一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种提高黄巧薄层色谱鉴定的方法。
【背景技术】
[0002] 本品为豆科植物蒙古黄巧或膜芙黄巧的干燥根，春、秋二季采挖，除去须根和根 头，冲洗干净，润透，趁鲜切厚片，干燥，称为"黄巧片"，本品表面淡栋黄色或淡栋褐色，有不 整齐的纵沟纹或纵沟。质硬而初，断面纤维性强，并显粉性，皮部黄白色，木部淡黄色，有放 射状纹理和裂隙。气微，味微甜，嚼之微有豆腥味。
[0003] 中药质量标准的工作现已全面展开，中医药学者结合当前质量标准研究中有关问 题，提出了一些看法。首先是标题的拟定，最好能体现出检验方法的建立和标准规格的制定 两项内容，其次重要的是鉴别实验，主要解决被检药物的真伪问题，有性状鉴别、显微鉴别 和理化鉴别等。理化鉴别中除一般的化学实验如颜色反应外，当前大量应用的是层析法， 而又W薄层层析应用最广泛，因其简便、易行、灵敏度高、专属性强，具有分离与鉴定双重功 能，特别适用于成分复杂的中药及其制剂的鉴别，只要一些特征斑点具再现性，就可作为确 认依据，在薄层实验中可W选用化学单体、提取物、药材对照品等来做对照鉴别。
[0004] 中国药典2010,（附录VIB)，提供了照薄层色谱法试验，通过对样品加热回流，滤 过，滤液加于中性氧化侣柱，收集洗脱液，蒸干，残渣溶解，提取、洗涂等步骤完成，作为供试 品溶液，进行点样，但是其需要过中性氧化侣柱，成本高，其色谱清晰度不高。
【发明内容】
[0005] 本发明为了克服现有技术中上述不足问题，提供一种提高黄巧薄层色谱鉴定的方 法，在回流过滤后的残渣中加入了皂化液皂化，方法简单，除杂质效果明显且提高了黄巧甲 巧在色谱中的清晰度。
[0006] 为了实现上述目的，本发明一种提高黄巧薄层色谱鉴定的方法包括W下步骤：
[0007] (1)首先将黄巧研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入Ξ氯甲烧-正 下醇75ml，加热回流，化后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8血-10血的K0H-甲醇皂 化液，置于60°C-65°C恒溫水浴30min-40min;滤过，再次加入8血-10血的K0H-甲醇皂化 液，置l〇〇°C水浴加热回流0. 5-比，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入 2血甲醇使黄巧残渣充分溶解后，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙醋萃取两次，每 次30mU蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，运个作为供试样；
[0008] (2)吸取5μ1上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取 出，再惊干，置化-Ρ10Α观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可W很 稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内澄黄色显色较为 稳定，即可判断为黄巧。
[0009] 所述的步骤（1)中Ξ氯甲烧与正下醇体积比为2 :1。
[0010] 所述的步骤（1)中超声提取功率为40-90W，超声溫度是4°C-10°c，提取1-4次。
[0011] 所述的步骤（1)中所述的中KOH-甲醇皂化液质量浓度：20%。
[0012] 所述的步骤（2)中所述的展开剂为：Ξ氯甲烧与正己烧，其中Ξ氯甲烧：正己烧= 3:1。
[0013] 所述的步骤（2)中所述的展开剂为：石油酸与乙酸乙醋，其中石油酸：乙酸乙醋= 7:1。
[0014] 本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明在初次回流过滤后的残渣中加入了 造化液皂化，方法简单，除杂质效果明显，解决了黄巧甲巧在色谱中的清晰度不高的问题， 是一种准确、清晰而又快速的鉴别黄巧的方法。
【附图说明】
[0015] 图1为日光灯黄巧片薄层色谱鉴别图，S-黄巧甲巧对照品，1-10号为黄巧样品。
[0016] 图2为紫外光灯黄巧片薄层色谱鉴别图，S-黄巧甲巧对照品，1-10号为黄巧样品。
【具体实施方式】
[0017] W下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但是本发明所保护的权利范围不仅 限于W下实施例。
[0018] 本发明的实验方法及参数：
[001引 1.主要材料：
[0020]
[0021]
[00过 2.主要试剂：
[002引Ξ氯甲烧，正下醇，K0H，甲醇，乙酸乙醋，正己烧，石油酸，乙酸乙醋。硅胶G薄层 板、聚酷胺薄板，蒸馈水，90 %乙醇溶液等。
[0024]实施例1
[00巧](1)首先将10种产地不同的黄巧材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精 确称取该粉末2g，加入体积比为2 :1的Ξ氯甲烧-正下醇75ml，加热回流，化后，过滤，然 后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20%，8mL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;滤过，再次加入8mL的K0H-甲醇皂化液，置100°C水浴加热回流比，蒸干，残渣加水 30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄巧残渣充分溶解后，超声提取30min，超 声功率为50W，超声溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取两次，每次3〇1^，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，运个作为供试样；
[0026] (2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为Ξ氯甲烧： 正己烧=3 :1，先展开，再取出，再惊干，置化-Ρ10Α观片灯下，最后拍照，在薄板上可W很稳 定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内澄黄色显色较为稳 定，即可判断为黄巧。参见图1。
[0027] 实施例2
[0028] (1)首先将10种产地不同的黄巧材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精 确称取该粉末2g，加入体积比为2 :1的Ξ氯甲烧-正下醇75ml，加热回流，化后，过滤，然 后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20%，8mL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;滤过，再次加入8mL的K0H-甲醇皂化液，置100°C水浴加热回流比，蒸干，残渣加水 30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄巧残渣充分溶解后，超声提取30min，超 声功率为50W，超声溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取两次，每次3〇1^，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，运个作为供试样；
[0029] (2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为Ξ氯甲烧： 正己烧=3 :1，先展开，再取出，再惊干，日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可 W很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内澄黄色显色 较为稳定，即可判断为黄巧。参见图2。
[0030] 实施例3
[0031] (1)首先将10种产地不同的黄巧材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精 确称取该粉末3g，加入体积比为2 :1的Ξ氯甲烧-正下醇75ml，加热回流，化后，过滤，然 后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20%，lOmL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;滤过，再次加入lOmL的KOH-甲醇皂化液，置100°C水浴加热回流比，蒸干，残渣加水 30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄巧残渣充分溶解后，超声提取30min，超 声功率为50W，超声溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取两次，每次30血，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，运个作为供试样；
[0032] (2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为石油酸：乙 酸乙醋=7 :1，先展开，再取出，再惊干，置化-Ρ10Α观片灯下，最后拍照，在薄板上可W很稳 定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内澄黄色显色较为稳 定，即可判断为黄巧，同样能够得到清晰的色谱鉴定图。
【主权项】
1. 一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 首先将黄芪研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁 醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化 液，置于60°C-65°C恒温水浴30min-40min;滤过，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液， 置100°C水浴加热回流0. 5-lh，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL 甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次 30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样； (2) 吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取出，再 晾干，置几-PlOA观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可以很稳定 的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定， 即可判断为黄芪。2. 根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤 1)中三氯甲烷与正丁醇体积比为2:1。3. 根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤 1)中超声提取功率为40-90W，超声温度是4°C-10°C提取1-4次。4. 根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤 1)中所述的中KOH-甲醇皂化液质量浓度：20%。5. 根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤 1)中的展开剂为：三氯甲烷与正己烧，其中三氯甲烷：正己烷=3 :1。6. 根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤 1)中所述的展开剂为：石油醚与乙酸乙酯，其中石油醚：乙酸乙酯=7 :1。
【专利摘要】本发明公开了一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，具体步骤如下：(1)首先将黄芪研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液皂化处理，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，加热回流0.5-1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取两次这个作为供试样，点样于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，解决了黄芪甲苷在色谱中的清晰度不高的问题，是一种准确、清晰而又快速的鉴别黄芪的方法。
【IPC分类】G01N30/90
【公开号】CN105403654
【申请号】CN201510923327
【发明人】马中森, 安莹娟, 赵洋洋, 董立定, 李慧林, 潘丽娟, 常文军, 李斌, 梁爱军, 李宏强
【申请人】陇西保和堂药业有限责任公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月11日