本发明属于药物制剂领域，特别是涉及一种长效注射剂的体外溶出度的检测方法。具体采用流通池法对长效注射剂的体外溶出度进行检测。
背景技术：
：：1、长效注射剂(long-acting injection,lai)通常经皮下或肌内注射等途径给药，在注射位点形成药物储库发挥长效释放作用(参见fda.regulatory science researchreport:long-acting injectable formulations[s].2015和komal chaudhary等发表的题目为long-acting injectables:current perspectives and future promise[j].critrev ther drug carrier syst.2019；36(2):137-181.)长效注射剂包括微球、脂质体、混悬剂(纳米颗粒、纳米晶、微米颗粒)、原位凝胶剂等。相对于其他制剂，长效注射剂可使药物浓度在长时间内保持在最低有效阈值和安全阈值之间，延长药物的有效作用时间，减少不良反应，且由于用药频率的降低，还可以增加药物的依从性，减轻医疗负担。且主要用作类固醇和抗精神病药物的剂型。特别是纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂对于慢性疾病的有效长期管理也非常有帮助，例如用于精神分裂症维持治疗的1个月、3个月和6个月的帕潘立酮棕榈酸酯注射液；例如，单次注射曲安奈德混悬液可以将患者的治疗获益从数小时延长至数天或数周。2、在长效注射剂如纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂研发过程中，应该对生产工艺过程和工艺参数进行全面研究。例如，粒径及其分布对纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂生物学特性影响较大，其微小变化可能改变给药后体内纳米制剂的表面属性等理化性质，显著影响纳米粒的稳定性、体内分布和药物释放。通过合适的方法考察纳米注射剂的体外释放行为，可以有效地评估不同工艺过程和参数对药物释放的影响，并能一定程度上预测其生物利用度，对产品的质量控制、生产工艺优化以及生物等效性研究意义重大。3、但由于长效注射剂制备工艺复杂，有较高的技术壁垒，质量评估时存在突释效应大、体内外释药模型相关性差等问题，全球已经上市的长效注射剂种类并不多，例如在纳米混悬注射剂领域仅有双羟萘酸奥氮平、棕榈帕利哌酮酯、阿立哌唑(长效)、月桂酰阿立哌唑、丹曲林钠和美洛昔康获批，而国内除了进口棕榈酸帕利哌酮长效注射剂外，其他品种市场几乎空白。长效注射剂药物释放持续时间延长，再加上一些纳米/微米混悬注射剂中所含的药物量相对较高，在某些情况下可能会带来更高风险。因此，充分了解长效注射剂的处方设计和质量非常重要。其中，体外溶出度检测在长效注射剂的处方筛选和仿制药一致性评价研究中具有重要作用。4、溶出度系指活性药物从片剂、胶囊剂或颗粒剂等普通制剂在规定条件下溶出的速率和程度，在缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂及透皮贴剂等制剂中也称释放度(参考《中国药典2020版》0931)。采用合适的溶出方法检测药品的溶出度，一方面可以为企业控制产品质量提供保障，另一方面也可以为制剂研发过程中处方的筛选提供帮助。5、常规的溶出模式有篮法、桨法、小杯法、浆蝶法或转筒法等。上述几种溶出度检测方法多用于常规固体制剂，在新型制剂研究过程仍然存在一系列问题，例如长效注射剂的原料药粒径分布、形态、辅料等可能对释放度(溶出度)产生影响，并且由于释放时间长，这对溶出度装置以及溶出介质等都提出了新的要求，如何建立长效注射剂溶出度的体外-体内相关性(ivivc)也是本领域面临的难题。6、流通池法(flow-through cell method,ftc)作为一种新型的溶出度检查方法，有着广阔的应用前景。目前《美国药典》、《英国药典》、《欧洲药典》以及《日本药局方》中均已收载流通池法，但模拟长效注射剂体内溶出的研究还很少，且仍缺乏对方法的系统研究。特别是对于长效注射剂(纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂、微球、聚合物溶液、原位凝胶剂等)，目前还没有一种通用的体外方法，这也是目前在各国药典中缺少流通池法对长效注射剂体外释放度测试方法的原因。7、此外，长效注射剂体外溶出度检测时间较长(如1～10天，甚至长达3个月)，导致研发周期长，另外较长的检测周期对设备、溶出介质无菌保障等都提出了挑战。8、流通池仪器是由溶出介质的贮液池、用于输送溶出介质的泵、流通池和保持溶出介质温度的恒温水浴组成，接触介质与样品的部分均为不锈钢或其他惰性材料组成，垂直安装在一个带过滤系统装置上，以防止未溶解的颗粒从流通池顶部漏出(参考《中国药典2020》0931溶出度与释放度测定法)。9、但采用常规的流通池对长效注射剂进行溶出度检测仍然面临诸多难题，例如长效注射剂特别是粒径为微米或纳米级别的混悬注射剂，粒径分布、形态、晶型，微球注射剂的辅料类型、组成，原位凝胶剂的粒径、药液絮凝状态等可能影响体内释放行为，由于体内释放过程及环境更为复杂，体外模拟体内释放有较大难度；其次，检测过程中，存在严重的漏液问题，导致检测结果不准确，重现性差；另外，流通池法的实验参数对不同生产工艺的样品、样品粒度的区分性和重复性影响较大，各种检测参数难以确定。因此目前缺少一种较为有效的测定长效注射剂体外溶出的方法，以便于对长效注射剂进行处方设计、工艺设计、体内外溶出度相关性研究等。技术实现思路1、为了解决现有技术中存在的上述一个或多个问题，本发明提供了一种适用于长效注射剂的体外溶出度检测的通用方法。2、第一方面，提供一种长效注射剂体外溶出度检测方法，其中采用流通池法对长效注射剂中的药物进行溶出，包括以下步骤：3、a.将长效注射剂样品放置于流通池内；4、b.溶出介质从进液口进入流通池，对流通池内的药物进行溶解，然后溶有药物的溶出介质从出液口输出，在特定的时间点范围内对输出的样品进行采集；5、c.对采集样品中的药物浓度进行检测，计算得到特定时间点范围内的药物累积溶出率。6、上述方法中，所述长效注射剂是指用药后能在较长时间内持续释放药物以达到长效作用的制剂，具体的，所述长效注射剂是指给药周期不低于24h的注射剂，或者不低于1周，或者不低于2周，或者不低于4周，或者不低于1个月，或者不低于4周，或者不低于2个月，或者不低于3个月，或者不低于4个月，或者不低于6个月的注射剂；例如给药周期为24h(或1日)，或1～6周，或28天，或4周，或5周，或1个月，或2个月，或3个月，或4个月，或5个月，或6个月，或2～4周，或1年等。komal chaudhary等发表的题目为long-acting injectables:current perspectives and future promise[j].crit rev ther drug carriersyst.2019；36(2):137-181.中对长效注射剂进行了描述，其公开的内容通过引用结合到本发明中。7、在一个优选实施方案中，本发明所述的长效注射剂是指化学小分子药物作为活性成分的长效注射剂，按照释药机制分类，包括原料药水溶性较差，通过原料药缓慢地溶解和释放发挥缓释作用的长效注射剂，例如纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂；通过特定的辅料在给药部位缓慢持续扩散或降解，进而实现原料药长效释放的注射剂，例如微球注射剂、微囊注射剂、植入剂、原位凝胶剂。8、所述的纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂，是一种通过表面活性剂或高分子聚合物的稳定作用，将药物粒子以纳米级或微米级粒径分散在含有稳定剂的液体形式的亚微米胶态分散体系。纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂中药物与辅料制成的药物粒径在纳米级或微米级，通常纳米混悬注射剂中药物活性成分的粒径在1～2000nm，优选1～1000nm，例如200-300nm等，微米混悬注射剂中药物活性成分的粒径在1～100μm，优选1～50μm。所述的纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂中药物处于固体状态，适合该剂型的药物包括难溶于水或在水和油中都不溶解的药物；药物活性分子可以为前药，如带有长链脂肪酸，例如帕潘立酮棕榈酸酯(invega sustenna)注射剂是帕潘立酮棕榈酸酯的纳米晶体悬浮液，帕潘立酮棕榈酸酯是利培酮的活性代谢物帕潘立酮的前药。药物活性分子还可以配制成具有疏水性抗衡离子/构象物的盐或共晶，如奥氮平双羟萘酸盐(zyprexa relprev)注射剂是奥氮平的纳米晶体盐制剂，双羟萘酸作为反离子。作为纳米混悬注射剂的例子还包括阿立哌唑长效注射剂，月桂酰阿立哌唑注射液等。所述的纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂可制成水或油状混悬液，水状的混悬液的例子包括阿立哌唑长效注射剂(abilify maintena)、棕榈酸帕利哌酮注射液(1m,3m,6m)、注射用双羟萘酸奥氮平(zyprexa relprevv)、月桂酰阿立哌唑注射液(aritada)等。9、本发明所述微球注射剂是指采用生物可降解聚合为骨架材料，经微囊化技术，将药物包埋在直径仅几十毫米的圆形实体内的可注射混悬剂。微球注射剂将药物包埋或吸附在聚合物分子的表面，通过皮下或肌肉注射进入体内后，通过载体表面快速释放、药物扩散、聚合物的溶蚀降解等方式，实现药物的缓慢释放，常用的生物可降解聚合物例如聚乳酸(pla)、乳酸－羟基乙酸共聚物(plga)等。微球注射剂包括成孔性微球、双层微球以及磁性微球等多种结构形式。示例性的难溶性药物微球型注射剂包括：注射用利培酮微球(risperidal consta)，注射用纳曲酮微球(vivtrol)、醋酸奥曲肽等。10、所述微囊注射剂是指采用生物可降解聚合为骨架材料，经微囊化技术，将药物(囊心物)包裹而成药库型的微囊的可注射混悬剂。微球和微囊的粒径都属于微米级。11、所述植入剂的例子如醋酸戈舍瑞林缓释植入剂(zoladex depot)、地塞米松沿用植入剂等。12、所述原位凝胶(in situ hydrogel)又称即型凝胶，是一类以溶液状态给药后在用药部位发生相转变，由液体固化形成半固体凝胶的制剂。根据其载体材料在体内的原位固化机制不同，原位凝胶注射剂可以分为：热塑性糊状体、原位交联聚合物体系、原位聚合物沉淀体系和热诱导凝胶体系等。13、在优选的实施方案中，所述长效注射剂选自纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂、原位凝胶剂、微球注射剂和植入剂；进一步优选地，所述长效注射剂选自纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂。14、在本发明优选的实施方案中，所述长效注射剂中的活性成分为化学小分子药物；其中所述化学小分子药物可选自多种已知类别的药物，包括然而不限于：中枢神经系统用药物，如精神神经用剂、抗抑郁剂、抗癫痫剂、镇痛剂、抗焦虑剂、多巴胺能剂(抗帕金森氏病剂)、局部麻醉剂等，皮质类固醇药物、抗真菌剂、肿瘤学疗法、心血管剂、抗炎剂(如nsaid和cox-2抑制剂)、抗生素(包括青霉素)、抗糖尿病剂、抗组胺剂、抗高血压剂、抗毒蕈碱剂(antimuscarinic agent)、免疫抑制剂、抗病毒剂、α-肾上腺素能受体阻断剂、β-肾上腺素受体阻断剂、脂质调控剂、抗变态反应剂等。15、在优选的实施方案中，适合本发明所述的长效注射剂的实例包括但不限于以下列药物作为活性成分的长效注射剂：16、抗抑郁剂：阿莫沙平、西拉吲哚、盐酸马普替林、盐酸米安舍林、盐酸去甲替林、盐酸曲唑酮、顺丁烯二酸三甲丙咪嗪等。17、抗癫痫剂：贝克拉胺、酰胺咪嗪、氯硝西泮、乙基苯妥英、美索因、甲琥胺、甲基苯巴比妥、奥卡西平、甲乙双酮、苯乙酰脲、苯巴比妥、苯妥英、苯琥胺、普里米酮、舒噻嗪、丙戊酸、乙琥胺、扑米酮等。18、抗帕金森剂：甲磺酸溴麦角环肽、顺丁烯二酸麦角乙脲、左旋多巴、司立吉林、多巴胺；等。阿片类镇痛药、麻醉剂：右丙氧芬、二氢可待因、美普他酚、美沙酮、纳布啡、戊唑星、咪达唑仑、氯胺酮等。19、精神神经用剂：盐酸氯丙嗪、盐酸阿米替林、奈莫必利、氟哌啶醇、盐酸莫哌隆、奋乃静、阿地唑仑、阿普唑仑、哌甲酯、米那普仑、利培酮、丙戊酸钠、阿立哌唑、月桂酰阿立哌唑、布瑞哌唑、帕潘立酮、棕榈酸帕潘立酮等。20、抗真菌剂：两性霉素、硝酸布康唑、克霉唑、硝酸益康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黄霉素、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、纳他霉素、制霉菌素、硝酸硫康唑、盐酸特比萘芬、特康唑、噻康唑、十一碳烯酸等。21、皮质类固醇药物：倍氯米松、倍他米松、布地缩松、乙酸可的松、去氧米松、地塞米松、乙酸氟氢皮质酮、氟尼缩松、氟可龙、丙酸氟替卡松、氢化皮质酮、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙等。22、抗恶性肿瘤药：氟尿嘧啶、卡莫氟、盐酸阿柔比星、环磷酰胺、噻替派等。23、进一步优选地，所述长效注射剂选自含有精神神经用剂、抗抑郁剂、抗癫痫剂、镇痛药、多巴胺能剂(抗帕金森氏病剂)、局部麻醉剂、镇痛剂作为活性成分的长效注射剂。24、进一步优选地，所述长效注射剂中的活性成分选自阿立哌唑、月桂酰阿立哌唑、布瑞哌唑、帕潘立酮、棕榈酸帕潘立酮、西酞普兰、依西酞普兰草酸盐、氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、文拉法辛、度洛西汀、骆驼蓬灵、异丙肾上腺素、异羧酰胺、烟酰胺、优降宁、苯乙肼、司来吉兰、托洛沙酮、反苯环丙胺、溴法罗明、吗氯贝胺、阿米替林、阿莫沙平、布匹替林、氯米帕明、地昔帕明、地苯乙平、度硫平、多塞平、丙米拉明、依普利特、洛非拉明、美利曲林、去甲替林、奥匹拉莫尔、普鲁替林、曲美拉明、马普替林、米安色林、奈法唑酮、曲唑酮、乳清酸锂、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、拉莫三嗪、卡马西平、加巴喷丁、奥卡西平、托吡酯、氟哌啶醇、氯丙嗪、氟奋乃静、奋乃静、丙氯哌嗪、硫代哒嗪、三氟哌嗪、间甲哒嗪、丙嗪、三氟丙嗪、左氧丙嗪、异丙嗪、氯丙噻嗪、氨砜噻吨、珠氯噻吨、氯氮平、奥氮平、利培酮、丁螺环酮、喹硫平、氨磺必利、多巴胺、联苯芦诺、去甲氯氮平、丁苯那嗪、氟哌利多、洛沙平、美索达嗪、吗茚酮、匹莫齐特、丙氯拉嗪、硫利达嗪、替沃噻吨、三氟拉嗪、喹硫平或鲁拉西酮。25、长效注射剂根据api溶解度和剂量要求配制成特定的剂型。例如，水溶解度较高但每日剂量较低的药物最好作为生物可降解聚合物库(即原位凝胶、微球、脂质体、植入物)配制，而低溶解度和高剂量规格的原料药可作为结晶性药物悬浮液(如微米悬浮液或纳米悬浮液)配制，即纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂。26、特别优选地，所述长效注射剂中的活性成分选自阿立哌唑、布瑞哌唑、帕潘立酮、棕榈酸帕潘立酮、月桂酰阿立哌唑或鲁拉西酮。27、在一个优选实施方案中，所述长效注射剂选自阿立哌唑、布瑞哌唑、帕潘立酮、棕榈酸帕潘立酮、月桂酰阿立哌唑或鲁拉西酮的(微米或纳米)混悬注射剂。优选地，所述长效注射剂选自阿立哌唑的纳米或微米混悬注射剂，所述混悬剂中阿立哌唑的粒径为d50：1-10μm，优选2～7μm，如2.0μm、2.6μm、3.0μm、3.5μm、3.7μm、4.0μm、4.5μm、5.0μm或5.2μm及其之间的任意值。28、本发明所述的包含上述活性成分的长效注射剂的制备方法在本发明中并不作限制，只要其能具有本发明前述所限定的长效制剂的特征即可，例如给药周期不低于24h的微或纳米混悬注射剂、微球注射剂、微囊注射剂、植入剂、原位凝胶剂等，例如可以是市购，或者参考本领域已知的方法(如文献、教科书公开的方法)制备，也包括那些正在研究或未来研究的符合本发明定义的长效注射剂。举例说明的，例如cn1870980b、cn101801342b、cn1206347a、cn1160074c、cn106137985b、cn104363912a、cn104470499b、cn102526753b、cn106963746a、cn111603439a等公开了本发明所述的多种活性成分的长效注射剂的制备方法，这些文献公开的内容通过引用结合到本发明中。29、在一个更优选的实施方案中，本发明所述的长效注射剂为阿立哌唑注射剂，棕榈酸帕利哌酮注射液，或布瑞哌唑注射液；进一步优选，所述阿立哌唑注射剂与商品名为abilify maintena或abilify asimtufii的阿立哌唑注射剂处方相同或实质相同；所述棕榈酸帕利哌酮注射液与商品名为invega sustenna，invega trinza和/或invega hafyera的棕榈酸帕利哌酮注射液处方相同或实质相同。所述布瑞哌唑注射液优选为cn104363912a，cn104254530a，cn107536802a，cn104470499a等公开的方法制备的布瑞派唑注射液，这些文献公开的内容通过引用结合到本发明中。30、在优选的实施方式中，所述的长效注射剂给药途径包括皮内注射、皮下注射、肌内注射、静脉注射或其他(脊椎腔、动脉、心内、脑池内、关节腔、滑膜内、鞘内、穴位)，更优选地，所述长效注射剂是通过皮内注射、皮下注射、肌内注射、静脉注射给药，特别优选地，本发明所述长效注射剂是通过皮下注射或肌肉注射给药。31、进一步优选地，所述纳米混悬注射剂、微米混悬注射剂、微球注射剂通过肌肉注射。32、进一步优选地，所述原位凝胶注射剂通过皮下注射或者手术后直接缝合在皮下。33、上述方法中，步骤a所述的将长效注射剂样品放置于流通池内的方式可以有多种，例如将长效注射剂样品以包埋的方式加入到流通池，所述的包埋方式是指样品分散在玻璃珠缝隙中，例如说明书附图10(a)和(b)展示了样品以包埋方法加入到流通池之后的状态的实施例；在优选的实施方式中，所述包埋的方式通过向流通池内先加入一部分玻璃珠，然后加入长效注射剂样品，最后再加入剩余量的玻璃珠实现，或者将样品与玻璃珠混合均匀后加入到流通池内，也可以将玻璃珠和样品，分一次或多次交替加入到流通池；后者先向流通池内加入所有的玻璃珠，然后再加入长效注射剂样品；或者反过来，先向流通池中加入长效注射剂样品，然后再加入玻璃珠。在优选的实施方案中，采用包埋的方式加入长效注射剂样品和玻璃珠。34、长效注射剂样品加入到流通池的量在本发明中并不作限制，本领域技术人员可以根据研究目的、注射剂的使用剂量、规格、流通池体积等适当调整；例如对于标准规格的流通池(内径一般为10mm±0.2mm或22.6mm±0.2mm)而言，优选加入到流通池的样品中药物活性成分(即api)含量不高于1000mg，更优选不高于500mg，或不高于100mg，或不高于90mg，或不高于80mg，或不高于70mg，或不高于60mg，或不高于50mg，或不高于40mg，或不高于30mg，或不高于20mg，或不高于15mg，或不高于10mg，或不高于5mg等。在溶出介质中药物活性成分的溶解度越低，加入到流通池中药物活性成分含量越低。35、玻璃珠能够改变流通池中溶媒的流动状态，使之在流通池内形成层流状态、湍流状态或者二者的混合状态；同样与之对应的在流通池中不加入玻璃珠，溶媒以比较急促的方式流动，形成湍流方式，特别适合一些难溶性的药物。然而，与现有技术教导的不同，本发明虽然是检测难溶性药物的长效注射剂在体外的溶出度，但发明人意外地发现在流通池中加入玻璃珠，特别是玻璃珠的填充率达到80％～100％时，更能准确地评估长效注射剂中药物的缓释属性。因此，在本发明的优选实施方案中，步骤a所述的流通池中加入玻璃珠，其中流通池内玻璃珠的填充率为80％～100％，例如80％～99％，80％～98％，80％～95％，90％～100％，95％～100％，99％～100％，90％～99％，90％～95％，90％～98％，95％～98％等。本发明上下文中，所述填充率是指玻璃珠装填在流通池内后，流通池被玻璃珠填充的程度，需要说明的是，由于长效注射剂样品加入流通池后主要填充在玻璃珠缝隙中，长效注射剂样品在流通池中所占的体积可以忽略，因此，所述的流通池中玻璃珠的填充率是指忽略了流通池中长效注射剂样品所占体积后，玻璃珠在流通池内的填充率；另外，当流通池底端加入红宝石或大玻璃珠时，所述的流通池中玻璃珠的填充率是指同时除去红宝石或大玻璃珠所占体积之后的填充率，计算公式为：玻璃珠填充率＝加入到流通池中的玻璃珠体积/(流通池容量-红宝石或大玻璃珠所占体积)。红宝石和大玻璃珠通常直径大于流通池锥体底端进液口的直径，主要用于防止长效注射剂样品漏出；另外，发明人发现红宝石或大玻璃珠的加入对流通池内液体流动形式也有影响，进而影响长效注射剂中药物的释放属性以及体外评估准确性，因而在本发明的技术方案中，优选在流通池锥体底端放入红宝石或大玻璃珠，红宝石和大玻璃珠的直径大于流通池锥体底端进液口的直径，例如流通池锥体底端直径为0.8±0.05mm时，，红宝石或大玻璃珠的直径优选为5mm。36、流通池中填充的玻璃珠直径优选不大于红宝石或大玻璃珠的直径，例如为0.5～5mm，优选为0.5～2mm，如0.5～1mm，1mm～2mm等。37、上述方法中，所采用的流通池对长效注射剂中的药物进行体外溶出度检测时，可以采用闭环模式，也可以采用开环模式。所述闭环模式也称闭合式系统，是指循环式流通池法，即将样品置于流通池内，溶出介质通过流通池锥体下端的进液口进入流通池内，对流通池内的药物进行溶解，然后溶有药物的溶出介质从出液口输出至介质贮液池中，通过管路循环将溶出介质再从进液口进入流通池对药物溶解溶出，同时在特定时间内对输出的样品进行采集。开环模式也称开放式流通池法或开放式系统，与闭环模式的主要区别是溶出介质通过流通池后不再返回，溶出介质在通过含有样品的流通池后通过在特定时间点取样进行检测。38、发明人通过大量的实验研究和影响因素筛选发现，闭环模式对本发明所述的长效注射剂特别是微米或纳米混悬注射剂(如纳米混悬剂，特别是阿立哌唑长效注射剂)进行溶出度检测时不能够准确区分不同粒径对药物体外释放效果的影响，而采用开环模式能够实现这一目的。因此在本发明的上述方法中，优选采用开环模式进行体外溶出度检测，即：溶出介质通过流通池后，按照设置的取样时间取样，而溶出介质不再返回。39、步骤b中所述的特定的时间范围根据长效制剂的给药间隔不同而略有不同，通常在0～168h内设定时间点对样品进行采集，例如每间隔0.5h、1h、2h、4h、6h、8h或12h等设置一个取样点，在对样品进行采集时间点的设置上，本发明并不做限制，可以灵活调整，通常在检测的开始阶段，建议每隔10min，15min或0.5h设置一个取样点，随着溶出时间的延长取样间隔时间可逐渐拉大，比如间隔1h，2h或4h等，当取样时间范围较大，比如取样时间设置60h以上时，后续的取样时间间隔也可以设置到每隔8h甚至更长时间；优选地，在0～96h，0～48h，0～24h或0～16h等时间范围内每间隔0.5h、1h或2h取样。40、在一个优选实施方案中，对于给药间隔为24h的微米或纳米混悬注射剂，步骤b中所述的特定的时间点范围可以选择0～24h或0～16h范围内，每间隔10min，15min，0.5h、1h或2h取样检测，例如分别在0h，0.5h，1h，1.5h，2h，3h，4h，5h，6h，7h，8h，9h，10h，11h，12h，13h，14h，15h，16h，任选地还包括在17h，18h，19h，20h，21h，22h，23h，24h设置取样点。41、在一个优选实施方案中，对于给药间隔为4周(或1个月)的微米或纳米混悬注射剂，步骤b中所述的特定的时间点范围可以选择0～24h、0～48h或0～96h范围内，每间隔10min，15min，0.5h、1h、2h、4h或6h设置取样点；特别优选，步骤b中所述的特定的时间点范围选择0.5～48h，在包括0h，10min，25min，30min，45min，1h、2h、3h、4h，6h，8h，10h，12h，16h，20h，24h，30h，36h，42h和48h对样品进行采集；42、在另一个优选实施方案中，对于给药间隔为4周(或1个月)的微米或纳米混悬注射剂，步骤b中所述的特定的时间点范围可以选择0～24h、0～48h或0～96h范围内，每间隔10min，15min，0.5h、1h、2h、4h或6h设置取样点；特别优选的，步骤b中所述的特定的时间点范围选择0.5～48h，在包括0.2h，5h，1h、2h、3h、4h，6h，8h，10h，12h，16h，20h，24h，30h，36h，42h和48h对样品进行采集；43、在另一个优选实施方案中，对于给药间隔为4周(或1个月)的微米或纳米混悬注射剂，步骤b中所述的特定的时间点范围可以选择0～24h、0～48h或0～96h范围内，每间隔10min，15min，0.5h、1h、2h或4h设置取样点；特别优选的，步骤b中所述的特定的时间点范围选择0～48h，在包括0h，10min，25min，30min，45min，1h、2h、3h、4h，6h，8h，10h，12h，16h，20h，24h对样品进行采集；44、在一个优选实施方案中，所述给药间隔为4周(或1个月)的微米或纳米混悬注射剂为长效阿立哌唑注射剂、棕榈酸帕利哌酮注射液(1m)、依匹哌唑纳米混悬液(1m)；45、在一个优选实施方案中，所述给药间隔为3个月或6个月的混微或纳米混悬注射剂为棕榈酸帕利哌酮酯注射液(3m)或(6m)。46、上述方法中，步骤c所述对采集样品中的药物浓度进行测定，可以采用本领域常用的高效液相色谱法(hplc)或紫外色谱法(uv)对采集的样品进行药物浓度测定。hplc法具有专属性更强，受干扰可能性更低、精密度更高等优点，因此在优选的实施方案中选择hplc法进行长效注射剂的溶出度检测。例如通过高效液相色谱仪对采集样品中的药物浓度进行测定，计算得到特定时间点范围内的药物累积溶出率。具体地，根据长效注射剂中药物的微分溶出数据得到其累计溶出分数与溶出时间之间的累积溶出关系，其中：47、相邻间隔溶出率(dn)计算公式为：48、其中，cn表示时间点tn的实时浓度(μg/ml)，cn-1表示时间点tn-1的实时浓度(μg/ml)，v表示溶出介质流速(ml/min)，wsmp代表制剂投药量(供试品称量)，f表示长效注射剂中药物活性成分占比(w/w)。49、实时浓度c(μg/ml)通过hplc法测定，通过外标法计算得到。50、各点累计溶出率计算公式为：51、在本发明的优选实施方案中，所述溶出介质选自水、盐酸水溶液、磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液、表面活性剂中的一种或多种。表面活性剂可以单独作为溶出介质，或者与盐酸水溶液、磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液等共同使用；表面活性剂的加入可以改善介质的表面张力，增加溶解度，使得样品溶出速率增大。所述表面活性剂包括阴离子型、阳离子型、和非离子型表面活性剂，其中阴离子型表面活性剂例如十二烷基硫酸钠，牛磺酸钠或脱氧胆酸钠等；所述阳离子表面活性剂例如十六烷基三甲基溴化铵(ctab)或苄索氯铵1622等；所述非离子表面活性剂可以是吐温系列如吐温20，吐温80，吐温60等，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯月桂醇醚、泊洛沙姆等。更优选的所述表面活性剂选自十二烷基硫酸钠水溶液、十二烷基硫酸钠与0.1mol/l盐酸的溶液、吐温系列(如吐温20、吐温60、吐温80等)、泊洛沙姆等，特别优选所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠水溶液或吐温系列。52、对于特别难溶性药物的长效缓释注射液还可以加入有机溶媒如乙醇作为溶出介质。53、在本发明的优选实施方案中，所述溶出介质选自水、氯化钠溶液、盐酸溶液、醋酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，任选的加入表面活性剂或单独使用表面活性剂；其中所述氯化钠溶液通常为质量百分比为0.9％的氯化钠溶液()；盐酸溶液、醋酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液的浓度根据不同的药物及研究目的适当调整，例如，ph为5～7的磷酸盐缓冲液，ph为3～6的醋酸盐缓冲液。在本发明中特别优选所述溶出介质为质量百分比为0.9％的氯化钠水溶液、ph为5～7的磷酸盐缓冲液，如ph为5.0、5.3、5.5、5.6、5.7、6.0、6.5或6.8的磷酸盐缓冲液。更优选ph为5的磷酸盐缓冲液，例如由磷酸二氢钠和氢氧化钠配制的ph为5.0的磷酸盐缓冲液。54、在优选的实施方案中，所述溶出介质不包含表面活性剂，例如所述溶出介质选自水、氯化钠水溶液、盐酸溶液、醋酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液等。溶出介质的流速是决定流体动力“搅动”的主要参数。一般来说，溶出介质通过药室的流速越高，药物释放越快，然而在给定的时间释放的药物含量针对不同的剂型影响不同，例如薄膜包衣与糖包衣的含量是相反的，这可能与药物的释药机制、辅料、搅拌力等因素有关。溶出介质的流速一般建议在4～16ml/min的范围内选择，标准流速为4ml/min，8ml/min和16ml/min，文献报道并不建议使用更低的流量，当流量低于6ml/min时，溶出曲线会变得更加不稳定(参见jiang b.fang等，development and application of a biorelevant dissolution method using uspapparatus 4 in early phase formulation development，mol.pharmaceutics 2010,7,5,1466–1477)。然而在本发明的优选实施方式中，溶出介质以1～24ml/min的流速从进液口进入流通池，特别优选低流速，例如优选1～5ml/min，例如，1ml/min，2ml/min，2.4ml/min，2.8ml/min，3ml/min，4ml/min，4.8ml/min等；更优选2～4ml/min，最优选2～3ml/min。55、在一个具体实施方案中，当所述长效注射剂选自纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂时，所述溶出介质选自对长效注射剂中的药物的溶解度不高于0.5mg/ml的溶出介质，例如不高于0.4mg/ml，不高于0.3mg/ml，不高于0.2mg/ml，不高于0.1mg/ml，不高于0.01mg/ml等。本发明人发现对于这类长效注射剂，选择对药物的溶解度低的溶出介质，有利于检测结果的准确性，因此溶出介质对药物溶解度的下限在此不作限制，只要能够采用本领域已知的检测方法(如hplc法、uv法，lc-ms等)检测出药物在该溶出介质中具有溶解性，即使其溶解度非常低，但只要能检测出，这类溶出介质都适用于本发明，在优选的实施方案中所述溶出介质选自那些对长效注射剂中的药物的溶解度不高于0.5mg/ml同时不低于0.000001mg/ml的溶出介质。56、进一步优选，当长效注射剂选自原位凝胶剂、微球注射剂或微囊注射剂时，所述溶出介质选自酸性或弱碱性溶出介质。57、本发明中，所述溶出介质温度通常与模拟的人体温度相同或相似，优选所述溶出介质温度为32～38℃，进一步优选37～38℃，特别优选所述溶出介质温度恒定位37±5℃，溶出介质的温度由流通池仪器中的加热装置控制，如通过水浴加热。58、目前常用的流通池装置是由流通池、过滤装置(滤室)、金属筛网、支架(v字形)组成。在使用时，将药品(如片剂、胶囊等)放置在支架上。在本发明中，步骤a中所述的流通池与本领域技术人员认知相一致，其基本结构在《美国药典》、《英国药典》、《欧洲药典》以及《日本药局方》等中均有记载，例如《中国药典》2020版通则四0931溶出度及释放度测定方法第六法的图9和图10记载的大池和小池。本发明中对流通池的池子尺寸和大小及形状不作限制，只要其能够满足与相应的流通池仪器相配套使用即可。标准大流通池的内径为22.6mm±0.2mm，标准小流通池的内径为12mm±0.2mm(参见中国药典2020版通则四<0931>、美国药典<711>和欧洲药典<2.9.3>)是本发明优选的流通池；特别优选所述流通池为《中国药典》2020版通则四0931溶出度及释放度测定方法第六法记载的大池和小池。59、发明人在研究过程中意外地发现，在检测过程中在流通池内部添加密封装置有助于区分纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂中不同粒径的释放属性，进一步的研究发现，可能是由于流通池内添加密封装置后能很好地阻止混悬注射剂漏液问题。因此，在本发明的一个优选实施方案中，在所用的流通池内卡槽上安装有防止漏夜的密封装置，所述密封装置的材质应当是惰性的，不能明显吸附溶液中的有效成分，并且不能含有能被溶出介质提取的物质；在本发明的优选实施方案中，所述密封装置包括密封块和微孔滤膜，其中密封块的尺寸与流通池的内径吻合，更优选，所述密封装置包括硅胶密封块和微孔滤膜，所述微孔滤膜与密封块的上表面贴合；所述微孔滤膜可以为商品级的微孔滤膜，微孔滤膜孔径优选为0.1～10μm，0.5～8μm，0.5～5μm，1～4μm或2～3μm，如0.1μm，0.5μm，1μm，1.5μm，2μm，2.5μm，3μm，3.5μm，4μm，4.5μm，5μm，6μm，7μm，8μm，9μm，或10μm等及其任意两个数值之间的范围。60、另一方面本发明提供了所述的长效注射剂的体外溶出度检测方法在药物长效注射剂处方筛选和/或仿制药一致性评价研究中的应用；特别是在难溶性药物的纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂处方筛选过程中研究不同工艺过程、参数、粒径等对药物释放属性的影响。所述方法包括：通过采用本发明提供的长效注射剂的体外溶出度检测方法检测不同工艺过程和/或参数和/或粒径的难溶性药物的纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂的体外溶出释放属性，然后得出所测注射剂处方和/或工艺和/或粒径是否满足需求。61、另一方面本发明提供了一种流通池装置，包括流通池，所述流通池内靠中上部设有卡槽，卡槽上设有密封装置，密封装置可以用于避免未溶解的药物漏出；所述流通池的锥体底端为进液口，在使用时流通池锥体底端加入红宝石或大玻璃珠，玻璃珠放置在红宝石或大玻璃珠上方，药液和玻璃珠位于红宝石或大玻璃珠与密封装置之间。62、进一步优选，所述密封装置包括密封块和微孔滤膜，所述密封装置的材质应当是惰性的，不能明显吸附溶液中的有效成分，并且不能含有能被溶出介质提取的物质，例如硅胶材质的；所述微孔滤膜与密封块的上表面贴合，所述密封块的尺寸与流通池的内径吻合(如图1)。63、进一步优选地，所述密封装置包括硅胶密封块和微孔滤膜。64、进一步优选地，所述流通池装置采用前述的任意一种长效注射剂体外溶出检测方法。65、另一方面，提供了一种流通池仪器，其包含本发明所述的包含密封装置的流通池装置。66、另一方面，还提供了本发明所述流通池装置或流通池仪器在长效注射剂(特别是微米或纳米混悬注射剂)体外溶出度检测中的应用；进一步优选地，所述长效注射剂是选自中枢神经系统用药，如精神神经用剂、抗抑郁剂、抗癫痫剂、镇痛剂、抗焦虑剂、多巴胺能剂(抗帕金森氏病剂)或局部麻醉剂的长效注射剂；特别优选阿立哌唑、布瑞哌唑、帕潘立酮、棕榈酸帕潘立酮、右美托咪定、月桂酰阿立哌唑或鲁拉西酮的微米或纳米混悬长效注射剂。67、另一方面，还提供了一种长效注射剂体外溶出度检测方法，所述方法使用本发明所述的流通池装置或流通池仪器。68、在一个更具体的实施方式中，提供了一种纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂的体外溶出度检测方法，采用流通池法对纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂中的药物进行溶出，包括以下步骤：69、a.将微米或纳米混悬注射液放置于流通池内；70、优选地，所述微米或纳米混悬注射剂中的药物活性成分选自阿立哌唑、布瑞哌唑、棕榈酸派利哌酮、月桂酰阿立哌唑、或鲁拉西酮；71、优选地，所述纳米混悬注射剂，微米混悬注射剂的平均粒径在1～2000nm，如1～1000nm，1～100nm，20～50nm等；72、进一步优选地，所述长效注射剂样品以包埋的方式加入到流通池内；73、b.溶出介质从进液口进入流通池，对流通池内的药物进行溶解，然后溶有药物的溶出介质从出液口输出，在特定的时间点范围内对输出的样品进行采集；74、优选地，所述溶出介质选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、sds水溶液、吐温20、吐温80中的一种或多种；进一步优选地，所述磷酸盐缓冲液ph为5～7，sds水溶液质量百分比为0.1％～3％，如0.1％，0.25％，0.3％，0.5％，1.5％，2.5％，或3％，优选0.25％；75、优选地，所述溶出介质流速为1～24ml/min，更优选1～5ml/min，如1ml/min，2ml/min，2.4ml/min，2.8ml/min，3ml/min，4ml/min等；76、c.对采集样品中的药物浓度进行测定，计算得到特定时间点范围内的药物累积溶出率；优选通过高效液相色谱仪或紫外色谱法对采集样品中的药物浓度进行测定；77、优选地，所述特定时间点范围选自0～48h，更优选地，具体的样品采集时间点包括0.2h，5h，1h，2h，3h，4h，6h，8h，10h，12h，16h，20h，24h，30h，36h，42h和48h；78、其中流通池中玻璃珠的填充率为80％～100％，例如90％～99％，95％～99％等；所述玻璃珠直径为0.5mm～5mm，优选0.5～2mm；79、进一步优选地，所述流通池方法，采用开环模式；80、优选地，所述流通池采用本发明前述的添加密封装置的流通池装置。81、本发明可以实现以下有益效果：首先，本发明首次发现流通池中高填充率的玻璃珠，特别是填充率为80％～100％时，能够有效区分不同粒径和工艺参数制备的长效注射剂的体外溶出释放属性。82、进一步的，本发明还通过选择合适的测试条件如ph、溶出介质、流速、并结合加入高填充率的玻璃珠，能够有效区分不同粒度的长效注射剂特别是纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂的释放属性，可用于处方筛选、体内释放度预测，以及确保产品在日常生产中的质量。83、其次，本发明提供的方法大大缩短了几天、几周、几个月甚至更长时间的长效注射剂(如阿立哌唑长效注射剂、棕榈酸帕利哌酮注射液等)的体外溶出度检测周期，从而显著缩短长效注射剂的产品研发周期。84、第三，本发明在采用流通池法进行长效注射液体外溶出度检测时，通过在流通池内加入密封装置，有效改善了常规流通池检测方法中纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂等长效注射剂样品从流通池顶部漏液导致的实验可重现性差、不能准确区分不同粒度、处方对溶出度的影响的缺陷。85、第四，本发明提供的方法还克服了突释的问题；86、第五，本发明提供的方法重现性好，具有通用性，适合多种药物的长效注射剂，特别是纳米混悬注射剂或微米混悬注射剂在处方研究中的体外溶出度检测。当前第1页12当前第1页12