一种叶酸染色液及其制备方法与流程

1.本发明涉及癌变细胞检测液技术领域，具体领域为一种叶酸染色液及其制备方法。


背景技术：

2.癌症是全球人口死亡的首要原因之一，提高发现肿瘤细胞的存在对于癌症的治疗是至关重要的，在国际上，类似肿瘤筛查技术，如肿瘤标记物检查鉴定等，是主流筛查手段。肿瘤标记物检查鉴定是指通过肿瘤细胞的生物化学性质及其代谢异常，即在肿瘤病人的体液、排除物及组织中出现质或量上改变的物质来进行肿瘤筛查，如癌胚抗原、肿瘤抗原、糖类抗原等。肿瘤标记物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。然而，类似肿瘤筛查技术(如肿瘤标记物检查鉴定等)检测周期长，需要精密仪器以及特殊的操作技术，尤其需要操作者具有丰富的经验，成本较高。
3.叶酸受体1(folr1)又名叶酸受体α或叶酸结合蛋白，它是在细胞质膜上表达的n
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糖基化蛋白。folr1对叶酸以及若干还原的叶酸衍生物具有高亲和力。folr1介导生理叶酸，即5
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甲基四氢叶酸，可以向细胞内部的递送。folr1 在大多数卵巢癌以及许多子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌、肺癌及乳腺癌中过度表达，而folr1在正常组织上的表达只限于肾近端小管中的上皮细胞的顶膜、肺的肺泡性肺细胞、膀胱、睾丸、脉络丛以及甲状腺。folr1的这种表达模式使其成为用于folr1定向癌症疗法的合乎需要的靶标。
4.基于叶酸受体的特异性，目前市场上出现了一种新的诊断癌变的技术——叶酸受体介导的特殊染色。该技术利用了肿瘤细胞的两个特点，即细胞表面叶酸受体高表达以及细胞内强烈的氧化应激反应，借助亚甲基蓝的显色反应来实现快速准确的筛查，但现有的叶酸染色液渗透能力有限，导致还原态亚甲基蓝较难进入细胞被氧化显色，检测结果的准确性不能得到保证，为此提出一种叶酸染色液及其制备方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种叶酸染色液及其制备方法以解决上述背景技术中提及的技术问题。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种叶酸染色液，其组成成分及各成分质量百分比为：叶酸水溶液50％
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70％、亚甲基蓝溶液10％
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20％；
7.其中：叶酸水溶液包括叶酸、去离子水、水溶性氮酮和糖化酶；
8.亚甲基蓝溶液包括亚甲基蓝、去离子水、柠檬酸和二甲基亚砜。
9.优选的，叶酸水溶液中各成分质量百分比为：叶酸40％
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50％、去离子水 20％
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30％、水溶性氮酮10％
‑
15％、糖化酶5％
‑
30％。
10.优选的，亚甲基蓝溶液中各成分质量百分比为：亚甲基蓝25％
‑
35％、去离子水10％
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20％、柠檬酸3％
‑
6％、二甲基亚砜39％
‑
62％。
11.优选的，叶酸染色液中还包括肽聚糖和复合氨基酸。
12.优选的，叶酸染色液其组成成分及各成分质量百分比为：叶酸水溶液60％、亚甲基蓝溶液20％、肽聚糖10％和复合氨基酸10％。
13.优选的，叶酸水溶液中各成分质量百分比为：叶酸45％、去离子水20％、水溶性氮酮15％、糖化酶20％。
14.优选的，亚甲基蓝溶液中各成分质量百分比为：亚甲基蓝30％、去离子水 15％、柠檬酸5％、二甲基亚砜50％。
15.一种叶酸染色液的制备方法，其制备方法包括如下步骤：
16.步骤1：制备叶酸水溶液
17.将叶酸、去离子水、水溶性氮酮和糖化酶按相应重量份数混合均匀备用；
18.步骤2：亚甲基蓝溶液
19.将亚甲基蓝、去离子水、柠檬酸和二甲基亚砜按相应重量份数混合均匀备用；
20.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，再向其中加入肽聚糖和复合氨基酸，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
21.一种叶酸染色液的应用，使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存在病变。
22.本发明的有益效果是：正常细胞表面几乎没有叶酸受体表达，因此不会与叶酸衍生物结合，因此还原态亚甲基蓝不会变色，结合了还原态亚甲基蓝的叶酸衍生物与癌细胞的叶酸受体结合，进入癌细胞，亚甲基蓝被癌细胞中的活性氧氧化，亚甲基蓝变成蓝色，溢出细胞，从而检测出癌细胞，本发明提出的一种叶酸染色液及其制备方法，在叶酸水溶液中添加一定量的水溶性氮酮，有效的促进叶酸水溶液在细胞中的渗透性，叶酸染色液渗透能力得到有效的提高，还原态亚甲基蓝易进入细胞被氧化显色，检测结果的准确性得到保证，同时检测时间在较大程度上缩短，检测方式得到较大程度的简化；
23.通过糖化酶的作用，将淀粉从非还原性未端水介a
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1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，从而使染色液具有抗氧化的作用；
24.柠檬酸在染色液中的作用是加快角质的更新，有助于细胞表面叶酸受体的剥落，进一步缩短检测时间，同时柠檬酸起到防腐剂和保鲜剂的作用；
25.二甲基亚砜具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，在染色液中主要作为溶剂；
26.肽聚糖是原核生物细胞所特有的物质，肽聚糖起着重要的生理功能,肽聚糖分子相互交织成网格状,形成致密的机械性很强的网套结构，有效保护细胞受到外界的损伤；
27.复合氨基酸包括赖氨酸，色氨酸，蛋氨酸，苏氨酸，丙氨酸，亮氨酸等主要起到染色液抗氧化的作用。
具体实施方式
28.下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发
明保护的范围。
29.实施例1：
30.步骤1：制备叶酸水溶液
31.将叶酸40％、去离子水20％、水溶性氮酮10％和糖化酶30％按相应重量份数混合均匀备用；
32.步骤2：亚甲基蓝溶液
33.将亚甲基蓝25％、去离子水10％、柠檬酸3％和二甲基亚砜62％按相应重量份数混合均匀备用；
34.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，其中叶酸水溶液占 50％，亚甲基蓝溶液占10％，再向其中加入肽聚糖20％和复合氨基酸20％，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
35.使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存在病变。
36.实施例2：
37.步骤1：制备叶酸水溶液
38.将叶酸42％、去离子水22％、水溶性氮酮11％和糖化酶25％按相应重量份数混合均匀备用；
39.步骤2：亚甲基蓝溶液
40.将亚甲基蓝28％、去离子水12％、柠檬酸4％和二甲基亚砜56％按相应重量份数混合均匀备用；
41.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，其中叶酸水溶液占 55％，亚甲基蓝溶液占12％，再向其中加入肽聚糖15％和复合氨基酸18％，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
42.使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存在病变。
43.实施例3：
44.步骤1：制备叶酸水溶液
45.将叶酸45％、去离子水25％、水溶性氮酮12％和糖化酶18％按相应重量份数混合均匀备用；
46.步骤2：亚甲基蓝溶液
47.将亚甲基蓝30％、去离子水15％、柠檬酸5％和二甲基亚砜50％按相应重量份数混合均匀备用；
48.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，其中叶酸水溶液占 60％，亚甲基蓝溶液占20％，再向其中加入肽聚糖10％和复合氨基酸10％，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
49.使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存
在病变。
50.实施例4：
51.步骤1：制备叶酸水溶液
52.将叶酸48％、去离子水28％、水溶性氮酮14％和糖化酶10％按相应重量份数混合均匀备用；
53.步骤2：亚甲基蓝溶液
54.将亚甲基蓝32％、去离子水18％、柠檬酸5％和二甲基亚砜45％按相应重量份数混合均匀备用；
55.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，其中叶酸水溶液占 65％，亚甲基蓝溶液占18％，再向其中加入肽聚糖7％和复合氨基酸10％，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
56.使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存在病变。
57.实施例5：
58.步骤1：制备叶酸水溶液
59.将叶酸50％、去离子水30％、水溶性氮酮15％和糖化酶5％按相应重量份数混合均匀备用；
60.步骤2：亚甲基蓝溶液
61.将亚甲基蓝35％、去离子水20％、柠檬酸6％和二甲基亚砜39％按相应重量份数混合均匀备用；
62.步骤3：将步骤1和步骤2制备的两中溶液混合均匀，其中叶酸水溶液占 70％，亚甲基蓝溶液占15％，再向其中加入肽聚糖7％和复合氨基酸8％，搅拌均匀制备成叶酸染色液。
63.使用脱脂棉签蘸取叶酸染色液，匀涂抹于组织或细胞表面，观察脱脂棉签颜色以及组织、细胞颜色的变化，根据颜色是否呈蓝色判定所测试的组织细胞区域或细胞是否存在病变。
64.实施例1
‑
5制备的叶酸染色液使用结果如下：
65.[0066][0067]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。