一种半琥珀酸拉米地坦及其有关物质的HPLC分析检测方法与流程

本发明属于药物新，涉及半琥珀酸拉米地坦6个杂质(工艺杂质)的分析测定方法。具体的为一种半琥珀酸拉米地坦及其有关物质的hplc分析检测方法。

背景技术：

1、为了更好的控制半琥珀酸拉米地坦的质量，提高药物的安全性，故需对半琥珀酸拉米地坦合成工艺中可能产生的杂质进行严格监控，杂质结构式如下所示。由结构式可知，杂质均具有紫外吸收，故我们考虑用高效液相色谱法对其进行检测。

2、

3、半琥珀酸拉米地坦。

4、

5、杂质a：(6-氨基吡啶-2-基)-(1-甲基哌啶-4-基)-甲酮二盐酸盐。

6、

7、杂质b:(1-甲基哌啶-4-基)-吡啶-2-基-甲酮。

8、

9、杂质c：[6-(2-羟基-乙氧基)-吡啶-2-基]-(1-甲基-哌啶-4-基)-甲酮。

10、

11、杂质d：2,6-二氟-n-[6-[(1-甲基-4-哌啶基)羰基]-2-吡啶基]苯甲酰胺。

12、

13、杂质e：2-((6-(1-甲基哌啶-4-羰基)吡啶-2-基)氧基)2,4,6-三氟苯甲酸乙酯盐酸盐。

14、

15、杂质f：(6-氯吡啶-2-基)-(1-甲基哌啶-4-基)-甲酮。

16、半琥珀酸拉米地坦属于3类创新药物，目前尚无半琥珀酸拉米地坦及其有关物质分析检测方法的相关报道。本发明提供的一种检测分析方法，采用的流动相a为缓冲盐溶液与几种有机溶剂的组合，流动相b为几种有机溶剂的组合，能一次性分离7种化合物，包括半琥珀酸拉米地坦及合成工艺过程中可能产生的杂质副产物。流动相a中缓冲盐所占的比例量与溶液的高ph值，既保证了半琥珀酸拉米地坦与各杂质在分析过程中溶解性，又避免了溶剂效应，各峰峰形良好；梯度洗脱程序参数的设置使各杂质和主峰保留时间适宜，分离度良好，可用于各杂质与半琥珀酸拉米地坦的定性及定量。

技术实现思路

1、本发明提供一种半琥珀酸拉米地坦及其有关物质的高效液相色谱检测方法，可以快速、灵敏、准确、可靠地检测半琥珀酸拉米地坦及其有关物质，该方法专属性高，耐用性好，有利于有效的检测和控制产品质量，对半琥珀酸拉米地坦产品的制备具有重要的意义。

2、本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：

3、一种半琥珀酸拉米地坦及其有关物质的高效液相色谱检测方法，所述有关物质为：

4、杂质a：(6-氨基吡啶-2-基)-(1-甲基哌啶-4-基)-甲酮二盐酸盐，结构式为

5、杂质b：(1-甲基哌啶-4-基)-吡啶-2-基-甲酮，结构式为

6、杂质c：[6-(2-羟基-乙氧基)-吡啶-2-基]-(1-甲基-哌啶-4-基)-甲酮，结构式为

7、杂质d：2,6-二氟-n-[6-[(1-甲基-4-哌啶基)羰基]-2-吡啶基]苯甲酰胺，结构式为

8、杂质e：2-((6-(1-甲基哌啶-4-羰基)吡啶-2-基)氧基)2,4,6-三氟苯甲酸乙酯盐酸盐，结构式为

9、杂质f：(6-氯吡啶-2-基)-(1-甲基哌啶-4-基)-甲酮，结构式为

10、本发明所述半琥珀酸拉米地坦结构式为

11、所述检测方法包括以下步骤：

12、(1)配制系统适用性溶液

13、(1-1)制备半琥珀酸拉米地坦对照品溶液和杂质对照品溶液：

14、分别取杂质a对照品、杂质b对照品、杂质c对照品、杂质d对照品、杂质e对照品、杂质f对照品，用溶剂配制成各杂质对照品混合贮备液；

15、取半琥珀酸拉米地坦对照品和所述各杂质对照品贮备液，用溶剂配制成系统适用性溶液；

16、(1-2)制备供试品溶液：

17、取半琥珀酸拉米地坦待测样品适量，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含1mg半琥珀酸拉米地坦待测样品的溶液，作为供试品溶液；

18、所述的溶剂选自水、乙腈、四氢呋喃和甲醇中一种或两种以上的混合；

19、(2)色谱条件：

20、色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；

21、检测波长为210nm～220nm，优选的，波长214～216nm；

22、采用流动相a和流动相b，进行梯度洗脱，

23、所述流动相a为ph9.0-11.0缓冲盐水溶液或ph9.0-11.0缓冲盐水溶液与有机溶剂的混合，所述缓冲盐水溶液的浓度为5mmol/l～10mmol/l；

24、优选的，缓冲盐选自乙酸盐、磷酸盐和甲酸盐中的一种；

25、进一步优选的，所述缓冲盐为磷酸盐；

26、所述流动相b为乙腈-甲醇溶液或乙腈-四氢呋喃溶液；

27、流动相的流速为0.5～1.5ml/min，优选的，流速0.8～1.2ml/min；

28、柱温为20℃～40℃，优选的，柱温28～32℃；

29、(3)测定：

30、取步骤(1)的供试品溶液5μl～50μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

31、进一步的，步骤(1)所述溶剂为水与乙腈的混合；

32、优选的，所述的溶剂是体积比为(90-70):(10-30)的水与乙腈的混合；

33、进一步优选的，所述的溶剂是体积比为90:10的水与乙腈的混合。

34、进一步的，步骤(1-1)所述杂质对照品混合贮备液中，杂质a对照品的浓度为50～200μg/ml，其余各杂质对照品的浓度均为10～50μg/ml；

35、优选的，杂质a对照品的浓度为100μg/ml；

36、优选的，其余各杂质对照品的浓度均为30μg/ml。

37、进一步的，步骤(1-1)所述系统适用性溶液中半琥珀酸拉米地坦的浓度为0.3～0.8mg/ml，优选的，步骤(1-1)所述系统适用性溶液中半琥珀酸拉米地坦的浓度为0.5mg/ml；

38、进一步的，步骤(1-1)所述系统适用性溶液中，杂质a的浓度为2～10μg/ml，其余各有关物质的浓度均为1～5μg/ml；

39、优选的，步骤(1-1)所述系统适用性溶液中，杂质a的浓度为5μg/ml；

40、优选的，步骤(1-1)所述系统适用性溶液中，其余各有关物质的浓度均为1.5μg/ml。

41、进一步的，步骤(2)所述所述缓冲盐水溶液为磷酸盐缓冲溶液，其浓度为10mmol/l，并且用氢氧化钠调节ph至10.0。

42、进一步的，步骤(2)所述流动相a为ph9.0-11.0的磷酸盐缓冲溶液与甲醇、乙腈的混合；

43、优选的，步骤(2)所述流动相a为体积比为(95-85):(1-8):(4-7)的ph9.0-11.0的磷酸盐缓冲溶液与甲醇、乙腈的混合；

44、进一步优选的，步骤(2)所述流动相a为体积比为95:2:3的ph9.0-11.0的磷酸盐缓冲溶液与甲醇、乙腈的混合。

45、进一步的，步骤(2)所述流动相b中乙腈与甲醇或乙腈与四氢呋喃的体积比为100:0～60:40；优选的，步骤(2)所述流动相b为体积比为60:40的乙腈-甲醇溶液。

46、进一步的，步骤(2)所述梯度洗脱的程序为：

47、

48、进一步的，步骤(2)所述波长为215nm；流动相的流速为1.0ml/min；柱温为25～35℃，优选的，柱温为30℃；步骤(3)所述进样体积为10μl。

49、进一步的，步骤(3)还包括按照峰面积归一化法计算半琥珀酸拉米地坦待测样品中半琥珀酸拉米地坦及杂质a-f的含量。

50、本发明的有益效果是：本发明利用方便快捷的高效液相色谱法，对半琥珀酸拉米地坦及其相关的6个杂质进行检测，各色谱峰之间的分离度均大于1.5，有利于有效的检测和控制产品质量。