为优选的操作方式，对头孢唑林钠进行检测的过程中，以乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为5:4:5:6为混合体系作为展开剂。上述展开剂既可实现对头孢唑林钠中头孢唑林钠及其聚合物的分离，而且分开的距离较远，杂质的存在不会对斑点产生影响。
[0033]
作为优选的操作方式，对头孢吡肟进行检测的过程中，以乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、二氯甲烷和甲酸的体积比为4:5:5:6的混合体系作为展开剂。上述展开剂既可实现对头孢唑林钠中头孢唑林钠及其聚合物的分离，而且分开的距离较远，杂质的存在不会对斑点产生影响。
[0034]
根据一些优选的实施例，通过薄层色谱法进行检测的过程中，选择硅胶g板作为薄层板。硅胶g板中不含有荧光剂，有利于后序的颜色比对。
[0035]
优选的，所述硅胶g薄层板的厚度范围为0.20～0.50mm；
[0036]
进一步优选的，所述硅胶g薄层板的厚度范围为0.20～0.25mm。上述厚度范围可以控制载样量在一定范围内，从而保证斑点的形状、大小处于较优状态。
[0037]
根据一些优选的实施例，本发明的方法包括如下步骤：
[0038]
1)将待测头孢菌类抗生素及其标准品分别点样至薄层板上，置于层析缸内进行展开；
[0039]
2)展开完成后将所述薄层取出，保温、放冷、再置于碘饱和容器中显色，根据待测样品与其标准品所形成的斑点的颜色的深浅判断待测样品中聚合物的含量。
[0040]
根据一些优选的实施例，所述保温的温度为30～70℃，时间为5～30min；
[0041]
根据一些优选的实施例，所述保温的温度为45～55℃，时间为18～22min。保温温度和时间的控制，可以保证斑点保留时间的重现性。
[0042]
根据一些优选的实施例，点样前展开剂置层析缸内饱和1.5～2小时，点样后薄层板置层析缸饱和0.4～0.6h。
[0043]
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0044]
实施例1
[0045]
本实施例涉及对头孢唑林钠中聚合物的检测，包括如下步骤：
[0046]
1)取头孢唑林钠适量，加水配制成1mg/ml的溶液，于80℃水浴破坏6小时，作为聚合物对照品。
[0047]
2)采用二维柱切换法测定其中聚合物的含量，方法见下表
[0048][0049]
得出聚合物杂质含量约为1.5％。
[0050]
3)取待测样品1和2，加水配制成1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，吸取聚合物对照品和供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层上，以乙酸乙酯-乙醚-二氯甲烷-甲酸(5:4:5:6)为展开剂，晾干，保温(50℃)20min，放冷，置碘饱和容器中显色。
[0051]
结果发现，待测样品1聚合物斑点浅于对照品聚合物斑点，待测样品2聚合物斑点深于对照品聚合物斑点，进而采用与步骤2)相同的二维柱切换法对待测样品1和待测样品2进行检测发现，待测样品1中的聚合物含量为0.9％，待测样品2中的聚合物含量为2.0％。由以上可以看出，可通过本申请所述的薄层色谱法对头孢菌类抗生素中聚合物的含量进行快速、准确地判断。
[0052]
实施例2
[0053]
本实施例涉及对头孢吡肟中聚合物的检测，包括如下步骤：
[0054]
1)取头孢吡肟适量，加水配制成1mg/ml的溶液，室温放置1周后，作为聚合物对照品。
[0055]
2)采用二维柱切换法测定其中聚合物的含量，方法见下表
[0056][0057]
得出聚合物杂质含量约为1.5％。
[0058]
3)取待测样品1和2，加水配制成1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。
[0059]
通过薄层色谱法进行检测，吸取聚合物对照品和供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层上，以乙酸乙酯-甲基叔丁基醚-二氯甲烷-甲酸(4:5:5:6)为展开剂，晾干，保温(50℃)20min，放冷，置碘饱和容器中显色。
[0060]
结果发现，待测样品1聚合物斑点浅于对照品聚合物斑点，待测样品2聚合物斑点深于对照品聚合物斑点。进而采用与步骤2)相同的二维柱切换法对待测样品1和待测样品2进行检测发现，待测样品1中的聚合物含量为1.2％，待测样品2中的聚合物含量为1.8％。由以上可以看出，可通过本申请所述的薄层色谱法对头孢菌类抗生素中聚合物的含量进行快速准确地判断。
[0061]
实施例3
[0062]
与实施例1相比，区别在于，以乙酸乙酯-甲基叔丁基醚-二氯甲烷-甲酸(4:5:5:6)为展开剂。
[0063]
结果发现，与实施例1相比，聚合物斑点和主成分斑点距离较近，但也可达到分离，且斑点清晰，可以用于判断待测样品聚合物与对照物质聚合物的斑点深浅，其结果与实施例1一致。
[0064]
实施例4
[0065]
与实施例2相比，区别在于，以乙酸乙酯-乙醚-二氯甲烷-甲酸(5:4:5:6)为展开剂作为展开剂。
[0066]
结果发现，与实施例1相比，聚合物斑点和主成分斑点距离较近，但也可达到分离，且斑点清晰，可以用于判断待测样品聚合物与对照物质聚合物的斑点深浅，其结果与实施例2一致。
[0067]
实施例5
[0068]
本实施例涉及对头孢米诺钠中聚合物的检测，包括如下步骤：
[0069]
1)取头孢米诺钠适量，加水配制成1mg/ml的溶液，室温放置1周后，作为聚合物对照品。
[0070]
2)通过分子排阻色谱法测定，用球状亲水改性硅胶(分子量适用范围为聚合物500～15000)为填充剂(tsk-gel g2000swxl，7.8mm
×
300mm，5μm或效能相当的色谱柱)；以磷酸盐缓冲液[0.005mol/l磷酸氢二钠溶液-0.005mol/l磷酸二氢钠溶液(61:39)]-乙腈(95:5)为流动相，取聚合物对照品进行hplc检样分析，得出聚合物杂质含量约为1.4％。
[0071]
3)取待测样品1和2，加水配制成1mg/ml的溶液，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，吸取聚合物对照品和供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层上，以乙酸乙酯-乙醚-二氯甲烷-甲酸(5:4:5:6)为展开剂，晾干，保温(50℃)20min，放冷，置碘饱和容器中显色。
[0072]
结果发现，待测样品1聚合物斑点浅于对照品聚合物斑点，待测样品2聚合物斑点深于对照品聚合物斑点，进而采用与步骤2)相同的分子排阻色谱法对待测样品1和待测样品2进行检测发现，待测样品1中的聚合物含量为0.4％，待测样品2中的聚合物含量为1.9％。由以上可以看出，可通过本申请所述的薄层色谱法对头孢菌类抗生素中聚合物的含量进行快速、准确地判断。
[0073]
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。