一种复方罗布麻颗粒UPLC特征图谱的建立及检测方法与流程

本发明属于中药质量控制，具体涉及一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立及检测方法。

背景技术：

1、复方制剂复方罗布麻颗粒是由罗布麻叶、山楂、菊花三味药材经提取制备而成，具有清热，平肝，安神的功效，用于高血压、神经衰弱引起的头晕，心悸，失眠等症。复方罗布麻颗粒剂经溶解后口服给药，产品具有剂量准确、溶解迅速、便于吸收、起效快、口感好、携带保存方便、服用量小、性质稳定等特点。其中，罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻的叶，夏季采收，除去杂质，干燥，用于肝火炽盛之头痛眩晕、惊风抽搐，有降低血压的作用。国家药典委员会于2013-08-13公示了“关于2010年版《中国药典》(一部)增补本品种及药品标准提高修订公示”附件24复方罗布麻颗粒质量标准公示稿，对该品种质量标准进行了提高，但至今2020年版《中国药典》仍未收录该品种。该品种2013年药典公示标准中，含量测定方法为hplc法测定金丝桃苷的含量，未进行特征图谱鉴别；现有技术中也无复方制剂复方罗布麻颗粒的hplc特征图谱。

2、鉴于此，需要研发针对复方罗布麻颗粒中的罗布麻叶、菊花、山楂3味药材建立专属性、准确性以及耐用性强的复方罗布麻颗粒的特征图谱和含量测定方法。

技术实现思路

1、目前复方罗布麻颗粒现有检测方法中，大多检验罗布麻叶的金丝桃苷含量或者总黄酮含量，没有特征图谱鉴别方法；也没有针对复方罗布麻颗粒中的罗布麻叶、菊花、山楂3味药材建立含量测定方法。因此本发明提供了一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立及检测方法，该方法可以全面、有效的控制复方罗布麻颗粒的质量。

2、本发明的技术方案是：

3、一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立方法，包含如下步骤：

4、s1、参照物溶液的制备：

5、对照药材参照物溶液：

6、将罗布麻叶对照药材、菊花对照药材和山楂对照药材混合，加水，加热回流提取，放冷，滤过，作为对照药材参照物溶液；

7、对照品参照物溶液：

8、分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷对照品，加溶剂分别制成新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷的对照品溶液，作为对照品参照物溶液；

9、s2、供试品溶液的制备：

10、复方罗布麻颗粒与溶剂混合，超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

11、s3、超高效液相色谱法测定：分别精密吸取步骤s1制得的参照物溶液和步骤s2制得的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪测定，得到复方罗布麻颗粒uplc特征图谱。

12、进一步地，步骤s3所述超高效液相色谱仪测定条件包括：

13、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；

14、流动相：以乙腈为流动相a，以0.09％-0.11％磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱；

15、流速：0.30-0.35ml/min；

16、检测波长：320-400nm；

17、柱温：28-32℃；

18、进样量：0.5-1.5μl。

19、更进一步地，步骤s3所述超高效液相色谱仪测定条件包括：

20、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；

21、流动相：以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱；

22、流速：0.33ml/min；

23、检测波长：360nm；

24、柱温：30℃；

25、进样量：0.5-1.5μl。

26、进一步地，梯度洗脱的洗脱程序为：

27、 时间/min 流动相a/％ 流动相b/％ 0 6 94 7 12 88 11 13 87 17 15 85 20 19 81 25 30 70 28 60 40 33 75 25 35 6 94 37 6 94

28、。

29、进一步地，步骤s3中所述的复方罗布麻颗粒uplc特征图谱有9个共有特征峰，其中1、2、3、4、5、6号特征峰分别为：1号-新绿原酸、2号-绿原酸、3号-隐绿原酸、4号-金丝桃苷、5号-异槲皮苷、6号-木犀草苷。

30、进一步地，以金丝桃苷参照物色谱峰相对应的峰为s峰，计算7号峰、8号峰、9号峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±10％范围之内，7号峰、8号峰、9号峰的规定值分别为：1.22、1.32、1.37。

31、进一步地，所述步骤s1中的溶剂为甲醇；所述步骤s2中的溶剂为70％甲醇。

32、进一步地，所述步骤s2中的超声时间30min，超声功率250w，超声频率为40hz。

33、而且，本发明还提供了一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的检测方法，包含如下步骤：

34、s1、参照物溶液的制备：

35、对照药材参照物溶液：

36、将罗布麻叶对照药材、菊花对照药材和山楂对照药材混合，加水，加热回流提取，放冷，滤过，作为对照药材参照物溶液；

37、对照品参照物溶液：

38、分别取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷对照品，加溶剂分别制成新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、木犀草苷的对照品溶液，作为对照品参照物溶液；

39、s2、供试品溶液的制备：

40、复方罗布麻颗粒与溶剂混合，超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

41、s3、超高效液相色谱法测定：分别精密吸取步骤s1制得的参照物溶液和步骤s2制得的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，按照上述的建立方法所采用的色谱条件进行检测，将检测得到的供试品溶液色谱图与上述的建立方法得到的复方罗布麻颗粒uplc特征图谱进行比较，计算相似度，对复方罗布麻颗粒uplc的质量进行评价。

42、并且，本发明还提供了一种复方罗布麻颗粒含量的uplc检测方法，包含如下步骤：

43、步骤①混合对照品溶液的制备：

44、取金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品加溶剂制成金丝桃苷对照品、异槲皮苷对照品的混合溶液，即得混合对照品溶液；

45、步骤②供试品溶液的制备：

46、按照上述的建立方法或上述的检测方法中的步骤s2供试品溶液的制备方法制备供试品溶液；

47、步骤③超高效液相色谱法测定：

48、分别精密吸取步骤①制得的混合对照品溶液和步骤②制得的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，按照上述的建立方法中的色谱条件进行检测，计算。

49、进一步地，步骤③中计算含量时的公式为：

50、；

51、其中，a样为供试品峰面积；a对为对照品峰面积；w对为对照品称样量；w样为供试品称样量；p为对照品含量p值。

52、本发明通过建立一种uplc方法，可以同时测定复方罗布麻颗粒中的金丝桃苷、异槲皮苷2种物质的含量，此外本发明方法还可以同时进行复方罗布麻颗粒的特征图谱鉴别，对复方罗布麻颗粒进行了快速定性和定量分析，可以全面、有效的控制复方罗布麻颗粒的质量。

53、与现有技术相比，本发明提供的一种复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立及检测方法，具有以下优势：

54、(1)本发明提供的复方罗布麻颗粒uplc特征图谱的建立方法可以检测到9个特征共有峰，填补了复方罗布麻颗粒检测技术领域的空白，能全面、有效的控制复方罗布麻颗粒的质量，该方法有良好的专属性、耐用性、精密度和稳定性重现性的同时，采用uplc技术建立指纹图谱，具有操作简便、分析速度快、准确性高的优势。

55、(2)本发明提供的复方罗布麻颗粒特征图谱建立、测定及含量测定方法，对复方罗布麻颗粒进行了快速定性和定量分析；且本发明提供的方法操作简便、专属性强，具有良好的精密度、稳定性和重现性，能快速全面地检测复方罗布麻颗粒中的主要化学成分，反映复方罗布麻颗粒的质量信息等优点，为复方罗布麻颗粒的生产及质量控制提供科学参考。