阿伐那非中N,N’-二异丙基碳二亚胺的检测方法与流程

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测方法。

背景技术：

1、阿伐那非(avanafil)，化学名为4-[[(3-氯-4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-2-[(2s)-2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-n-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲酰胺，cas号为330784-47-9，分子式：c23h26cln7o3，分子量：483.95。

2、n,n’-二异丙基碳二亚胺(别名为二异丙基碳二亚胺，cas号为693-13-0，分子式：c7h14n2，分子量：126.20)为无色至淡黄色液体，是阿伐那非原料生产过程中的使用的试剂，可能会残留在阿伐那非中。在欧洲药典给出的基因毒性杂质之警示结构一文中明确指出了n,n’-二异丙基碳二亚胺具有基因毒性杂质警示结构，是一个潜在的基因毒性杂质，需要严格控制其残留量。

3、专利文献1报道了一种检测多肽中n,n’-二异丙基碳二亚胺的方法，其采用液相色谱与质谱联用的方法在其对照溶液浓度的10％处可以有效检测，检出限浓度为0.8μg/ml。但是液质联用的检测方式需要价格高昂的液质仪器才能进行测定，成本较高，并且采用液质联用的方式检测阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺时，阿伐那非和n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测峰重叠，不能区分，难以满足准确检测n,n’-二异丙基碳二亚胺含量的要求。

4、专利文献2报道了一种多肽中测定n,n’-二异丙基碳二亚胺含量的分析方法，该方法采用气相色谱(gc)通过直接进样的方式进行检测。但是，该方法的检测灵敏度为2μg/ml，不能满足更低浓度的n,n’-二异丙基碳二亚胺含量测定的检验要求。而阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的残留量极低，在ppm级，为了满足检测要求，需要增加溶液的进样浓度，这样容易污染仪器衬管，影响检测结果。

5、因此，需要一种操作简单、定量准确、灵敏度高且经济实用的分析方法，以测定阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺残留量的检测方法，这具有重大的质量控制意义，有助于提高用药的安全性。

6、现有技术文献

7、专利文献1：cn106153748b

8、专利文献2：cn113092646a

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，该方法定量准确、灵敏度高且经济实用。

2、为了实现上述目的，本发明的阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，包括以下步骤：

3、1)对照品溶液的制备：取n,n’-二异丙基碳二亚胺加入有机溶剂中，作为对照品溶液；

4、2)供试品溶液的制备：取阿伐那非样品加入与步骤1)相同的有机溶剂中，作为供试品溶液；

5、3)检测：将所述对照品溶液和所述供试品溶液分别至于顶空瓶中，采用顶空气相色谱法在下述条件下进行检测，

6、顶空平衡温度为60～120℃，顶空平衡时间为30～60分钟；

7、色谱柱采用胺类化合物分析柱，进样口温度为150～300℃；

8、采用程序升温，条件为：起始温度为100～150℃，维持0～25分钟，以20～50℃/min升温至220～260℃，维持10～25分钟；

9、采用氢火焰离子化检测器，检测器温度为230～300℃；以及

10、4)含量计算：采用外标法以峰面积计算阿伐那非样品中的n,n’-二异丙基碳二亚胺的含量。

11、在一个实施方式中，所述胺类化合物分析柱的长度为30m～60m，内径为0.25mm～0.53mm。

12、在一个实施方式中，所述胺类化合物分析柱为长度为30m、内径为0.53mm的cp-volamine分析柱。

13、在一个实施方式中，在步骤3)中，所述顶空平衡温度为90℃，所述顶空平衡时间为30分钟；所述进样口温度为200℃；所述程序升温的条件为：起始温度110℃，维持20分钟，以50℃/min升温至240℃，维持10分钟；所述检测器温度为250℃。

14、在一个实施方式中，所述对照品溶液与所述顶空瓶的体积比为1:10～1:5，所述供试品溶液中加入的溶剂与所述顶空瓶的体积比为1:10～1:5。

15、在一个实施方式中，所述有机溶剂为乙醇、n，n-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

16、在一个实施方式中，所述对照品溶液的浓度在3.00μg/ml～4.00μg/ml范围内。

17、在一个实施方式中，所述供试品溶液中阿伐那非的浓度为0.2g/ml～0.8g/ml。

18、在一个实施方式中，在步骤3)中，气相色谱中使用的载气为高纯度氮气或氦气。

19、本发明的阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测方法采用常规的气相色谱仪，检测和维护成本低，操作简便，采用顶空进样的方式，进样精密度高，检出限溶液浓度为0.4μg/ml，满足更低浓度的n,n'-二异丙基碳二亚胺含量测定的检验要求，采用胺类化合物分析柱能够使色谱峰更好地分离，有利于n,n’-二异丙基碳二亚胺的检出，同时可以有效改善峰型，提高检测结果的准确性和精密度。本发明提供的阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的残留量的检测方法精密度、准确度高，重现性好，可用于阿伐那非的质量控制及综合评价，为提高和控制阿伐那非的质量提供了可靠保障。

技术特征：

1.一种阿伐那非中n,n’-二异丙基碳二亚胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述胺类化合物分析柱的长度为30m～60m，内径为0.25mm～0.53mm。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其中，所述胺类化合物分析柱为长度为30m、内径为0.53mm的cp-volamine分析柱。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，在步骤3)中，

5.根据权利要求1所述的检测方法，其中，

6.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述有机溶剂为乙醇、n，n-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述对照品溶液的浓度在3.00μg/ml～4.00μg/ml范围内。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述供试品溶液中阿伐那非的浓度为0.2g/ml～0.8g/ml。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其中，在步骤3)中，气相色谱中使用的载气为高纯度氮气或氦气。

技术总结
本发明涉及一种阿伐那非中N,N’‑二异丙基碳二亚胺的检测方法，包括以下步骤：1)取N,N’‑二异丙基碳二亚胺加入有机溶剂中，作为对照品溶液；2)取阿伐那非样品加入与步骤1)相同的有机溶剂中，作为供试品溶液；3)检测：将对照品溶液和供试品溶液分别至于顶空瓶中，采用顶空气相色谱法在下述条件下进行检测：顶空平衡温度为60～120℃，顶空平衡时间为30～60分钟；色谱柱采用胺类化合物分析柱，进样口温度为150～300℃；采用程序升温，条件为：起始温度为100～150℃，维持0～25分钟，以20～50℃/min升温至220～260℃，维持10～25分钟；采用氢火焰离子化检测器，检测器温度为200～300℃。4)含量计算：采用外标法以峰面积计算阿伐那非样品中的N,N’‑二异丙基碳二亚胺的含量。该方法检测灵敏度高。

技术研发人员：梁兴华,刘小龙,王标,李家荣,邬光卫,陶鲜娇,黄建金
受保护的技术使用者：昆明积大制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/20