一种二天油的薄层色谱检测方法与流程

1.本发明属于药品质量控制技术领域，具体涉及一种二天油的薄层色谱检测方法。


背景技术：

2.二天油，包括薄荷脑、薄荷油及冰片，为棕红色的澄清液体，具有薄荷香气，是一种驱风兴奋药，可用于治疗伤风感冒、舟车眩晕及中暑肚痛等。其中，薄荷油为淡草绿色液体或淡黄色的澄清液体，在温度较低时有大量的无色晶体析出，呈强烈薄荷香气和清凉的微苦味，带辛辣而清凉，有强烈的窜透性，存放日久，色渐变深，质渐变粘，其与乙醇、氯仿或乙醚能任意混合，常被用于驱赶蚊虫，缓解身体疲劳。薄荷脑，也叫薄荷醇，是一种萜类有机化合物，化学式为c
10h20
o，薄荷脑由薄荷的叶和茎中所提取，为无色针状或棱柱状结晶或白色结晶性粉末，有薄荷的特殊香气，味初灼热后清凉，其一般有两种异构体(d型和l型)，天然的薄荷醇主要为左旋异构体(l-薄荷醇)，薄荷脑可用作牙膏、香水、饮料和糖果等的赋香剂，在医药上用作刺激药，作用于皮肤或粘膜，有清凉止痒作用，内服可作为驱风药，用于头痛及鼻、咽、喉炎症等，其酯也可用于香料和药物。冰片，又名片脑、梅冰等，是由菊科艾纳香茎叶或樟科植物龙脑樟枝叶经水蒸汽蒸馏并重结晶而得，其化学成分为2-茨醇，化学式是c
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o，其可用于闭证神昏、目赤肿痛，喉痹口疮、疮疡肿痛，溃后不敛等。此外，二天油中还包括黑油，二天油的不同颜色提示黑油的加入量有明显区别。黑油为血竭、栀子炭以及艾叶炭于茶油中炼制而成，由于二天油中黑油用量较大，且含有名贵中药材血竭，因此有必要对二天油中的血竭进行质量控制，从而有效规范市场竞争。
3.专利cn02129687.1提供了一种龙血竭总黄酮制剂的质量控制方法，具体如下：取供试品溶液及对照品溶液，点于硅胶g薄层板上，以13-16:1氯仿-甲醇为展开剂展开，置于紫外光灯下检视。专利cn200810049281.4公开了一种少林风湿跌打膏的质量控制方法，其中，血竭的质量控制方法具体如下：取供试品溶液及对照品溶液，点于硅胶g薄层板上，以95:5氯仿-甲醇为展开剂展开，置于紫外光灯下检视。
4.目前，还未有针对二天油中的血竭进行质量控制的方法。


技术实现要素：

5.为了解决现有技术中的上述问题，本技术提供了一种二天油的薄层色谱检测方法。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：
7.一方面，本发明提供了一种二天油的薄层色谱检测方法，所述的方法以氯仿-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，以硅胶g板作为薄层色谱板，进行二天油的薄层色谱检测。
8.具体地，所述的展开剂为体积比为5-10:1-5:1的氯仿-乙酸乙酯-甲醇溶液。
9.进一步具体地，所述的展开剂的体积比为6-10:1-3:1，优选为8:2:1。
10.具体地，所述的方法以硫酸乙醇溶液作为显色剂。
11.进一步具体地，所述的硫酸乙醇溶液的浓度为5-15％，优选为10％。
12.具体地，所述的方法包括以下步骤：将二天油供试品溶液、对照品溶液分别点于同一硅胶g板上，以体积比为5-10:1-5:1的氯仿-乙酸乙酯-甲醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以5-15％硫酸乙醇溶液作为显色剂，加热至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。
13.具体地，所述的供试品溶液的制备方法为：取二天油，按二天油:2％氢氧化钠溶液体积比1:5加入氢氧化钠溶液振摇提取，提取液用稀盐酸调节ph3-5，用2％氢氧化钠溶液等体积的三氯甲烷振摇提取，提取液蒸干，残渣加二天油等体积的乙酸乙酯溶液溶解，作为供试品溶液。
14.具体地，所述的对照品溶液的制备方法为：取血竭对照药材，按照料液比为1:10添加茶油，混合均匀后静置浸泡36-60h，加热至180-220℃炼制3-5h，过滤取滤液，按照滤液：石油醚体积比为1:19添加石油醚溶解，作为对照品溶液。
15.在某些实施例中，本发明所述的薄层色谱检测方法可用于二天油中血竭含量的检测及鉴定，从而对二天油中的血竭进行质量控制。
16.在某些实施例中，针对二天油的质量检测，还需对二天油中的薄荷脑、薄荷油进行质量检测及鉴定，主要包括以下步骤：(1)取二天油0.5ml，用醋酸乙酯稀释至5ml，作为供试品溶液。(2)另取薄荷脑、薄荷油对照品，分别加醋酸乙酯制成每1ml含0.01mg的溶液，作为对照品溶液。(3)照薄层色谱法(中国药典2020版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各1-2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。
17.与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
18.本发明所述的方法可对二天油中血竭进行定性分析，从而对二天油中的血竭进行质量控制，进一步有效规范市场竞争。
附图说明
19.图1为实施例1二天油薄层色谱检测结果图(t:24.2℃，rh:52.2％)，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
20.图2为采用德国默克薄层板进行二天油薄层色谱检测结果图(t:24.6℃，rh:69.2％)，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
21.图3为采用青岛海洋薄层板进行二天油薄层色谱检测结果图(t:24.6℃，rh:69.2％)，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
22.图4为t:25.1℃，rh:33.6％条件下二天油薄层色谱检测结果图，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
23.图5为t:24.4℃，rh:87.7％条件下二天油薄层色谱检测结果图，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
24.图6为t:8.9℃，rh:70.7％条件下二天油薄层色谱检测结果图，其中，1.血竭阴性
对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
25.图7为t:37.1℃，rh:44.6％条件下二天油薄层色谱检测结果图，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
26.图8为t:21.6℃，rh:64.7％条件下二天油薄层色谱检测结果图，其中，1.血竭阴性对照，2.血竭对照药材，3.供试品sc80008，4.供试品sc80017，5.供试品sc80019，6.供试品sc80020。
27.图9为实验例1中部分样品检测结果(t:21.6℃，rh:64.7％)，其中，1.星群sc80021，2.星群sc80022，3.星群sc80023，4.星群sc80024，5.星群sc80025，6.血竭阴性对照，7.血竭对照药材，8.星群sc80026，9.星群rc80014，10.星群sc80007，11.星群pc80009，12.星群pc80014。
28.图10为实验例1中部分样品检测结果(t:21.5℃，rh:64.7％)，其中，1.星群pc80016，2.星群rc80001，3.星群rc80007，4.其他公司x 2002102，5.其他公司x 2109016.血竭阴性对照，7.血竭对照药材，8.其他公司x 2010110，9.其他公司x 210401，10.其他公司y 201201，11.其他公司y 200701，12.其他公司y 200301。
29.图11为实验例1中部分样品检测结果(t:21.6℃，rh:65.3％)，其中，1.星群sc80004，2.星群qc80014，3.星群qc80021，4.其他公司x210301，5.其他公司x 210802，6.血竭阴性对照，7.血竭对照药材，8.其他公司x 211001，9.其他公司x 21080110.其他公司x 210902，11.其他公司x 2009108，12.其他公司x 1911109。
30.图12为实验例1中部分样品检测结果(t:21.6℃，rh:65.3％)，其中，1.星群qc80007，2.星群sc80012，3.星群sc80013，4.其他公司x 210101，5.其他公司x 2005105，6.血竭阴性对照，7.血竭对照药材，8.其他公司x 210701，9.其他公司x 21020110.其他公司x 1906105，11.其他公司x 2012112，12.其他公司x 210402。
具体实施方式
31.下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
32.实验材料
33.1.实验试剂：硅胶g预制板(青岛海洋化工厂，批号：20210406)(青岛海洋化工厂，批号：20210202)，硅胶g预制板(德国默克，批号：hx14868326)，石油醚(60-90℃)(分析纯，广州化学试剂厂，批号：20200803 20)、甲苯(分析纯，广州化学试剂厂，批号：20190101 08)、丙酮(分析纯，广州化学试剂厂，批号：20210301 05)。
34.2.实验仪器：me5002t/02型电子天平(梅特勒-托利多(上海))，bp-221d型电子天平(德国赛多利斯)camag reprostar3数码成像系统(瑞士卡玛)。
35.3.对照药材：血竭对照药材(批号：120906-201611)、栀子对照药材(批号：120906-201611)、艾叶对照药材(批号：121345-201804)，薄荷脑对照品(批号：110728-201707)，薄
荷素油对照提取物(批号：111551-201704)，冰片对照药材(批号：110743-201706)均购于中国食品药品检定研究院。
36.4.供试品：
37.共收集44批次二天油样品，其中广州白云山星群(药业)股份有限公司23批，其他公司x18批，其他公司y 3批。批次列表见表1，其中
★
序号1-4为方法学研究使用批次。
38.表1.二天油批次列表及相应厂家
39.[0040][0041]
5.血竭阴性对照品：按本品标准处方配比，取除血竭外的药材栀子、艾叶、薄荷素油、薄荷脑、冰片，按标准工艺制法制成血竭阴性对照样品。
[0042]
实施例1.一种二天油薄层色谱检测方法
[0043]
通过对本品供试品溶液制备方法的提取溶媒、提取方法的考察，优选供试品溶液的制备方法，对展开条件的展开剂、检视方法、以及点样量等色谱条件进行考察，最终确定的薄层鉴别方法如下：
[0044]
供试品溶液的制备：取本品2ml，用2％氢氧化钠溶液10ml振摇提取，提取液用稀盐酸调节ph3-5，用三氯甲烷10ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供
试品溶液。
[0045]
对照药材溶液的制备：另取血竭对照药材0.4g，加茶油4g置于坩埚中浸泡48h后加热约200℃炼制4h，滤过，取滤液200μl，加石油醚10ml使溶解，同法制成对照药材溶液。
[0046]
阴性对照溶液的制备：取与供试品量相当的血竭阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。
[0047]
薄层板：硅胶g薄层板。
[0048]
点样：上述溶液溶液各10μl。
[0049]
展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇(8:2:1)。
[0050]
展开方式：上行展开。
[0051]
检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，稍加热，紫外灯(365nm)下检视。
[0052]
结果：取供试品四批，按上述条件试验。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同蓝色斑点。结果重现性好，阴性对照无明显干扰，结果见图1。
[0053]
实施例2.方法学考察
[0054]
1.不同薄层板的比较：取德国默克及青岛海洋两种品牌的预制硅胶g薄层板，分别按拟定的方法试验。结果见图2-3，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无明显干扰。
[0055]
2.不同湿度的比较：使用氯化钙及蒸馏水调节培养箱的相对湿度，取点样后的薄层板，分别在低相对湿度(33.6％)和高相对湿度(87.7％)的培养箱内进行展开。结果见图4-5，在相对湿度33.6-87.7％条件下试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无明显干扰。
[0056]
3.不同温度的比较：取点样后的薄层板，分别在低温(冰箱内，8.9℃)和高温(培养箱内，37.1℃)的条件下进行展开。结果见图6-7，在温度8.9-37.1℃条件下试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无明显干扰。
[0057]
对比例1.
[0058]
该对比例与实施例1相比，区别在于：使用的展开剂为石油醚：乙酸乙酯(2:1)，其他条件与实施例1相同。
[0059]
结果见图8，色谱相应的位置上无斑点，无法进行血竭的检测。
[0060]
实验例1.样品测定
[0061]
44批供试品按上述实施例1的方法进行检验，结果发现其他公司x及广东其他公司y个别批次二天油样品不合格，对照药材斑点相应位置斑点不够清晰。其余批次均符合规定，斑点清晰，本方法分离效果良好，见图9-12，结果总结见表2。
[0062]
表2.二天油各批次薄层鉴别结果
[0063]
[0064][0065]
以上仅为本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。