左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法与流程

本发明涉及药物检测，具体涉及左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法。

背景技术：

1、左卡尼汀又称左旋肉碱(l-carnitine)，是哺乳动物能量代谢中必需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢。它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进其氧化分解，为细胞提供能量，又能将线粒体内产生的短链脂酰基输出。左卡尼汀可缓解其因体内缺乏引起的脂肪代谢紊乱、骨骼肌和心肌等组织的功能障碍。

2、左卡尼汀药物主要剂型有：左卡尼汀口服溶液、左卡尼汀注射剂等。

3、左卡尼汀易降解为丁烯酰甜菜碱，该杂质(丁烯酰甜菜碱)具有顺反异构体现象。左卡尼汀、顺式丁烯酰甜菜碱及反式丁烯酰甜菜碱结构近似，分离难度大。目前尚无分析方法对左卡尼汀(尤其是水溶液)中的顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱进行控制研究。

4、丁烯酰甜菜碱的cas号：144205-67-4，结构式如下：

5、

技术实现思路

1、本发明提供了一种可同时测定左卡尼汀(水溶液)中顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的方法，该方法操作简单，使用常规试剂、使用普通色谱柱、高效液相色谱仪及紫外检测器即可实现分析测定。

2、一种左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，采用hplc法，使用亲水作用的色谱柱；流动相为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合液，其中，乙腈的体积分数为48％-52％，磷酸二氢钾溶液的ph为4.5-4.9；控制流动相的流速0.4-0.6ml/min。

3、本发明发现，通过使用亲水作用的色谱柱可提高测试的稳定性。

4、根据本发明实施例，所用色谱柱为hilic色谱柱，硅胶为填充剂的色谱柱(agilentinfinitylab poroshell 120hilic，4.6mm×250mm，4μm)。

5、在大量研究基础上，本发明发现，选用上述流动相并控制流动相的流速0.4-0.6ml/min，可以提高顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的分离度。

6、其中，若流动相的流速低于0.4ml/min或高于0.6ml/min，则左卡尼汀及顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱分离度不佳

7、根据本发明实施例，控制流动相的流速为0.4ml/min、0.5ml/min或0.6ml/min。

8、此外，磷酸二氢钾溶液的ph对顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的分离度也有重要影响。若磷酸二氢钾溶液的ph低于4.5，则左卡尼汀与顺式丁烯酰甜菜碱完全重合；若高于4.9，则顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱分离度不佳。

9、根据本发明实施例，磷酸二氢钾溶液的ph为4.5、4.6、4.7、4.8或4.9。

10、可以采用常规的酸或碱溶液(例如氢氧化钠溶液)调整ph。

11、根据本发明实施例，所述流动相中乙腈的体积分数为48％、50％或52％。

12、根据本发明实施例，控制柱温25-35℃(例如25℃、30℃、35℃)，可以进一步提高顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的分离度。

13、根据本发明实施例，控制检测波长203-207nm，可以进一步提高顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的分离度。

14、根据本发明实施例，进样量为20μl。

15、根据本发明实施例，使用对照品顺式丁烯酰甜菜碱溶液，每1ml中约含顺式丁烯酰甜菜碱25μg，溶剂为50％乙腈。

16、根据本发明实施例，使用对照品反式丁烯酰甜菜碱溶液，每1ml中约含反式丁烯酰甜菜碱25μg，溶剂为50％乙腈。

17、根据本发明实施例，使用50％乙腈配制供试品溶液，每1ml供试品溶液中约含5mg左卡尼汀。

18、根据本发明实施例，待测样品可为左卡尼汀原料药、左卡尼汀口服溶液、左卡尼汀注射剂等。

19、根据本发明实施例，按外标法以峰面积计算供试品溶液中的顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的含量。

20、本发明测定方法可实现左卡尼汀中顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的同时测定，且分离度高，操作方便，重复性好，准确度高，更经济。

技术特征：

1.一种左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，采用hplc法，使用亲水作用的色谱柱；流动相为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合液，其中，乙腈的体积分数为48％-52％，磷酸二氢钾溶液的ph为4.5-4.9；控制流动相的流速0.4-0.6ml/min。

2.根据权利要求1所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，所用色谱柱为hilic色谱柱，硅胶为填充剂。

3.根据权利要求1或2所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，控制流动相的流速为0.4ml/min、0.5ml/min或0.6ml/min。

4.根据权利要求1-3任一项所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，磷酸二氢钾溶液的ph为4.5、4.6、4.7、4.8或4.9。

5.根据权利要求1-4任一项所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，所述流动相中乙腈的体积分数为48％、50％或52％。

6.根据权利要求1-5任一项所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，控制柱温25-35℃。

7.根据权利要求1-6任一项所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，控制检测波长203-207nm。

8.根据权利要求1-7任一项所述左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法，其特征在于，待测样品为左卡尼汀原料药、左卡尼汀口服溶液或左卡尼汀注射剂。

技术总结
本发明涉及药物检测，具体涉及左卡尼汀中顺式与反式丁烯酰甜菜碱测定方法。本发明采用HPLC法，使用亲水作用的色谱柱；流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合液，其中，乙腈的体积分数为48％‑52％，磷酸二氢钾溶液的pH为4.5‑4.9；控制流动相的流速0.4‑0.6ml/min。本发明可实现左卡尼汀中顺式丁烯酰甜菜碱与反式丁烯酰甜菜碱的同时测定，且分离度高，操作方便，重复性好，准确度高，更经济。

技术研发人员：陶秀梅,姚佳,邵正飞,王乐乐
受保护的技术使用者：北京诺康达医药科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15