一种生白口服液的含量测定方法与流程

本发明涉及中成药质量控制领域，具体涉及一种生白口服液的含量测定方法。

背景技术：

1、中药生白口服液是一种治疗癌症放化疗引起的白细胞减少的中药成方制剂，其主要是由淫羊藿、补骨脂、制附子、枸杞子、黄芪、鸡血藤、茜草、当归、芦根、麦冬和甘草制成，具有温肾健脾，补益气血的作用。《中国药典》(2020版)一部记载了采用高效液相色谱法测定中药生白口服液中淫羊藿苷的含量的方法，以乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2500。每1ml生白口服液中含淫羊藿以淫羊藿苷(c33h40o15)计，不得低于0.9mg。

2、周岚等(hplc同时测定仙灵骨葆胶囊中朝藿定c、淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素，第42卷，第10期，2011.10)公开了一种hplc同时测定仙灵骨葆胶囊中朝藿定c、淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素的方法。其中，流动相采用乙腈-水梯度洗脱，流动相为乙腈(a)-水(b)，梯度洗脱程序：0～5min，15％～20％a；5～10min，20％～30％a；10～30min，30～33％a；30～40min，33％～40％a；检测波长：250nm；柱温：25℃。理论塔板数按淫羊藿苷峰计大于5000。

3、目前，针对生白合剂(生白口服液)的含量控制是测定淫羊藿药材中淫羊藿苷的成分含量。考虑到生白合剂(生白口服液)由淫羊藿、补骨脂、制附子(黑顺片)、枸杞子、黄芪、鸡血藤、茜草、当归、芦根、麦冬和甘草11味中药制成。药味多，成分复杂。现有技术中采用控制淫羊藿苷的含量的方法，针对11味药材的复杂物质体系，该方法显得过于简单，不能全面、客观地反映生白口服液产品的内在质量。发明人结合生白口服液中各药味君臣佐使的配伍用法，探索得到的同时测定淫羊藿、补骨脂和甘草药材中有效成分的方法。

4、同时，本发明生白口服液中枸杞子、当归、黄芪和甘草药材中含有一定量的糖类和大极性的化合物，因此直接使用前述现有技术中针对仙灵骨葆胶囊的含量测定方法是不适用于本发明的。本发明技术方案是经过长期、大量摸索后得到的针对生白口服液的多组分含量的测定方法，为探索复杂物质体系的质量控制手段，提供了有意的帮助。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种生白口服液中朝藿定c、淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素和甘草酸铵的含量测定方法。本发明的方法采用高效液相色谱法同时测定淫羊藿、补骨脂和甘草三种药材中的5种成分，以实现高效、准确、全面评价生白口服液的质量控制和评价。

2、为实现上述目的，本发明是通过下述技术方案实现的：

3、一种生白口服液的含量测定方法，包括如下步骤：

4、步骤1、对照品溶液的制备：取朝藿定c对照品、淫羊藿苷对照品、补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品和甘草酸铵对照品适量，精密称定，加入甲醇制成溶液；

5、步骤2、供试品溶液的制备：精密量取生白口服液，置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，通过已处理好的固相萃取小柱，滤过，取续滤液，即得；

6、步骤3、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以甲酸溶液为流动相b，流动相梯度洗脱，流速为每分钟0.5ml～1.5ml；柱温为25℃～35℃；检测波长为200nm～300nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于10000；

7、步骤4、测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

8、进一步优选，本发明的方法包括如下内容：

9、所述步骤1中，对照品溶液的制备：取朝藿定c对照品、淫羊藿苷对照品、补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品和甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含朝藿定c70μg、淫羊藿苷150μg、补骨脂素15μg、异补骨脂素15μg和甘草酸铵100μg的混合溶液，即得。

10、所述步骤2中，供试品溶液的制备：精密量取生白口服液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2ml，继续通过已处理好的固相萃取小柱，用水5ml洗脱，弃去洗脱液，再用80％甲醇5ml洗脱，收集洗脱液，置5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

11、其中，所述固相萃取小柱为c18-e，500mg/3ml，用甲醇10ml预洗，水10ml平衡处理。

12、所述步骤3中，色谱条件：流动相梯度洗脱程序如下表

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15、所述步骤3中，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸溶液为流动相b，流动相梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为250nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于10000。

16、所述步骤4中，每1ml样品中含淫羊藿以朝藿定c和淫羊藿苷的总量计，不得少于1.45mg；含补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，不得少于0.20mg；含甘草以甘草酸计，不得少于0.60mg。

17、最有优选的，本发明是通过下述技术方案实现的：

18、一种生白口服液的含量测定方法，包括如下步骤：

19、步骤1、对照品溶液的制备：取朝藿定c对照品、淫羊藿苷对照品、补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品和甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含朝藿定c 70μg、淫羊藿苷150μg、补骨脂素15μg、异补骨脂素15μg和甘草酸铵100μg的混合溶液，即得；

20、步骤2、供试品溶液的制备：精密量取生白口服液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2ml，继续通过已处理好的固相萃取小柱，用水5ml洗脱，弃去洗脱液，再用80％甲醇5ml洗脱，收集洗脱液，置5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

21、其中，所述固相萃取小柱为c18-e，500mg/3ml，用甲醇10ml预洗，水10ml平衡处理；

22、步骤3、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％甲酸溶液为流动相b，流动相梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为250nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于10000；流动相梯度洗脱程序如下表

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24、步骤4、测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，每1ml样品中含淫羊藿以朝藿定c和淫羊藿苷的总量计，不得少于1.45mg；含补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，不得少于0.20mg；含甘草以甘草酸计，不得少于0.60mg。

25、本发明生白口服液是通过下述制备方法得到的：

26、步骤1、取重量份淫羊藿200-300份、补骨脂100-160份、制附子60-120份、枸杞子200-300份、黄芪200-300份、鸡血藤200-300份、茜草200-300份、当归100-160份、芦根200-300份、麦冬100-160份和甘草100-160份，备用；

27、步骤2、以上十一味，加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至25℃下的相对密度1.24～1.27，加乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，滤液回收乙醇，加水适量搅拌，用20％氢氧化钠溶液调ph值至7，加甜菊素，调整总量，搅匀，冷藏，滤过，灌封，灭菌，即得。

28、生白合剂(生白口服液)由淫羊藿、补骨脂、制附子(黑顺片)、枸杞子、黄芪、鸡血藤、茜草、当归、芦根、麦冬和甘草11味中药制成。药味多，成分复杂。现有技术中采用控制淫羊藿苷的含量的方法，针对11味药材的复杂物质体系，该方法显得过于简单，不能反映生白口服液产品的内在质量。

29、为此，本专利发明人经过长期摸索后选择生白口服液处方中君药淫羊藿主要成分淫羊藿苷和朝藿定c，臣药补骨脂主要成分补骨脂素和异补骨脂素，佐药甘草主要成分甘草酸作为含量测定指标性成分。本方中枸杞子、当归、黄芪和甘草含有大量的糖类和大极性的化合物，因此选择固相萃取进行样品的纯化，选择适当的hplc分析条件，使获得的色谱峰的分离度好，便于含量的计算和测定。