1.口蹄疫病毒液相阻断bsa-elisa抗体检测试剂盒,其特征在于:包括96孔兔抗包被板、fmdv抗原、阴性对照血清、阳性对照血清、豚抗-生物素、hrp-sa、25×洗涤液、tmb底物溶液和终止液;所述fmdv抗原为血清型特异的口蹄疫病毒抗原,通过peg浓缩离心技术对口蹄疫病毒抗原进行浓缩并测试调配至统一的抗原量,加入5%海藻糖和0.01%proclin300防腐剂,分装,冻干;
所述阴性对照血清、阳性对照血清、豚抗-生物素和hrp-sa中分别加入不同的颜色指示剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述口蹄疫病毒抗原是将口蹄疫病毒灭活得到的或是经口蹄疫灭活疫苗破乳后得到的。
3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述96孔兔抗包被板的包被过程具体为:采用酶标板洗封一体机操作,用ph值9.6的0.05m碳酸盐缓冲液将血清型特异的兔抗fmdv血清稀释并包被elisa板,100µl/孔,室温过夜;不洗拍干加入酶标板稳定剂,150µl/孔,室温孵育1小时;不洗拍干,37℃干燥2个小时至孔底干燥无水气,真空包装,4℃保存。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述阴性对照血清呈绿色,所述阳性对照血清呈红色,所述豚抗-生物素呈橙色,所述hrp-sa呈蓝色。
5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述peg浓缩离心技术的具体做法为:将口蹄疫病毒灭活疫苗加入8%peg6000和4%nacl,4℃搅拌4小时后4~8℃静置过夜,500ml离心管6000rmp离心60分钟弃去上清,最后用pbs悬浮离心管内的抗原沉淀,定容至原抗原体积的1/50,加入对等体积冷的三氯乙烯进行乳化并离心脱脂,吸取抗原层液体;确定抗原的最佳使用浓度,根据测定的抗原浓度经pbs稀释至便于1:100稀释使用的抗原浓度,加入5%海藻糖和0.01%proclin300防腐剂,以1.0ml/管分装1.5ml规格的离心管,冻干,管内抗原物质为团松状,贴签,4℃用保存。
6.根据权利要求1-5任意一种所述的试剂盒在口蹄疫病毒抗体检测中的应用,所述抗体是指经口蹄疫病毒疫苗免疫后的抗体;采用所述试剂盒进行抗体检测的检测方法,包括以下步骤:
a、包被elisa板,形成96孔兔抗包被板;
b、血清稀释及抗原反应:将fmdv抗原冻干品用无菌去离子水复原后备用,4℃保存1个月内用完,临用时稀释至工作浓度;将25×pbst用去离子水稀释至1倍pbst备用;
在u型载体板上预先加入pbst后将阴性对照血清、阳性对照血清及被检血清加入相应孔内按要求以60ul体系进行相应起始倍数的2倍连续梯度稀释后紧接着用加入60ul稀释至工作浓度的fmdv抗原,每块板均设置至少4孔病毒抗原对照,板内均为120µl/孔,封板,震荡,37℃孵育90分钟;
c、移板:将作用充分后的抗原抗体混合物以100ul/孔平行转移至包被有兔抗口蹄疫病毒抗血清的elisa板内,37℃孵育30分钟;
d、豚抗-生物素结合物,即豚鼠igg抗型特异fmdv-生物素标记物:将经步骤c反应的elisa板用pbst洗板3~5次,甩干,加入豚抗-生物素结合物,100µl/孔,封板,37℃孵育30分钟;
e、hrp-sa:将经步骤d反应的elisa板用pbst洗板3~5次,甩干,加入hrp-sa结合物,100µl/孔,封板,37℃孵育10分钟;
f、tmb底物及终止反应:洗板3~5次,加入单组分tmb底物溶液,50µl/孔,37℃孵育10-15分钟后再每孔加入50µl的1.25mh2so4终止反应,酶标仪450nm波长下读取吸光值;
g、结果判定:以病毒抗原对照4孔od值平均值的50%作为病毒抗原被抑制50%的临界值,将阴阳性对照血清和被检血清相应孔的od值与临界值相比较,某份血清抗体效价即为该份血清稀释孔od值略高于临界值与略低于临界值孔的相邻两孔对应的抗体滴度的平均值。
7.根据权利要求1-5任意一种所述的试剂盒在制备用于检测口蹄疫病毒抗体的产品中的应用。