本发明涉及药物分析,尤其涉及竹节参标准汤剂的含量测定方法及特征图谱的构建方法。
背景技术:
1、本品为五加科植物竹节参panax japonicus c.a.mey.的干燥根茎。秋季采挖,除去主根和外皮,干燥。主产于云南、四川、贵州、陕西、广西等地。具有补虚强壮、止咳祛痰、散痹止血、消肿止痛之功效,用于病后虚弱、劳嗽咯血、咳嗽痰多、跌打损伤。化学研究表明,竹节参主要活性成分为多种皂苷类。药理实验表明皂苷类成分具有镇痛、强心、抗心肌缺血、抗疲劳、抗风湿等活性。
2、现有文献公开了采用高效液相色谱法测定竹节参皂苷iva含量的方法,色谱条件为:色谱柱inertsil ods-sp(4.6mm×l50mm,5μm),乙腈:0.2%磷酸溶液(35:65)为流动相;检测波长为203nm;流速为1.0ml/min,柱温为30℃。竹节参皂苷iva色谱峰与其它色谱峰分离良好,进样量在1.0076~10.0760μg范围内,呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为103.46%,rsd=0.81%(n=6)。现有文献还公开了建立鄂产竹节参药材的高效液相色谱法指纹图谱的方法,采用apollo c18(4.6mm*250mm,5um)色谱柱,乙腈:0.05%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1ml·min-1,检测波长203nm,柱温:30℃。测试样品10批,以竹节参皂苷v色谱峰为参照峰,确立4个共有峰作为竹节参药材特征峰,测得其含量分别为12.616、3.976、5.625、4.429mg·g-1。但以上方法的研究对象均为竹节参药材,与之不同的是,竹节参标准汤剂是由竹节参饮片经水提、浓缩、干燥等而成的冻干粉,与药材和饮片相比,已失去其固有的形态,以及对应的活性成分也有相应的变化。目前只对竹节参药材质量控制,难以全面反映其内在质量,而且竹节参高效液相定性及定量检测技术的文献报道较少。
3、因此,有必要建立一种竹节参标准汤剂的hplc含量测定及特征图谱构建方法,为有效控制和较全面评价竹节参标准汤剂的质量提供依据。
技术实现思路
1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明提出一种竹节参标准汤剂中人参皂苷ro、竹节参皂苷iva的含量测定方法及特征图谱构建方法,为竹节参标准汤剂的质量和一致性评价提供保障。
2、本发明的第一方面,提供一种竹节参标准汤剂中人参皂苷ro、竹节参皂苷iva的含量测定,通过高效液相色谱法测定,所述高效液相色谱法的条件包括:
3、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
4、以乙腈为流动相a,以体积百分数为0.1~0.3%的磷酸水溶液为流动相b,梯度洗脱;
5、所述梯度洗脱的条件为:
6、
7、表中百分号的含义为体积百分数。
8、根据本发明的一些实施例,采用外标法,通过高效液相色谱法测定。
9、根据本发明的一些实施例,所述流动相b为体积百分数为0.1~0.2%的磷酸水溶液;优选体积百分数为0.15%的磷酸水溶液。
10、根据本发明的一些实施例,所述色谱柱为welch ultimate aq-c18。
11、采用此色谱柱检测时,色谱峰的出峰时间适宜。
12、根据本发明的一些实施例,所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm,5μm。
13、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:流动相的流速为0.8~1.2ml/min;优选1.0ml/min。
14、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:色谱柱的柱温为35~40℃;优选40℃。
15、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:进样量为5~20μl;优选5μl。
16、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:检测波长为203nm。
17、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的检测器为紫外检测器。
18、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱的理论塔板数按人参皂苷ro、竹节参皂苷iva峰计算,不低于2000。
19、根据本发明的一些实施例,所述含量测定方法还包括供试品溶液的制备;所述制备步骤包括:将竹节参标准汤剂与溶剂混合,超声,即得。
20、根据本发明的一些实施例,所述供试品溶液的质量浓度为1~10mg/ml。
21、进一步地,所述供试品溶液的溶剂为醇溶液或醇水混合溶液。
22、更进一步地,所述溶剂为体积百分数为50~70%的甲醇水溶液、体积百分数为50~70%的乙醇水溶液或醇溶液;优选地,所述溶剂为体积百分数为50~60%的甲醇水溶液;更优选地,所述溶剂为体积百分数为60%的甲醇水溶液。
23、根据本发明的一些实施例,本发明所述超声条件包括以下i-iii中的至少一项:
24、i.功率:400~600w;
25、ii.频率:30~50khz;
26、iii.时间:20~50min。
27、根据本发明的一些实施例,所述含量测定方法还包括对照品溶液的制备,所述制备步骤包括:将对照品与溶剂混合,即得。
28、根据本发明的一些实施例,所述对照品为人参皂苷ro、竹节参皂苷iva。
29、根据本发明的一些实施例,所述对照品溶液的质量浓度均为0.1~1mg/ml。
30、进一步地,所述对照品溶液的溶剂为醇溶液或醇水混合溶液。
31、更进一步地,所述溶剂为体积百分数为50~70%的甲醇水溶液、体积百分数为50~70%的乙醇水溶液或水;优选地,所述溶剂为体积百分数为50~60%的甲醇水溶液;更优选地,所述溶剂为体积百分数为60%的甲醇水溶液。
32、本发明的第二方面,提供一种竹节参标准汤剂特征图谱的构建方法,将对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液分别经高效液相色谱法测定,标定共有峰,即得;
33、所述特征图谱的特征峰至少包括l-腺苷、尿苷;
34、所述高效液相色谱法的条件包括:
35、色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
36、以甲醇为流动相a,以体积百分数为0.2~0.4%的甲酸水溶液为流动相b,梯度洗脱;
37、所述梯度洗脱的条件为:
38、
39、表中百分号的含义为体积百分数。
40、根据本发明的一些实施例,所述流动相b为体积百分数为0.2~0.3%的甲酸水溶液;优选体积百分数为0.3%的甲酸水溶液。
41、根据本发明的一些实施例,所述色谱柱为welch ultimate aq-c18。
42、根据本发明的一些实施例,所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm,5μm。
43、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:流动相的流速为0.8~1.2ml/min;优选1.0ml/min。
44、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:色谱柱的柱温为25~35℃;优选30℃。
45、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:进样量为5~20μl;优选5μl。
46、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的条件还包括:检测波长为254nm。
47、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱法的检测器为紫外检测器。
48、根据本发明的一些实施例,所述高效液相色谱的理论塔板数按l-腺苷峰计算,不低于5000。
49、根据本发明的一些实施例,所述供试品溶液的制备步骤包括:将竹节参标准汤剂与溶剂混合,超声,即得。
50、根据本发明的一些实施例,所述供试品溶液的质量浓度为10~50mg/ml。
51、进一步地,所述试品溶液的溶剂为水或醇水混合溶液。
52、更进一步地,所述溶剂为体积百分数为50~70%的甲醇水溶液、体积百分数为50~70%的乙醇水溶液或水;优选地,所述溶剂为体积百分数为50~60%的甲醇水溶液;更优选地,所述溶剂为体积百分数为50%的甲醇水溶液。
53、根据本发明的一些实施例,本发明所述超声条件包括以下i-iii中的至少一项:
54、i.功率:400~600w;
55、ii.频率:30~50khz;
56、iii.时间:20~40min。
57、根据本发明的一些实施例,所述对照品溶液的制备步骤包括:将对照品与溶剂混合,即得。
58、根据本发明的一些实施例,所述对照品为l-腺苷、尿苷。
59、根据本发明的一些实施例,所述对照品溶液的质量浓度为0.1~1mg/ml。
60、进一步地,所述对照品溶液的溶剂为醇类溶剂;优选地,所述醇类溶剂为甲醇。
61、根据本发明的一些实施例,所述对照药材溶液的制备步骤包括:将对照药材与溶剂混合,超声,即得。
62、根据本发明的一些实施例,所述对照药材溶液的质量浓度为10~50mg/ml。
63、根据本发明的一些实施例,本发明所述溶剂为醇或醇水混合溶液;
64、根据本发明的一些优选的实施例,所述溶剂为体积百分数为50~70%的甲醇水溶液、体积百分数为50~70%的乙醇水溶液或水。优选地,所述溶剂为体积百分数为50~60%的甲醇水溶液;更优选地,所述溶剂为体积百分数为50%的甲醇水溶液。
65、根据本发明的一些实施例,所述超声条件包括以下i-iii中的至少一项:
66、i.功率:400~600w;
67、ii.频率:30~50khz;
68、iii.时间:20~40min。
69、根据本发明的一些实施例,所述特征图谱包括四个特征峰,其中,以l-腺苷参照物峰对应的2号峰为s峰,计算其他特征峰的相对保留时间,所述特征峰的相对保留时间应在规定值的±10%范围之内,规定值为:1号峰0.75、3号峰2.29、4号峰2.90,1号峰对应尿苷。
70、本发明的第三方面,提供上述的含量测定方法或构建方法在检测竹节参标准汤剂的质量中的应用。
71、有益效果:
72、本发明提供了一种竹节参标准汤剂的hplc特征图谱及含量测定方法。确定了四个共有峰,所构建的hplc特征图谱中色谱峰能够实现较好分离,色谱峰形好,特征图谱信息丰富,可以全面的反应竹节参标准汤剂的主要化学成分信息,整体控制竹节参标准汤剂中的特征成分,能有效保证竹节参标准汤剂的整体质量的稳定性,使竹节参标准汤剂的质量控制技术更为完善、科学;且本方法操作简单,具有精密度高、稳定性好、重复性好及准确度高等优势,为中药材质量鉴别提供有效依据。
73、定义:
74、本发明所述的竹节参均指竹节参的干燥根茎。
75、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述,并且,部分地从说明书中变得显而易见,或者通过实施本发明而了解。