一种适用于连续分析玻色因和糖类物质的HPLC-ELSD分析方法与流程

本发明属于分析化学领域，涉及一种适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，特别涉及一种借助于蒸发光散射检测器(elsd)来连续分析和定量玻色因和糖类物质的高效液相色谱(hplc)分析方法。

背景技术：

1、玻色因化学名称为羟丙基四氢吡喃三醇，是一种具有抗衰老功能的木糖衍生物，并因其具有促进胶原蛋白合成的功效成为某些高端品牌公司抗衰产品的主要成分。

2、对于玻色因的分析方法已经有很多报道，现有技术中，cn115236218a报道了一种对于玻色因的hplc-cad分析方法，这篇报道采用高效液相色谱-电喷雾检测器来分析玻色因，其用乙腈来溶解和稀释玻色因，可分析的玻色因浓度范围为50～1000μg/ml。cn114705791a报道了一种利用配有电化学检测器的离子色谱来分析玻色因，此方法采用300mm naoh作为流动相，此方法能够检测玻色因的最大线性范围为0.7～140μg/ml。cn112730720a报道了一种hplc-示差折光法来检测玻色因的技术，此方法采用75％～85％乙腈作为流动相对其洗脱，并且采用的色谱柱为氨基柱，分析温度为65～72℃，此方法可分析的玻色因线性范围是5～25mg/ml。cn202011397334.9报道了可采用hplc-elsd检测玻色因中羟丙基四氢吡喃三醇及其非对映异构体含量，该专利采用酰胺键合相色谱柱作为分析柱，采用甲醇和乙腈作为流动相进行梯度洗脱来分析玻色因及其异构体。一次分析时间为29min，此方法检出限为27.041μg/ml，定量限为132.42μg/ml。

3、据报道，化妆品中，玻色因的起效浓度为2％，在高端化妆品中甚至会添加到30％。但各种化妆品中鲜少能明确标示出玻色因的含量。而即便有产品标示出相关浓度，也仅是其所含活性物质的浓度。如何快速而准确的检测玻色因的实际含量，对于相关产品的质量控制具有非常重要的意义。此外，由于产品中玻色因的用量范围很宽，目前的hplc检测方法测量范围均比较窄，如何拓宽玻色因的检测范围也是亟待解决的问题。

4、另外，在现有技术中，在检测过程中使用的流动相含有有机相，当分析完玻色因后切换成分析其他种类物质例如糖类物质时，不仅要对色谱柱柱进行清洗更换，更要配制新的流动相，对色谱柱进行前期清洗，而后再对其进行平衡，这就需要花费大概2小时的时间，然后还需要再变换分析程序，进行检测分析。然而最终有效的分析时间可能仅需要10到30min，这前后会造成大量的时间成本浪费，并且过程中产生大量的含有机相的废液，给后续处理带来困难，造成经济成本和环保成本的增加。如果能对检测方法进行统一，即采用相同的流动相和分析程序进行多种样品的检测，则可以减少由于更换方法导致的2小时的时间浪费，提高检测效率。

5、此外，随着人类环保意识日益增强，在检测或分析玻色因等物质的过程中如何减少有机相的使用，也是本领域技术人员重要的研究方向。

6、因此，亟待研究探寻一种更加通用的高效液相色谱法，对玻色因进行更加高效的检测，同时可以连续的测量多种样品，实现对于多种样品具有普适性，从而简化测量流程，节约时间成本、经济成本和环保成本的目的。

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、针对现有技术存在的问题，本发明的目的之一是解决如何快速准确地检测更宽浓度范围的玻色因样品的问题。

3、本发明的再一目的是解决如何在检测玻色因样品时流动相中不添加任何有机试剂，从而避免造成环境污染的问题。

4、本发明的另一目的是解决如何实现将玻色因和所有糖类的分析方法统一，避免切换样品分析时造成的等待时间过长导致的时间成本增加的问题。

5、本发明的又一目的是解决如何对多种物质定性的同时也可对每种物质实现准确定量的问题。

6、用于解决问题的方案

7、本发明涉及：

8、1、一种适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：

9、第一步：配制多个待测样品溶液，所述待测样品为包含玻色因和糖类物质中的一种或多种的样品；

10、第二步：设定液相色谱条件；

11、第三步：准备分析用流动相；

12、第四步：清洗色谱柱；

13、第五步：采用分析程序对其中一个待测样品进行测定，记录色谱图；

14、第六步：任意地根据各物质的标准曲线计算对应的含量；

15、第七步：采用超纯水清洗色谱柱1～5min；

16、第八步：重复第五步和第七步，对其他未测的待测样品依次进行测定；其中，所述分析用流动相仅为超纯水，采用的检测器为蒸发光散射检测器，色谱柱为糖柱。

17、2、根据项目1所述的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：所述待测样品为仅包含玻色因的样品。

18、3、根据项目1所述的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：所述待测样品为仅包含糖类物质的样品。

19、4、根据项目1至3中任一项所述的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：所述糖类物质为葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、赤藓糖醇、甘露糖、岩藻糖、2-岩藻糖基乳糖(2’-fl)、乳酰-n-新四糖、d-阿洛酮糖、木糖和n-乙酰氨基葡萄糖中的一种或多种。

20、5、根据项目1至3中任一项所述的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：所述糖柱为以钠形式存在的磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物组成的强阳离子交换树脂为填料的糖柱。

21、6、根据项目5所述的适用于糖类和玻色因的hplc-elsd分析方法，其特征在于：流动相为超纯水,流速为0.6ml/min。

22、7、根据项目1～3任一项所述的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，其特征在于：蒸发温度为70～85℃,雾化温度为55～70℃,色谱柱柱温为80～90℃，进样量为5～15μl，进样器温度为环境温度，载气为空气，载气流速为1～2l/min，待测样品采集时间为10～20min。

23、发明的效果

24、本发明发现了一种新的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法，仅以超纯水作为流动相和进行特定的参数设置，而不用添加任何有机试剂，就能够实现对玻色因的分析并可依据标准曲线对未知浓度样品进行浓度标定。

25、其次，本发明将糖类物质和玻色因的hplc分析方法进行了统一，使得玻色因和糖类物质一起进行分析时能够连续地进行分析，中间无需人为地进行色谱柱更换及重新调整仪器参数等操作，从而利于全程自动化的实现，大幅节省了时间成本。

26、再次,本发明可以实现14种物质分析方法的统一,但并没有用到任何有机试剂,仅采用超纯水即可达到预定的效果,不仅节省了危废处理的成本，更加利于环保。

27、本发明的适用于连续分析玻色因和糖类物质的hplc-elsd分析方法操作简单，连续分析测定糖类和玻色因样品时，节约大量的时间成本和经济成本，大大简化了操作的复杂性。并且通过对所述玻色因和所述糖类物质分别进行了线性分析，发现在较宽的浓度范围内都呈线性，这样就可以实现对更大浓度范围样品的浓度测定，从而减少因为稀释造成的误差。